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| BCR/ABL和SEA双基因重组载体的构建和表达 | |
| 引用本文： | 田红霞,林晨,查显丰,周羽竝,黄欣,高永鹏,李扬秋.BCR/ABL和SEA双基因重组载体的构建和表达[J].暨南大学学报,2010,31(4). |
| 作者姓名： | 田红霞 林晨 查显丰 周羽竝 黄欣 高永鹏 李扬秋 |
| 作者单位： | 1. 暨南大学医学院,微免教研室,广东,广州,510632 2. 暨南大学医学院,血液病研究所,广东,广州,510632 3. 暨南大学医学院,生化教研室,广东,广州,510632 |
| 基金项目： | 广东省自然科学基金，广东省科技计划项目，广州市科技计划项目 |
| 摘 要： | 目的:构建和表达含BCR/ABL融合基因和葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核双表达质粒.方法:利用RT-PCR技术从K562细胞中扩增出含BCR/ABL融合位点基因片段,提取金黄色葡萄球菌基因组DNA扩增出SEA基因,分别将两基因片段连在pIRES载体的多克隆位点A和B上,构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA- pIRES-BCR/ABL重组质粒.将重组质粒转染K293细胞,RT-PCR鉴定重组质粒在真核细胞的转录情况, SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白在真核细胞的表达.结果:成功扩增出BCR/ABL和 SEA基因片段;双酶切鉴定BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL重组质粒中含有BCR/ABL和SEA基因,测序证实完全正确;将重组质粒转染K293细胞后,经 RT-PCR扩增鉴定,插入到重组质粒的BCR/ABL和SEA基因能在真核细胞正常转录,经SDS-PAGE电泳鉴定重组质粒能够在真核细胞中表达BCR/ABL和SEA蛋白.结论:成功构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL真核双表达质粒,可在真核细胞中正常转录并表达BCR/ABL和SEA蛋白. |
| 关 键 词： | BCR/ABL融合基因 金黄色葡萄球菌肠毒素A 慢性粒细胞白血病 DNA疫苗 |
Construction and expression of eukaryotic coexpression plasmid containing BCR/ABL gene and SEA gene |
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| TIAN Hong-xia,LIN Chen,CHA Xian-feng,ZHOU Yu-bing,HUANG Xin,GAO Yong-peng,LI Yang-qiu.Construction and expression of eukaryotic coexpression plasmid containing BCR/ABL gene and SEA gene[J].Journal of Jinan University(Natural Science & Medicine Edition),2010,31(4). | |
| Authors: | TIAN Hong-xia LIN Chen CHA Xian-feng ZHOU Yu-bing HUANG Xin GAO Yong-peng LI Yang-qiu |
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