太子参对心肌梗死后慢性心衰大鼠的保护作用及对基质金属蛋白酶的影响

目的:研究太子参对心肌梗死后慢性心衰大鼠心功能与心室组织基质金属蛋白酶(MMPs)的作用.方法:采用结扎大鼠冠状动脉复制慢性心衰大鼠动物模型,以血流动力学指标分析心功能,体重指数、羟脯氨酸含量以及病理组织学检查分析心肌纤维化,RT-PCR与酶谱法分析MMP-2与MMP-9的mRNA表达与活性.结果:大鼠冠脉结扎6周后,心功能显著紊乱;体重指数、羟脯氨酸含量以及病理组织学检查分析结果提示心肌纤维化;左心室组织MMP-2与MMP-9的活力增加,mRNA水平提高.太子参水煎液连续灌胃给药5周,可以显著改善心衰大鼠血流动力学,抑制左心室组织MMP-2与MMP-9的活力及mRNA的水平.结论:大鼠冠脉结扎6周形成慢性心衰模型,太子参水煎液可改善大鼠急性心肌梗死后的慢性心衰,其机制可能与抑制MMP的表达与活力,从而抑制心肌纤维化,改善心功能.     

海南汉族高血压人群血管紧张素转换酶基因多态性研究

采用聚合酶链反应(PCR)技术,对海南汉族106例高血压患者和97例汉族正常人的血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)多态性检测,观察DD,DI,II基因型频率及等位基因频率,并对所有普通PCR定为DD型的样本进行插入特异性PCR检测,以减少误分型率.结果显示:高血压组DD,DI,II基因型频率分别为16.0%,28.3%,55.7%;D及I等位基因频率分别为30.2%,69.8%.正常对照组DD,DI,II基因型频率分别为15.5%,44.3%,40.2%;D及I等位基因频率分别为37.1%,62.8%.两组之间的DD,DI,II基因型频率及D,I等位基因频率均有显著性差异(P<0.05).高血压组与正常对照组比较,体重指数(BMI)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均有显著性差异(P<0.05);高血压组收缩压、舒张压与正常对照组有显著性差异(P<0.05);高血压组和正常对照组的D等位基因频率都比I等位基因频率低;ACE基因I/D多态性与汉族高血压的发病有相关性,是汉族高血压的主要致病基因.     

95例黎族的β—地中海贫血基因类型分析

本文对海南岛黎族学生1726人进行普查,采用红细胞脆性试验阳性和血红蛋白A_2增高两项指标,筛选出β—地中海贫血对象149人,占调查总人数8.6％。随机对其中95例采用PCR扩增技术与ASO探针杂交法,应用7对寡核苷酸探针B—地中海盆血CD41/42.CD17.—28.—29CD43.CD71/72和ⅣS—Ⅱ654)分析突变基因类型。其结果:β—地贫CD41/42(—TCTT)基因型杂合子90例,占基因分析总例数94.7％,—28(A→G)基因型杂合子1例,其余4例尚未清楚。根据上述分析结果,笔者认为海南岛纯系黎族人群中β—地中海贫血病的基因类型为β—地贫CD41/42(—TCTT)。这一研究结果能为黎族优生和开展β—地贫产前基因诊断提供了依据。     

杂交捕获抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的体外翻译

体外转录载体ｐＳＰ７２—Ｃ１２和ｐＳＰ７２—Ｃ１．４分别经ＸｂａⅠ和ＸｈｏⅠ酶切线性化后，用ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶与Ｔ７ＲＮＡ聚合酶进行体外转录得到编码人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的ｍＲＮＡ全序列（３．７ｋｂ）及与其５’端编码区的起始密码子ＡＵＧ上游区域互补的反义ＲＮＡ片段（１．４ｋｂ）。等摩尔数的正、反义ＲＮＡ通过酚相乳浊杂交技术进行分子杂交。在网织红细胞裂解物体外翻译系统中，正义ＲＮＡ能正常地翻译出蛋白质；而反义ＲＮＡ与正义ＲＮＡ杂交可阻断翻译的进行。     

耐热FD DNA多聚酶在PCR中的应用条件

探索了用于多聚酶链式反应(PCR)的FD DNA多聚酶的最适反应条件在100μl的反应液中含有25 mmol/L的Tris-HCl(pH8.0),25 mmol/L的(NH_4)_2SO_4,1.5 mmol/L的MgCl_2,200 μg/ml的明胶,dNTP各200 μmol/L,模板量为3.3×10～(-2)Pg,引物量各为290 nmol/L,1～2 U的耐热FD DNA多聚酶,30次循环反应的系统为通用PCR最适反应系统。应用这一反应系统,混迹于大量DNA分子中的特定DNA片段可借助于琼脂糖凝胶电泳专一性地、快速而有效地检出。     

利用噬菌体T＿7RNA聚合酶在大肠杆菌（E．coli）中引导人尿激酶原克隆基因的表达

我们将人尿激酶原基因（ｐｒｏ－ＵＫ）重组到含Ｔ＿７基因１０启动子的质粒（ｐＥＴ３ｃ）中，用异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）的ＢＬ２１（ＤＥ３）菌株中进行表达。经纤维蛋白平板测活法测得表达产物存在于包含体中。经变性和复性处理后，表达量达每升培养液１６００ＩＵ．用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法鉴定表达产物为单一条带。分子量在４３ｋＤａ左右，略低于天然５４ｋＤａｐｒｏ－ＵＫ。这可能与Ｅ．ｃｏｌｉ中缺乏糖基化酶有关。     

人胰岛素原类似物（B—Arg—Arg—A）基因的构建和表达

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法将Ｃ肽为６个氨基酸残基的胰岛素原类似物基因删除突变成Ｃ肽仅为２个精氨酸残基的胰岛类原类似物基因，即把ＰＵＣ１８ＢＣ＇Ａ改建为ＰＵＣ１８ＢＲ２Ａ。再将ＰＵＣ１８ＢＲ２Ａ与ＰＪＧ１０５且为表达质粒ＰＪＧ１０７，使Ｂ－Ａ－Ａ与ＰＪＧ１０５编码的一种多肽成融合蛋白在大肠杆菌体系中表达。融合蛋白占细菌蛋白总量的５８％。表达产物具有人胰岛素放射免疫活性。     

应用聚合酶链反应与斑点印迹杂交产前诊断β地中海贫血

应用聚合酶链反应(PCR)体外基因放大,~(35)S 标记β-珠蛋白基因探针与 DNA分子杂交斑点印迹新方法,对携带者进行了基因分析,对胎儿进行了产前诊断检测。对3对夫妇的检验显示,他们分别是41-42,-28或17突变基因携带者,2例胎儿正常,1例为杂合子。     

人骨髓单核细胞表面分化抗原CD14基因的扩增、克隆和鉴定

根据人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４（ｈＣＤ１４）基因的核苷酸序列，设计ｈＣＤ１４基因５＇端和３＇端的两个引物．以人血中提取的基因组总ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术特异性扩增该基因１２４５加的编码序列．扩增产物经Ｘｂａｌ、ＫｐｎⅠ双酶切后，克隆到ｐＵＣ１８质粒ＸｂａＩ－ＫｐｎＩ位点间，随后转化大肠杆菌ＪＭ１０９．用ＰＣＲ方法筛选出重组菌落．经酶切和序列分析方法检测后，证明获得了含ｈＣＤ１４基因的重组克隆ｐＨＣＤ１４．巳测出的插入片段５＇端部分中包含着人ＣＤ１４基因４８８ｂｐ的序列，与巳报道的相应ＤＮＡ序列相比具有９９％的同源性．     

P53与结直肠癌的表现观察

用套式聚合酶链式反应—单链构象多态分析法对３０例结肠癌的ｐ５３基因突变进行了观察，检测了第５～８四个外显子，发现２１例有ｐ５３基因突变（７０％）。３０例肠癌按临床Ｄｕｋｅｓ分期：Ａ期２例皆有突变，Ｂ期１１例有突变者６例（５５％），Ｃ期８例有突变者５例（６３％），Ｄ期９例有突变者８例（８９％），按病理分型则１３例有１１例突变（８５％），管状腺癌６例有ｐ５３基因突变４例（６７％），低分化腺癌５例中检出３例有突变（６０％），在６例粘液腺癌中测出３例有突变（５０％）。从临床分期看愈晚突变率愈高。而病理分型恶性程度高者突变率反低，这是因为缺失率未计数之故。最后讨论了突变率与预后的关系