抗冻蛋白基因转化植物的研究展望

重新评估了用美洲拟鲽抗冻蛋白基因转化烟草的研究，认为植物耐寒性状的提高与转基因植物中冻抗蛋白含量呈正相关是转基因植物成功的关键性指标。美洲拟鲽抗冻蛋白的空间结构与冷冻诱导蛋白相似而且都保护细胞膜免受冻害，因而提出了用冷诱导蛋白调节元的顺式作用元件和反式作用因子的调控序列来控制抗冻蛋白基因在植物中冷诱导表达的思路。     

五个昆明小鼠封闭群遗传生化位点比较研究

目的为了进行昆明小鼠标准化研究,探讨了不同种群遗传生化位点的差异.方法随机选取北京生物制品研究所、长春生物制品研究所、华北药厂、中国医学科学院实验动物研究所和中国药品生物制品检定所昆明小鼠各40只(雌雄各半),测定Es3等十三个生化位点的基因型分布.结果各群在AKP1、Es1和Trf位点均为一个表现型,即b型;北京生物制品研究所、长春生物制品研究所和华北药厂的Ce2为单一的a型;Es3位点除北京生物制品研究所和长春生物制品研究所外,均无a型、ac和ab型;中国医学科学院实验动物研究所种群还在Hbb(s)和Idh1(a)位点只有一种表现型.各封闭群的基因频率在多数位点上处于平衡状态,遗传距离计算的结果表明,基因分布与种群的来源有密切关系.结论不同昆明小鼠种群之间存在差异,需要进一步标准化.     

甘蓝磷酯酶D HKD2功能区基因片段的克隆与反义表达载体的构建

以甘蓝(Brassiaca oleracea)为材料，取幼叶分离mRNA，反转录合成cDNA，以cDNA第一链为模板，通过PCR扩增，获得甘蓝磷酯酶D(Phosphorate　Lipid　Dehydrolase，PLD)HKD2功能区的基因片段．对其进行Blast分析，结果表明，分离的目的片段核苷酸序列与Genbank中报道的甘蓝PLD基因相比同源率为99．7％，只有2个碱基发生改变．将得到的PLD基因片段插入植物表达载体pAT940，构建了PLD基因反义表达载体pATC—rPLD，为下一步进行抗逆转基因作物选育打下基础．     

牛泡沫病毒BFV3026 gag基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

从牛泡沫病毒BFV3026感染的胎牛肺细胞中提取Hirt DNA,PCR扩增BFV3026　gag基因。序列分析确证后，将其克隆于原核表达载体pET32A，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，使Gag蛋白得以高效表达。SDS－PAGE及Western blot证实：表达蛋白占菌体总蛋白的40%，本工作的完成为Gag蛋白功能的研究奠定基础。     

水稻精细胞基因RSSG58启动子的克隆分析及表达载体构建

根据分布的水稻基因组测序的比较和水稻精细胞优势表达的RSSG58基因cDNA序列，以水稻品种“桂朝2号”黄化苗组DNA为模板，用PCR方法克隆出RSSG58在起始密码子以前的上游调控序列Pr58，经过Pr58启动子进行的鉴定和分析表明，具备大多数高等植物启动子的保守元件，预计它的RSSG58基因在特异表达方面具有一定的作用。为了鉴定RSSG58基因的基本启动子元件，将RSSG58基因5′侧翼序列做缺失片段分析，由PCR从Pr58中得以3个不同大小两端带有HindⅢ，BamHⅠ酶切位点的片段Pr58Ⅰ，Pr58Ⅱ和Pr58Ⅲ，定向插入载体pMGFP4(pBI221改建，报告基因为GFP）中，取代原有的CaMV35S启动子，构建了由驱动报造基因GFP的植物表达载体pRGFPⅠ，pRGFPⅡ和pRGFPⅢ，用于农杆菌介导法水稻遗传转化。其目的是为进一步在模式植物中研究其表达功能奠定基础。     

厚荚相思组织培养与快速繁殖

以5年生厚荚相思(Acacia crassicarpa)的萌芽茎段为外植体进行了组织培养的初步研究，结果表明：改良的MS 6-BA2．0mg／L NAA0．2mg／L培养基能够较好地诱导芽的分化和增殖；适宜的继代增殖培养基为改良MS 6-BA1．5mg／L NAA0．2mg／L；较为想的生根培养基为1／2MS IBA0．5mg／L，生根率达95．0％；生根苗的移栽基质以黄心土的移栽效果最好，移栽成活率达90．0％。     

极端嗜热厌氧纤维素分解菌基因文库的构建及其内切葡聚糖酶基因片段的克隆

以从云南邦拿掌温泉中分离、纯化的高温厌氧纤维素分解菌邦2菌(Cadicellulosiruptor)为材料,制备其总DNA,经限制性核酸内切酶EcoRⅠ部分酶切后,在T4DNA连接酶的作用下与经EcoRⅠ完全酶切、去磷酸化的质粒载体pUC18连接,然后转化E.coliJM109,建立了邦2的基因文库,经筛选鉴定得到6.3×103个重组子;重组子经刚果红平板验证:约有23.5%菌落呈现透明圈;重组子经EcoRⅠ酶切验证显示:重组质粒均含有外源DNA插入片段.结果表明已克隆到邦2菌纤维素酶系中的内切葡聚糖酶基因(ED基因)片段.     

玉米候选抗病相关基因片段的克隆

根据已经克隆的植物抗病基因和候选抗病基因的保守序列P-loop、Kinase-2及GLPLAL设计一系列简并引物，利用同源序列扩增法，对玉米的基因组DNA进行PCR扩增，并对5个扩增产物的克隆进行测序．测序结果在Gen—Bank内进行BLAST检索，发现A9克隆序列与玉米BAC库中的206C17克隆的部分序列有很高的相似性，并且距离GenBank内注册的玉米抗锈病基因rpl位点中的rpl-3基因、rpl-4基因分别约有66Kb、20Kb，且A9克隆序列在玉米基因组中是单拷贝的．这为玉米抗锈病性状的分子标记辅助选择和抗锈病基因的克隆奠定了良好的基础。     

新疆杨植株再生体系的建立

从培养基筛选、激素调控等方面探索建立新疆杨高效植株再生体系。结果表明，不同种类的细胞分裂素影响叶盘不定芽分化频率，其中较低浓度的TDZ(Thidiazuron)可显提高叶盘不定芽分化频率，生长素的种类与浓度对叶盘不定芽分化影响不显。较适合新疆杨不定芽分化的培养基为：1／2MS TDZ0．005mg／L BA0．25mg／L IAA0．5mg／L；壮苗培养基为：MS BA0．2mg／L IAA0．2mg／L；生根培养基为：1／2MS。在此条件下，不定芽分化频率可达100％。     

水稻光温敏雄性不育基因连锁标记的分离与鉴定

两系法杂交稻是一种利用水稻杂种优势的重要途径，主要依据水稻光温敏雄性不育系在不同条件下的育性转换用于配制杂交种．以培矮64S(PTGMS)与明恢63杂种自交的F2代为供试材料，采用随机放大多态性DNA(RAPD)技术分离与培矮64S的PTGMS基因连锁的分子标记．在F2代2个分别代表可育和不育的群体以及亲本株系中，采用100个RAPD引物扩放基因组DNA筛选多态性DNA片段．RAPD引物S8产生的DNA片段中，除重复顺序外，有一个长度为0．85kb片段为单拷贝．分子杂交表明，这一单拷贝标记与培矮64S的PTGMS基因连锁．