一株新铜绿假单胞菌噬菌体SRT6的分离以及全基因组序列分析

分离一株新铜绿假单胞菌噬菌体,进行生物学特征分析,全基因组测序和比较基因组学分析.了解该噬菌体与其他假单胞菌噬菌体之间的亲缘关系以及它的潜在应用价值.利用双层平板法分离纯化噬菌体,利用酚氯仿抽提基因组,利用Illumina Hiseq测序平台对基因组测序,利用生物信息学进行基因组和比较基因组学分析.分离到一株新的烈性铜绿假单胞菌噬菌体SRT6,其基因组全长91 364bp,G+C含量49.3%,存在182个蛋白质编码基因,其中的96个与已知功能的蛋白质具有相似性,无tRNA和tmRNA.比较基因组分析发现,噬菌体SRT6属于一个新物种.分离鉴定出一株烈性铜绿假单胞菌噬菌体SRT6,并发现它属于一个新种噬菌体,为未来利用噬菌体治疗耐药铜绿假单胞菌感染打下坚实的基础.     

污水处理系统中噬菌体的浓缩分离和宏合格基因组DNA的提取

以城市污水活性污泥为材料,经分级粗滤、超滤、等密度梯度离心等方法获得高纯度噬菌体悬液,常规SDS方法提取噬菌体DNA.荧光显微镜观察和计数表明浓缩液中噬菌体的纯度和丰度都显著提高;利用透射电镜对浓缩液进行观察,噬菌体的形态呈杆状、线状等多样;基因组提取结果显示,得到的DNA样品纯度高,大小介于20~25kb之间,电泳条带清晰,整个泳道没有弥散现象;利用细菌通用引物对提取的噬菌体DNA进行16SrDNA扩增阴性,说明所得到的噬菌体纯度较高,没有细菌污染.通过实验获得一种高效快捷的从污水处理系统中纯化浓缩噬菌体并进一步获得噬菌体宏基因组DNA的方法,同时为研究环境噬菌体生态分布、多样性组成奠定基础.     

“善良的”病毒：噬菌体与致病细菌之战

噬菌体是一种病毒,但是这种病毒却是“善良”的,因为它可以治疗细菌引起的感染,有效地杀死细菌。然而,使用噬菌体杀灭细菌的疗法和技术并非十分成熟,许多国家,诸如美国,当局依然限制使用噬菌体治疗。     

一种制备高效价噬菌合格悬液的有效方法

介绍了一种制备高效价噬菌体悬液的方法,并将其产量和效价与传统方法所得结果进行了比较,结果证明该方法所得噬菌体悬液的效价和产量最高。     

林可链霉菌噬菌体φSL60启动子的序列测定与分析

通过测定林可链霉菌噬菌体ΦSL60启动子活性片段的碱基,分析了该启动子的结构,核糖体结合位点,转录起始位点和翻译起始密码子等功能元件,启动子PSL活性区域内三处具有类似于原核生物启动子－10区（TAG－Pu-Pu-T)和－35区（TTGAC－Pu)的特征,五处具有只类似于原核生物启动子－10区（TAG－Pu-Pu-T)的特征,本文比较分析了TSL与链霉菌启动子的序列,发现多处具有链霉菌转录起始位点保守序列的结构特征,对PΦSL的DNAG＋C含量分析也表明它符合链霉菌启动子的高G＋C含量。     

胰岛素受体短肽配体的亲和筛选

以高效表达胰岛素受体的中国仓鼠卵巢细胞(CHO-IR)为筛选靶标, 经过一轮酸洗脱和三轮特异性竞争洗脱筛选, 成功地富集了与胰岛素受体结合的重组噬菌体克隆. 随机挑 取噬菌体克隆检测其与胰岛素受体的结合活性, 选取结合力最强的6个单克隆, 测得其与 CHO-IR之间的Ｋ_d值为纳摩级, 表明为特异性结合; 经序列分析表明短肽之 间有明显的基序存在.     

南昌链霉菌与放线菌噬菌体ΦC31相互关系的研究

经点滴法和平板法检测,放线菌噬菌体ΦC31及大部分衍生噬菌体能感染南昌链霉菌,但这些噬菌体的DNA却不能南昌链霉菌。通过比较来自不同宿主的KC515噬菌体悬液对为铅青链霉菌和南昌链霉菌的侵染效率,发现南昌链霉菌对ΦC31及衍生噬菌体具有很强的限制性。Southern杂交实验表明,ΦC31衍生噬菌体KC301（C^ attP^ ）可以整合到南昌链霉菌NS－32－26的染色体上形成溶源,其溶源菌自发释放KC301,但热激诱导后并没有提高释放频率。通过脉冲电泳技术和Southern杂交的方法定位了KC301在南昌链霉菌NS－32－26染色体上形成溶源的附着位点（attB)。这些结果均有利于利用以ΦC31为基础的载体对南昌链霉菌进行分子生物学的研究。     

一株尿路致病性大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及生物学特性分析

本研究从尿路感染患者尿液样本中分离、鉴定大肠杆菌裂解性噬菌体,对其裂菌活性等生物学特性进行分析,为探索应用噬菌体治疗耐药性尿路致病性大肠杆菌导致的尿路感染奠定基础。利用双层琼脂平板法,从尿液样品中分离、纯化,得到一株能裂解大肠杆菌的噬菌体。通过电镜观察噬菌体形态,测定其裂菌谱、最佳感染复数、一步生长曲线、以及热稳定性、紫外敏感性和氯仿敏感性等生物学特性。结果显示,成功分离、纯化得到一株能高效裂解大肠杆菌的噬菌体vB_EcoS_JA2,该噬菌体可形成圆形、透明、边缘整齐的噬菌斑;电镜观察噬菌体的头部呈六边形,含可收缩性尾部,尾部较长;一步生长曲线显示,该噬菌体的潜伏期为10 min、爆发期为60 min、裂解量高达124 PFU/Cell,其最佳感染复数为0.1;JA2具有较好的热稳定性,且对紫外线具有一定的抵抗力。分离鉴定的噬菌体JA2能裂解致病性大肠杆菌,具有稳定性好,抵抗力强的特点,为应用噬菌体治疗致病性大肠杆菌导致的尿路感染提供了新材料。     

噬菌体D29的免疫原性及安全性评价

目的对噬菌体D29的免疫原性及安全性进行评价。方法将BALB／C小鼠随机分为噬菌体D29滴鼻暴露组（剂量9×10^8PFU）、噬菌体D29皮下注射组（剂量9×10^8PFU），phagebuffer滴鼻组、phagebuffer皮下注射组、生理盐水滴鼻组、生理盐水皮下注射组、空白对照组，每组动物第一周第一天、第三天暴露一次，以后每周第一天暴露一次，共暴露6周。观察暴露期间噬菌体中和抗体的动态变化、暴露6周后血清中IL-2、IL-4、IL-12、IFN-1、TNF-α和NO的含量及CD4／CD8比例变化，小鼠碳粒廓清率变化、在饲养过程中各组动物的进食量以及活动、体重、生存情况，以及暴露结束后解剖取得脏器作病理学比较。结果D29滴鼻暴露组在第7天即产生低效价的中和抗体，第14天抗体效价下降，第28天之后不能检测到中和抗体，D29皮下注射组中和抗体从第7天开始产生，第21天上升，之后趋于稳定，其余组均无中和抗体产生。各组小鼠血清中细胞因子、CIM／CD8比例、碳粒廓清率以及饲养过程中各组动物的进食量以及活动、体重、生存情况均无明显差异。病理学上各实验组脏器除脾脏外均有轻微充血、水肿表现。结论D29具有抗原特性，可刺激机体产生中和抗体，但不会对机体的安全产生威胁。     

1株盐湖噬菌体CJL-7的分离及其生物学特性研究

以嗜盐菌为宿主,从山西省运城盐湖湖水中分离出1株噬菌体,经浓缩纯化后用电镜观察其形态,并进行限制性酶切、蛋白组成分析及生物学特性研究.研究结果表明:分离获得的CJL-7为双链DNA烈性噬菌体,属微小噬菌体科; 其头部为正多面体结构,直径约为80 nm,在其衣壳中至少含3种主要结构蛋白; 该噬菌体含有脂质包膜,宿主范围较广; 低盐处理对该噬菌体的效价几乎没有影响,其活性在30～50 ℃范围内较稳定,在40 ℃时效价最高,在碱性条件下活性更强.