一种新的生物效应调节剂——PSP——Ⅰ.PSP的药理学研究

本文报道作为生物效应调节剂的PSP对正常动物、负瘤动物和施用化疗药物小鼠的肿瘤免疫学研究结果。口投或腹腔注射PSP(0,5～2.0g/kg×9或200～400rug/Kg×4)能明显提高小鼠对印度墨汁的廓清率(P<0.01),其作用和刺五茄相似;口投1.5g/kg×5剂量的PSP可使小鼠产生IL-2量比生理盐水组高1倍(P<0.01);用含150～800ug/mL PSP的细胞培养液,在Con A存在下,能使牌T淋巴细胞增长1.5～4.0倍;用100～1000ug/mL PSP的细胞培养液培养人血白细胞,其诱生的。和Y干扰素量比对照高2～4倍;PSP用于注射环磷酰胺小鼠,其白细胞数有不同程度的回升,口投组(2.25～4.00g/kg)从40回升到69～74千/mm~3腹腔注射组(200～400mg/kg)从60回升到80～86千/mm~3,PSP还能消除环磷酰胺对IL-2的抑制作用,使注射环磷酰胺小鼠IL-2量从1557cpm上升到2374cpm(P<0.01);PSP对迟发超敏反应(DTH)也有类似效应,它能使被环磷酰胺抑制的DTH反应得到恢复(P<0.05)。 PSP用于负Sarcoma肉瘤小鼠,能使小鼠因负瘤而萎缩的胸腺重量得到增加(P<0.05)并能提高负瘤鼠的抗体和补体C_3含量(P<0.01)。     

树突状细胞瘤内注射联合放疗对小鼠肾癌细胞因子的影响

目的研究树突状细胞(Dendritic cell,DC)瘤内注射联合放疗对小鼠肾癌治疗后脾细胞分泌细胞因子水平的变化。方法用Renca肾癌细胞(2.5×106/只)制作小鼠皮下移植瘤模型,接受肿瘤局部放射治疗,7Gy 6脉伏电子线/次,并在肿瘤部位直接注射未负载肿瘤抗原的DC,1×106/次,第28 d处死小鼠。检测肿瘤生长速度和瘤体重量。ELISA检测小鼠脾细胞IL-2I、FN-γI、L-4、IL-10和TNF-α分泌水平。结果与肿瘤组比较,DC联合放疗组小鼠的肿瘤生长速度明显缓慢,肿瘤体积明显减小,脾细胞分泌IL-2、IFN-γ和IL-4的能力显著提高。结论瘤内树突状细胞注射联合放疗能够有效地抑制BALB/c小鼠肾癌的生长。     

p53基因联合热放疗治疗晚期软组织肉瘤的临床研究

 为评价重组人p53腺病毒注射液(rAdp53)结合热疗治疗软组织肉瘤的疗效及安全性,2001年10月至2012年6月,采用rAdp53,结合热疗放疗,治疗晚期软组织肉瘤30例.基因治疗采用瘤内注射或腹腔灌注rAdp53,每周1次,每次1×10¹²VP,平均8次.所有患者均配合热疗,平均热疗8次.放疗每次2Gy,每周5次,剂量为16~70Gy/8~35次/2~8周,平均56.3Gy.30例患者在治疗前后观测肿瘤变化,以CT评价治疗后2个月的疗效.结果表明,病灶缩小超过或等于50%者9例,介于25%~50%者8例,缩小小于25%者12例;病灶增大者1例.生存率1年为(58.6±0.091)%,2年为(22.4±0.079)%,3年为(11.2±0.069)%,4年为(5.6±0.052)%.30例患者共接受216次rAdp53瘤内注射,除1例出现过性发热外,未发现其他不良反应,未影响热疗和放疗.研究表明,软组织肉瘤瘤内注射rAdp53结合热疗、放疗安全、有效.rAdp53是一种很有潜力的治疗恶性软组织肿瘤的基因治疗药物.     

恩度联合紫杉醇对三阴型乳腺癌移植瘤的影响

目的:通过观察人三阴型乳腺癌在裸鼠模型中血管正常化后对紫杉醇的反应,探讨其疗效是否优于紫杉醇.方法:将人三阴型乳腺癌MDA-MB-231细胞株种植于BALB/c-nu雌裸鼠右下腹部皮下,随机将符合入组标准的28只移植瘤荷鼠分成4组,每组7只,A组,每天每次腹腔内注射生理盐水(质量分数10 mg/kg),连续17 d;B组,每天每次腹腔注射恩度(质量分数10 mg/kg),连续17 d;C组,第6、12天腹腔注射紫杉醇(质量分数10 mg/kg),余同A组;D组,第6、12天腹腔注射紫杉醇(质量分数10 mg/kg),余同B组.测量移植瘤的长径和短径,进行病理学检测.结果:D组移植瘤体积小于A组、B组(P0.05),C组移植瘤体积小于A组及B组(P0.05),D组和C组移植瘤体积无差别(P=0.436).B组、C组、D组的抑瘤率分别是14.61%、39.08%、54.79%.解剖各组荷鼠未见远处转移病灶.病理检查微血管密度,D组C组=B组A组.Ki67,D组与C组A组与B组,D组与C组无差别(P=0.649).结论:使用恩度后在时间窗内联合紫杉醇有明显抑瘤作用,但疗效未优于紫杉醇.     

子宫内膜异位症患者腹腔液及血清TNF水平测定

为探讨子宫内膜异位症(内异症)患者腹腔液及血清中肿瘤坏死因子(TNF)的变化及意义。通过采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测39例内异症患者(Ⅰ-Ⅱ期17例,Ⅲ-Ⅳ期22例)及16例对照组(其他妇科手术,术中可见腹腔积液者)腹腔液及血清中TNF含量。发现内异症组腹腔液及血清TNF含量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。内异症组Ⅲ、Ⅳ期腹腔液TNF(62.37±13.7pg/mL)和血清TNF(53.64±17.4 pg/mL)均低于Ⅰ、Ⅱ期腹腔液(76.38±13.5 pg/mL)和血清(75.67±12.3 pg/mL)含量,差异均有统计学意义(P均<0.05);说明TNF在内异症发病中起重要作用,检测其含量变化有利于该病的诊断和治疗。     

多柔比星长效注射微球的评价和对小鼠肿瘤的抑制作用

主要考察了多柔比星(Dox)微球的理化性质、释放特性及其对荷瘤小鼠的抑制作用.以乳酸羟乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,用复乳法(w/o/w)制备载Dox长效注射微球;考察粒径大小、外观、包封率、载药量等理化性质;用紫外分光光度法检测了体外释放溶液中的药物含量,以荷Lewis肺癌小鼠的肿瘤质量和体积为指标观察Dox微球(Dox-MS)瘤内注射给药后的抗肿瘤活性.制备得到的微球球形圆整、分散性好,平均粒径为82.94 μm,包封率为92.67%,载药量为9.12%.微球体外第1天释放30.24%, 20 d累积释放91.85%.给药8 d后,Dox微球瘤内注射给药组与对照组相比肿瘤平均体积明显减小,抑瘤率与对照组相比具有极显著性差异(P<0.01),但与Dox溶液静脉、瘤内给药组相比无显著性差异.因此Dox微球对小鼠体内Lewis肺癌具有较好的抑制作用,其抑瘤效果与瘤内注射相同剂量的Dox溶液相当,但局部刺激性较小.     

X射线荧光光谱法用于不锈钢建材元素分析的方法研究

应用分子克隆技术,构建重组腺病毒质粒Adtrack-canstatin(Ad-can),并建立人卵巢上皮性癌移植瘤动物模型.动物模型建立后,将荷瘤裸鼠随机分为3组,Ad-Can、Ad-GFP和PBS对照组,每组6只.治疗采用肿瘤内局部多点注射4.0×1010PFU/ml病毒上清液或PBS液0.1 ml,共2次,注射间隔72小时.8天后肿瘤体积出现明显差异,Ad-can组明显小于对照组,P<0.01,而Ad-GFP和PBS对照组间无明显差异,P>0.05.另外,Ad-can组CD105明显减少,微血管密度降低,P<0.05.结果提示:Canstatin基因能明显抑制人卵巢上皮性癌的生长,其机制可能是通过抑制肿瘤新生血管形成起作用的.     

子宫内膜异位症患者腹腔液及血清TNF水平测定

探讨子宫内膜异位症(内异症)患者腹腔液及血清中肿瘤坏死因子( TNF)的变化及意义.采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测39例内异症患者(Ⅰ-Ⅱ期17例,Ⅲ-Ⅳ期22例)及16例对照组(其他妇科手术,术中可见腹腔积液者)腹腔液及血清中TNF含量.内异症组腹腔液及血清TNF含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0. 05).内异症组Ⅲ、Ⅳ期腹腔液[TNF(62.37±13.7) pg/mL]和血清[TNF(53.64±17.4) pg/mL]均低于Ⅰ、Ⅱ期腹腔液[(76.38±13.5) pg/mL]和血清[75.67±12.3) pg/mL]含量,差异均有统计学意义(P均＜0. 05); 说明: TNF在内异症发病中起重要作用,检测其含量变化有利于该病的诊断和治疗.     

表达抗PD-1抗体的溶瘤病毒在结肠癌腹腔移植瘤模型中的抗肿瘤作用

为了研究表达小鼠抗PD-1抗体(VT1093M)的溶瘤病毒对结肠癌腹腔移植瘤模型的抗肿瘤作用,利用BALB/c小鼠成瘤的小鼠结肠癌CT26-luc细胞株建立了结肠癌腹腔移植瘤模型。接种后第8天进行分组,设置生理盐水(normal saline, NS)组、病毒VT09X组和VT1093M组,每组5只,注射剂量为2.5×10⁷ pfu/250μL,NS注射250μL,每隔一天注射一次,共注射5次。末次注射后6 d,脱颈处死小鼠,提取外周血中CD45⁺细胞和腹水细胞,进行体外杀伤实验。治疗组初次出现荧光消失后第13天,进行再挑战实验。结果表明,造模实验确定最佳接种条件为200μL的2.5×10⁶个/mL细胞悬液;药效实验中,VT09X组和VT1093M组较NS组具有明显的肿瘤抑制效果,VT1093M组治疗期间出现肿瘤消失情况,较VT09X组抑瘤效果明显,但差异无统计学意义;再挑战实验中,VT1093M组均未出现肿瘤再次生长;在体外杀伤实验中,注射病毒组的外周血CD45⁺细胞在靶效比为1∶40时对CT26...     

天花粉素抗绒毛膜上皮癌作用的观察

用植物蛋白天花粉素作用于带有移植绒癌的裸鼠,观察天花粉素的抗癌作用。将16只带瘤裸鼠随机分为4组:组I是未用药的对照组,组Ⅱ、II、IV分别按每天0.375、0.75、1.5mg/kg由腹腔注射,与对照组比较,三个治疗组的肿瘤生长率明显下降(P<0.001)。平均生存时间有明显不同,I一Ⅳ组分别是8.25±0.5天、15.75±1.7天、12.75±1.7天和10.75±1.5天(P<0.01),证明天花粉素对绒毛膜上皮癌具有治疗作用,而组II疗效较组III、IV更为显著。     

昆虫细胞杆状病毒表达人生长激素的纯化及性质研究

在昆虫细胞杆状病毒中表达的人生长激素，经CM－52离子交换柱层析和Phenyl-Sepharose CL-4B疏水柱层析后，去除了93％杂蛋白。再用CNBr-activated Sepharose 4B亲和柱层析的方法，获得高纯度的生长激素样品。SDS－PAGE结果表明，纯化样品在SDS－PAGE图谱呈现一条带，分子量为22kD。Western杂交结果表明，纯化样品与生长激素标准品有相似的免疫活性。胰肽图谱分析结果显示纯化样品和标准品具有相同的一级结构。DNS－CL测N末端表明，纯化样品的N末端为苯丙氨酸，所有这些性质均与天然人生长激素相同。     

重组DNA技术在酿酒酵母遗传操作中的应用

在传统的食品和酿造工业中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）占有十分重要的地位。如今，这种简单的单细胞真核生物已成为遗传研究的一种模式。本文简要综述了重组DNA技术应用于酿酒酵母遗传操作的研究进展，并指出了重组DNA技术作为新的遗传操作的手段，其应用性明显优于经典的遗传操作方法.     

重组毕赤酵母体系生成PlUGT1蛋白适宜条件研究

通过单因素试验分别研究pH值和温度对重组毕赤酵母GS115/pPIZA-PlUGT1生长以及甲醇浓度、pH值和温度对诱导表达PlUGT1蛋白的影响.结果表明,pH6.5和30 ℃是培养重组毕赤酵母GS115/pPIZA-PlUGT1最佳的生长条件,重组毕赤酵母GS115/pPIZA-PlUGT1诱导表达蛋白的适宜条件为甲醇体积分数0.5%、30 ℃和pH5.0,该条件下培养72 h,培养液中的蛋白质量浓度为0.721mg/mL.     

用ELISA双抗体夹心法检测人重组白细胞介素2(rHuIL-2)在酵母菌中表达的研究

采用ELISA夹心法检测人重组IL-2在酵母菌中表达产物的免疫学活性.结果表明,本法具有特异性强、简易、快速和重复性好等特点,尤其对利用工程菌制备及纯化rlL-2过程中能较快地监测出是否有该产物表达.     

花生AhNCED1重组蛋白原核表达与二级结构初步分析

9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)是调控ABA生物合成的关键限速酶.根据花生叶片中克隆得到基因AhNCED1,构建融合蛋白重组表达载体,将重组质粒转化到大肠杆菌DH5a中诱导表达,SDS-PAGE分析显示在0.2 mmol/L IPTG、4 h、28 ℃的条件,目的蛋白以可溶形式高效表达,分子质量在66.0 ku左右.AhNCED1重组蛋白可与制备抗体特异性结合,呈现典型的不规则卷曲结构.     

人肿瘤坏死因子穿梭表达载体的构建

应用ＤＮＡ重组技术,将人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）ｃＤＮＡ插到质粒ＰＲＬ４３９的ＰｐｓｂＡ启动子下游,得到中间载体ＰＲＬ＿ＴＮＦ;再把ＰＲＬ＿ＴＮＦ上含ＰｐｓｂＡ和（ｒｈＴＮＦ）ｃＤＮＡ的片段连到穿梭载体ＰＤＣ＿８上,构建成穿梭表达载体ＰＤＣ＿ＴＮＦ．转化大肠杆菌ＴＧ１后,进行发酵培养．ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ分析和免疫印迹检测结果显示ｒｈＴＮＦ获稳定表达,分子量为１７ｋｕ．本研究结果为ｒｈＴＮＦ在蓝藻中的表达提供了技术基础．     

花生AhNCED1重组蛋白原核表达分析

9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶（NCED）是调控ABA生物合成的关键限速酶.根据花生叶片中克隆得到基因AhNCED1，构建融合蛋白重组表达载体，将重组质粒转化到大肠杆菌DH5a中诱导表达，SDS-PAGE分析显示在0.2mmol/L IPTG、4h、28℃的条件,目的蛋白以可溶形式高效表达，相对分子质量在66kD左右. AhNCED1重组蛋白可与制备抗体特异性结合，呈现典型的不规则卷曲结构.     

rhBMP-6的表达和纯化

骨形态发生蛋白(bone　morphogenetic protein，BMP)—6属于转化生长因子(transforming growth fac-tor)—β超基因家族，在骨的形成中具有重要作用，并受雌激素选择性上调．本研究利用RT—PCR从人胎盘组织中扩增BMP—6成熟肽的DNA片段，克隆到pGEx—5x—1中，构建GST—BMP6融合蛋白表达载体pGEx—BMP—6，转化E.coli DH5a．克隆质粒转化的工程菌，经IPTG诱导4h后，高效表达GST—BMP6融合蛋白，在SDS—PAGE上出现一新蛋白带，分子量约为42kD，约占总蛋白的25％，表达产物以包涵体形式存在．菌体超声破碎，经0．3％N—十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解包涵体，离心后的上清液加入0．6％　Triton　x—100整合SKL，然后利用谷胱甘肽Sepharose—4B亲和层析纯化．结合GST—BMP6的介质经洗涤、xa因子酶切得到纯度达95％的rhBMP—6蛋白。