实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用

实时荧光定量PCR（Real Time Quantitative PCR）是把酶动力学、核酸扩增与杂交、光谱分析和实时检测技术巧妙结合的一项技术；并且广泛应用于病毒学、遗传性疾病、肿瘤和癌症的诊断等方面．因此成为分子生物学研究中的重要工具，本文就此技术研究进展及其应用做一综述．     

温度和pH值对嗜水气单胞菌毒力基因表达的影响

为了解培养温度和pH值对嗜水气单胞菌的毒力基因表达以及致病性的影响，利用反转录PCR（RT—PCR）对4种基因的表达进行了研究。研究结果显示嗜水气单胞菌毒力基因的表达受温度和pH值影响，其中溶血素（AHH）、气溶素（AerA）、外膜蛋白（OMP）和粘附素（Aha）毒力基因在15℃、25℃和37℃下均能高效表达，在4℃AHH和AerA两基因也能持续表达，但OMP和Aha两基因的表达停止。在中性或偏酸性的条件下（pH5．0和pH7．0）4种毒力基因都得以表达，在碱性条件下（pH9．0）4种基因中只有AHH得以表达，而Aha等其它3个基因的表达减弱或停止。基因表达的研究结果得到鲫鱼攻毒试验结果的支持。此外，研究还表明细菌的毒力与鱼的体温也有关系。     

3N与TiNi系合金熔体的界面反应

以高纯氮化硼（BN）作为坩埚材料，对其应用于TiNi系合金熔炼时的界面反应进行研究．研究BN在不同温度下（1450℃，1520℃），保持一定时间（90s，180s，270s，360s）与TiNi系合金熔体的相互作用情况，得到了不同反应时间、反应温度下的界面层，并用扫描电子显微镜（scanning electron microscopy，SEM）、X射线衍射（X．ray diffraction，XRD）和电子探针显微分析（electron probe microanalysis，EPMA）对界面进行形貌、物相和成分的分析，对反应机理作了讨论．研究结果表明，BN与熔体作用的产物在试验条件下不与熔体继续反应，从而保护了熔体不受到进一步污染．     

鸡传染性法氏囊病的RT—PCR诊断方法的研究

在研究鸡法氏囊病毒（HBDV）的A片断cDNA结构的基础上，建立了RT－PCR早期诊断技术，结果表明，使用PrimerDesign引物设计软件，在VP5和VP2的重叠基因区设计的一对引物具有非常高的同源性和保守性，采用的四种IBDV的标准毒株，一种野毒株和一例病鸡标本通过此引物进行RT－PCR检测均得到了明显的阳性扩增结果，而两种其他鸡病病毒和一例健康鸡的法氏囊组织扩增均为阴性结果。     

跨界融合子Fhhh降解PTA废水mnp基因转录研究

报道Fhhh的遗传稳定性，及其降解精对苯二甲酸（PTA）废水过程中基因转录的研究结果。聚合酶链式反应PCR的测定结果是，Fhhh同时含有mnp(来自黄孢原毛平革真菌）、FL01（来自酿酒酵母真菌）和16SrDNA(来自土细菌）的3个亲株的基因DNA片断。表明Fhhh具有分子遗传稳定性。反转录－扩增（RT－PCR）的测定表明，Fhhh的黄孢原毛平革菌在降解PTA废水过程，在Mn^2 、Cu^2 、Zn^2 、Se^4 4种金属元素优化水平的条件下，mnp基因均可转录。研究结果为高效处理PTA废水，增添了分子遗传学的调控途径。     

应用二温式多重PCR技术鉴别鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒

为了简化聚链反应（PCR）程序和加快检测速度,将二温式PCR与多重PCR结合起来,建立一种同是检测鸡传染性支气管炎病毒（IBV）和鸡传染性喉气炎病毒（ILTV）的二温式重PCR技术,试验根据IBV和ILTV的基因文库,设计2对分别与IBV和ILTV某段基因序列互补的引物。用这2对引物同一样品中的IBV、ILTV核酸模板进行二温式多重PCR扩增,结果均同时得到2条特异性大小与实验设计相符的1720bp(IBV)和647bp(ILTV）的扩增带,而对其他6种禽病病原的扩增结果均为阴性,敏感性测定结果表明明,该二温式多重PCR技术检出10pg的IBV RNA模板和10pg的ILTV DNA模板。     

套式PCR检测斑节对虾白斑症病毒（WSSV）

解剖患白斑症斑节对虾的鳃组织，制备成不同释放倍数的模板，对其进行白斑症病毒（WSSV）的PCR扩增，结果显示所建立的套式PCR的灵敏度大约为一步PCR的10^4倍；对感染病毒后不同时期的斑节对虾进行PCR检测，发现感染早期经一步PCR检测为WSSV阴性的样品，套式PCR的检测结果为阳性；对发病虾塘中的几种甲壳类动物进行PCR检测，发现经一步PCR检测为阴性的长臂虾、秉氏厚蟹和褶痕相手蟹等宿主，套式PCR的检测结果为阳性。表明所建立的WSSV套式PCR检测法较普通的一步PCR有更大的应用价值和意义。     

荧光定量PCR技术及其在预防兽医学研究中的应用

荧光定量PCR（fluorescencer quantitive polymerase chain reaction,FQ-PCR）技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术。该技术具有实时监测、快速、灵敏、精确等特点,是对原有PCR技术的革新,扩大了PCR的应用范围。本文综述了FQ-PCR技术的基本原理及其在预防兽医学研究中的应用。     

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花郴花花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止（Nos）的序列特点，设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针，建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和Nos终止子的方法，并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等11份实物样品进行了检测，其中有5份样品结果阳性，结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测了35S方法同时检测出35S和Nos双组分，较常规PCR技术更为简便、快速、准确，有很很好的应用前景。     

猪细小病毒分子生物学诊断技术的研究进展

猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一。它广泛分布于世界各地,给我国乃至全世界的养猪业造成了巨大的经济损失。近年来,猪细小病毒的分子生物学诊断方法的研究进展迅速,为猪细小病毒的快速、准确的诊断起到了重要的作用。从聚合酶链式反应技术、核酸探针技术、DNA芯片技术等方面对猪细小病毒的分子生物学诊断技术进行综述有助于我们进一步了解这项技术。     

光纤光栅传感技术在重大工程结构诊断与监测中的应用

光纤光栅传感技术具有传统传感器无可比拟的优势,重大工程结构的健康诊断与监测是跨学科的前沿研究领域。介绍了光纤光栅传感技术用于重大工程结构的原理、国内外研究以及在重大工程中应用的概况,阐述了基于光纤光栅传感技术和应变模态理论的损伤自诊断智能结构系统的基本构成、原理,并指出近期应当加强光纤光栅传感技术的结构诊断、动态解调、工业化批量生产及其埋设等方面研究工作。     

投弃式海流剖面仪探头流场TRPIV测量

 投弃式海流剖面仪(eXpendable Current Profiler,XCP)探头是最新型的投弃式海洋环境剖面测量探头,在海洋调查、科学研究以及军事上有着重要应用。XCP探头在海水中的姿态直接影响海流测量精度,因此试验研究探头水下姿态对投弃式海流测量技术发展有重要意义。本文通过搭建试验装置,应用高时间分辨率PIV(Time Resolution Particle Image Velocimetry,TRPIV)技术在室内低速循环水槽测量了XCP探头水平截面的二维瞬时流场和平均流场。分析了不同旋转速度比及雷诺数对流场的影响,进而根据马格努斯效应分析了XCP探头受到的侧向力。试验结果表明,探头受到的侧向力与旋转速度呈正比关系,并且随雷诺数的增加探头受到的侧向力也增加了。据分析结果可知,实际工作中探头穿越不同的海流层下落时受到变化的侧向力作用,并导致其在海水中以倾斜状态下落。试验结果可为XCP探头在下落过程中倾斜情况的估计提供参考和依据。     

婴儿肝炎综合征患儿CMV的动态监测及临床意义

目的:探讨应用实时荧光定量PCR法(Real Time Quantitative PCR)检测婴儿尿液中CMV-DNA含量在诊断和动态监测婴儿CMV感染中的意义。方法:应用PE5700全自动PCR扩增分析仪检测80例婴肝患儿和40例对照组患儿尿标本中HCMV-DNA的拷贝数及HCMV-IgM,并对其中48例CMV肝炎患儿在出院半年和一年后进行尿标本HCMV-DNA含量和肝功的动态监测。结果80例患儿尿标本HCMV-DNA阳性率为63.8%(51/80),40例正常对照婴儿尿标本中HCMV-DNA阳性率为10%(4/40),统计学分析表明:婴肝患儿组HCMV-DNA阳性率明显高于对照组,差异有显著性(=31.032,P<0.01);80例患儿血HCMV-IgM阳性率为46.25%(37/80),40例正常对照儿童HCMV-IgM阳性率为2.5%(1/40),统计学分析表明婴肝患儿组血HCMV-IgM阳性率明显高于对照组,差异有显著性(=23.588,P<0.01);通过对出院后的48例CMV感染的婴肝患儿进行一年的随访,发现部分患儿肝功恢复正常后,HCMV不能完全转阴,并有复发的可能性,所以对CMV感染婴肝患儿...     

均相荧光探针PcR技术在TB检测中的研究

本实验利用均相荧光探针PcR技术对结核病患痰液进行了检测，结果说明，采用均相荧光测量方式，提高了PcR检测的特异性与灵敏度，同时使实验操作步骤简化，杜绝扩增产物污染的途径及人工观察电泳的主观性，可适用于各种病原体、点突变等基因诊断，使PcR检测实现标准化成为可能。     

猪瘟病毒分子生物学诊断的研究进展

猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的急性、热性、高度接触性传染病，严重危害我国养猪业。尽管中国很早就研制成功了猪瘟兔化弱毒疫苗。但近年来猪瘟的流行和发病特点发生了很大的变化，很多地区和猪场不断出现非典型猪瘟、温和型猪瘟，给该病的诊断带来了困难。近年来，猪瘟病毒分子生物学诊断方法的研究进展迅速，为猪瘟的快速、准确诊断起到了重要的作用。从聚合酶链式反应技术、核酸探针技术、DNA芯片技术等方面对猪瘟病毒的分子生物学诊断方法进行了综述。     

河南高新技术产业开发区创新能力提升路径研究

通过分析实地调研和统计年鉴的数据,指出了国家级高新区数量较少、规模小、分布不平衡;高新技术企业比例小、外向程度低、研发投入不足;科技中介服务机构规模小、政府投入少、服务能力较弱等河南高新技术开发区发展中存在的问题。提出了强化企业创新主体地位,促进企业创新能力提升;建设高水平的科技成果转化平台,促进产学研融合发展;促产业技术联盟,推动协同创新发展;培育创新型服务机构发展,提高对企业的服务能力;创新机制体制,全面深化科技体制改革等提升高新区创新能力的对策建议。     

本体不一致性处理中的无辜诊断方法

随着语义网络技术的发展,本体不一致性问题成为本体联盟中的研究热点之一.其中基于模型诊断技术的本体不一致性处理方法,在结构化知识描述领域中得到了大量应用.局部诊断技术通过收缩问题域的方法来提高不一致性问题求解效率,但它基本上是一种基于"正确性推断"的假设.本文在研究过程中提出无辜诊断技术,与传统的局部诊断相比,这种方法更加有效.     

地方科技进步立法的形式性研究

地方科技进步立法是一种执行性立法。对其进行形式性研究,有利于没有立法的省份吸取经验教训。通过对地方立法的有关数据、名称和结构等形式上的研究,来促进地方执法的确定性、执法的效率和执法的效果,减少寻找和理解法律的成本,为以后立法提供经验教训。     

无创血糖检测方法的研究

对血糖浓度进行紧密控制能减少或减轻糖尿病病人的长期并发症,糖尿病病人在诊疗期间经常要进行血糖浓度化验,频繁进行的抽血给病人带来了痛苦和不便,也给医护人员增添了工作.为了改变这一局面,近年来国内外正在积极研究血糖浓度的无创性检测方法.本文对多种葡萄糖无创检测方法(如傅立叶变换红外光谱法,组织的力学操作,脉冲光声技术等)进行了研究和总结.