大麦黄矮病毒（BYDV）外壳蛋白基因在小麦原生质体中的…

实验采用ＰＥＧ介导法转化小麦，用ＧＵＳ基因作为标志，用荧光法测定Ａｃｔｌ－ＧＵＳ，Ｅｍｕ－ＧＵＳ，３５Ｓ－ＧＵＳ三种质粒转化小麦细胞后的瞬间表达强度，以比较Ａｃｔｌ，Ｅｍｕ，３５Ｓ三种启动子在小表中的表达强度，结果表明Ａｃｔｌ和Ｅｍｕ的强度大致相等，均比３５Ｓ强，采用Ｅｍｕ为启动子带ＢＹＤＶＣＰ基因的质粒和经改造过的Ａｃｔｌ为启动子带有抗潮霉素选择记基的质粒转化小麦“济南１７７”的原生质体，转化６     

大麦黄矮病毒（BYDV）外壳蛋白基因在小麦原生质体中的稳定转化

实验采用ＰＥＧ介导法转化小麦，用ＧＵＳ基因作为标志，用荧光法测定Ａｃｔｌ－ＧＵＳ、Ｅｍｕ－ＧＵＳ、３５Ｓ－ＧＵＳ三种质粒转化小麦细胞后的瞬间表达强度，以比较Ａｃｔｌ、Ｅｍｕ、３５Ｓ三种启动子在小表中的表达强度．结果表明，Ａｃｔｌ和Ｅｍｕ的强度大致相等，均比３５Ｓ强．采用Ｅｍｕ为启动子带ＢＹＤＶＣＰ基因的质粒和经改造过的Ａｃｔ１为启动子带有抗潮霉素选择标记基因的质粒共转化小麦“济南１７７”的原生质体．转化６ｄ后，用潮霉素进行筛选，最后得到两块抗潮霉素的愈伤组织，转化后４个月，经ＰＣＲ检测，证明ＣＰ基因已整合进一块愈伤组织的细胞基因组中．     

鱼抗冻蛋白在E.coli和Yeast中高效表达的理论初探

按照Ｅ．ｃｏｌｉ和Ｙｅａｓｔ甚高表达基因中的同义密码子使用、碱基构成和密码子之间的碱基关联的ＥＥＮＳ模式，对鱼抗冻蛋白基因ＡＦＰＩＩＡ７进行了改造，理论上使得ＡＦＰＩＩＡ７基因在Ｅ．ｃｏｌｉ和Ｙｅａｓｔ中的表达水平有了非常显著的提高．未改造的ＡＦＰＩＩＡ７基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达，其表达水平为ＣＡＩ＝０．４１１，ＣＥＩ＝３．２４０是较低表达水平的基因，估计值在１０～１０３ｍｏｌ／ｃｅｌｌ之间．经改造后，其表达水平变成甚高表达基因ＣＡＩ＝０．８６８，ＣＥＩ＝５．９７８，估计值在１０４～１０５ｍｏｌ／ｃｅｌｌ之间．在Ｙｅａｓｔ中表达，未改造的ＡＦＰＩＩＡ７基因的表达水平为ＣＡＩ＝０．３５９，ＣＥＩ＝５．８８０，也是较低表达基因．经改造后，此基因为Ｙｅａｓｔ的高表达基囚，ＣＡＩ＝０．７０３，ＣＥＩ＝１１．６６８．本文的方法为异质基因获得高效表达提供了一种理论途径．     

6个氨基酸小C肽人胰岛素原类似物基因的构建和表达

用片段置换法，从在Ｃ肽两端具有酶切位点的双突人胰岛素原因中，将Ｃ肽基因替换成含Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ６个氨基酸小Ｃ肽基因。将这个小Ｃ肽岛素原类似物基因重组到具有Ｔａｃ启动子的质粒中，并与部分牛凝乳酶原基因融合，在Ｅ．ｃｏｌｉ中得到了高效表达。表达的ＢＣ＇Ａ融合蛋白占菌体总蛋白的１６％。表达产物以包含体形式存在，经ＣＮＢｒ裂解及磺酸，再经复性后，具有对胰岛素的放射免疫活性。     

抗菌肽A—蜂毒素杂合肽基因在大肠杆菌中的克？…

采用Ｅｃｏ ＲⅠ和ＢａｍＨ Ⅰ接头将化学合成的大小为５对碱基的ＣＡ（１－７）Ｍ（５－１２）杂合肽基因克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ分泌表达载体ｐＩＮ－Ⅲ．ＯｍｐＡ２上的ＥｃｏＲⅠＢａｍＨⅠ位点之间，并对其在Ｌｐｐ启动子和Ｌａｃ启动子／操纵调控下的分泌表达进行初步研究。     

改造人干扰素α2b基因在大肠杆菌中获得高效表达的理论方法

按照Ｅ．ｃｏｌｉ甚高表达基因中同义密码子使用,密码子内和密码之间碱基关联的ＥＥＮＳ模式,对人干扰素α２ｂ基因编码区中的同义密码子进行置换,理论上使得人干扰素α２ｂ基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达水平有非常显的提高,在理论上,未改造的人干扰素α２ｂ基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达水平为ＣＡＩ＝０．３２３,ＣＤＩ＝０．５７４,ＣＥＩ＝０．６２９,是较低表达水平的基因,估计实际表达水平在１０～１０＾３ｍｏｌ／ｃｅ     

β－actin启动子控制的人尿激酶原基因在CHO细胞中的表达

本文将人尿激酶原（ｐｒｏ－ＵＫ）ｃＤＮＡ基因插入到含β－肌动蛋白（ａｃｔｉｎ）启动子的表达载体中，通过脂质体转化到中国仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞内，经筛选得到稳定表达ｐｒｏ－ＵＫ基因的细胞株，用ＥＬＩＳＡ检测到细胞培养液中表达量为２～３ｍｇ／Ｌ。经过抗尿激酶（ＵＫ）的免疫亲和柱初步纯化细胞培养上清后得到表达产物。同时，在培养液中加入佛波酯ＰＭＡ后，发现它对目的基因的表达有促进作用。     

香石竹斑驳病毒（CarMVsh）外壳蛋白基因克隆及原核表达

香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,ＳＤＳ－酚法纯化的基因组ＲＮＡ作为模板,ＲＴ－ＰＣＲ合成并扩增外壳蛋白基因ｃＤＮＡ,ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ,转化为Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９。阳笥克隆ｐＴＣａＣＰ经序列分析,证明带有全长ＣＰ基因。     

人rabl3基因克隆和表达

以人的胚胎ｃＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ方法筛选获得ｒａｂ１３基因，并克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３和原核表达载体ｐＧＥＸ、ｐＥＴ－１５ｂ和ｐＭＡＬ－ｃ２中，把ｒａｂ１３基因转染入牛肾上腺毛细血管内皮细胞（ＢＣＥ细胞）中，免疫荧光染色显示Ｒａｂ１３定位于ＢＣＥ细胞胞质内膜性细胞器上，在为ｒａｂ１３基因对膜通道调节功能的进一步研究打下了基础。     

多能硫杆菌RubisCO基因的亚克隆及各种启动子对其表达的影响

将多能硫杆菌（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｕｓｖｅｒｓｕｔｕｓ）ＲｕｂｉｓＣＯ基因从两个方向亚克隆到ｐＢＲ３２２和ｐＫＫ２２３－３载体上,通过酶切的方法对各种质粒的插入方向进行了确证．并进一步对这两种插入方向的质粒在大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）中的表达情况进行了酶活性的测定,该基因片段在ｐＫＫ２２３－３载体的ｔａｃ启动子的启动下,表达活性比ｌａｃ启动子以及ｐＢＲ３２２载体上的Ｐ１和Ｐ２启动子高．     

融合表面抗原SA—28基因在Pichia pastoris酵母系统中的表达

将乙肝病毒表面抗原Ｓ－ｐｒｅＳ１融合基因ＳＡ－２８插入质粒载体ｐＡＯ８１５的ＥｃｏＲ Ｉ位点中,将其置于Ｐｉｃｈｉａ Ｐａｓｔｏｒｉｓ 酵母ＡＯＸ１启动子控制下,利用电转化技术,融合基因表达单元链同ＨＩＳ４基因被整合到受体菌ＳＭＤ１１６８基因组中。对得到的工程菌进行发酵和表达产物的研究表明：ＳＡ－２８基因在该系统中的表达受甲醇诱导调控;ＳＡ－２８融合基因的表达产物具有Ｓ和ＰｒｅＳ１的双重抗原性。用     

具全期启动子盒的杆状病毒高效表达载体的组建与应用

通过ＰＣＲ扩增，得到苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）具早晚期启动子元件的ｐ３５基因启动子，将其插入到杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３多克隆位点上游，使之与ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３质粒中的人工合成后期启动子（ＰＳｙｎ）、多角体ＸＩＶ启动子（ＰＸＩＶ）串联构成早期、晚期、极晚期能持续启动外源基因表达的转移载体质粒ｐＳＸ３５．将ｐＳＸ３５用于组建含ＨＢｓＡｇ基因并形成多角体的重组ＴｎＮＰＶ，ＨＢ－ｓＡｇ基因的表达量显著提高，表达时间亦明显提前，从而实现了外源基因在杆状病毒表达系统的全期、高效表达．ｍＲＮＡ引物延伸试验结果显示，Ｐｐ３５在重组病毒中可产生２套转录本，分别于病毒感染的早期和晚期起始ＨＢｓＡｇ基因的表达．     

β—actin启动子控制的人尿激酶原基因在CHO细胞中…

本文将人尿激酶原ｃＤＮＡ基因插入到含β－肌动蛋白启动子的表达载体中，通过脂质体转化到中国仓鼠卵巢细胞内，经筛选得到稳定表达ｐｒｏ－ＵＫ基因的细胞株，用ＥＬＩＳＡ检测到细胞培养液中表达量为２－３ｍｇ／Ｌ。经过抗尿激酶的免疫亲和柱初步纯化细胞培养上清后得到表达产物。同时，在培养液中加入佛波酯ＰＭＡ后，发现它对目的基因的表达有促进作用。     

RATS1基因对人食管癌细胞c—myc基因表达的降调…

将含有ＲＡＴＳ１ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐＣＤＶ１与含有ｎｅｏ抗性基因的表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ法共转染人食管癌细胞系ＥＣ１０９细胞。结果发现：转染ＲＡＴＳ１基因后的抗性克隆细胞生长受到抑制，形态发生明显改变，并且逐渐脱落死亡。经ＲＴ－ＰＣＲ分析发现，转染后有ＲＡＴＳ１基因表达的细胞克隆，ｃ－ｍｙｃ基因表达降低，两者呈反向相关，即ＲＡＴＳ１基因表达愈高，ｃ－ｍｙｃ基因表达降低愈     

慢性丙型和乙型肝炎基因产物表达形态比较

比较慢性丙型和乙型肝炎基因产物表达形态。方法：７６例经ＥＬＩＳＡ和ＨＣＶＲＮＡ检测证实的ＨＣＶ肝炎活检标本，用ＮＳ３区基因克隆产物ＣＰ２２和Ｃ３３ｃ标记，并与１７６例标记ＨＢｃＡｇ的乙型肝炎比较。结果；３６例丙型肝炎的ＣＰ２２１５例胞质阳性，Ｃ３３ｃ１９例胞质阳性。     

小麦叶绿体psbA基因的克隆及表达

用ＰＣＲ直接从小麦叶绿体基因组扩增到完整的ｐｓｂＡ基因，并构建了ｐｓｂＡ基因的克隆ｐＴＤ１Ⅱ。为研究ｐｓｂＡ基因在Ｅ·ｃｏｌｉ中的表达，将完整的ｐｓｂＡ基因正向插入高表达载体ｐＫＫ２２３－３中构建表达克隆ｐＫＴＤ１。含有重组表达质粒的转化细胞经ＩＰＴＧ诱导后提取总蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，小麦叶绿体ｐｓｂＡ基因能在Ｅ·ｃｏｌｉ中表达３２ｋＤ的Ｄ１蛋白，表达的Ｄ１蛋白占细菌总蛋白的３％以上。     

抗菌肽A-蜂毒素杂合肽基因在大肠杆菌中的克隆与初步分泌表达

采用 Ｅｃｏ Ｒ Ⅰ和 Ｂａｍ Ｈ Ⅰ接头将化学合成的大小为４５ 对碱基的 Ｃ Ａ（１ － ７） Ｍ（５ － １２） 杂合肽基因克隆到 Ｅ．ｃｏｌｉ 分泌表达载体ｐ Ｉ Ｎ－ Ⅲ· Ｏｍｐ Ａ２ 上的 Ｅｃｏ ＲⅠ－ Ｂａｍ ＨⅠ位点之间,并对其在 Ｌｐｐ启动子和 Ｌａｃ 启动子／ 操纵子调控下的分泌表达进行初步研究重组子的地高辛（ Ｄｉｇ） 核酸探针杂交和酶切分析结果表明杂合肽基因克隆成功;抑菌活性的检测结果表明杂合肽基因表达产物有一定的抑菌活性     

成纤维细胞静脉注射途径实施血友病B基因治疗的初步探索

将转有报告基因ｌａｃＺ的成纤维细胞３Ｔ３／ＢＡＧ以５×１０＾５量尾静脉注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠体内，７ｄ后在主要脏器检测到３ＴＥ／ＢＡＧ的表达且至少可持续３０ｄ。将转有人凝血因子Ⅸ小基因的正向表达载体Ｇ１ＮａＣｉ’Ⅸ和反向表达载体Ｇ１ＮａＣｉ’ⅨＲ的成纤维细胞ＰＡ３１７／Ｇ１ＮａＣｉ’Ⅸ和ＰＡ３１７／Ｇ１ＮａＣｉ’ⅨＲ分别以１×１０＾５量尾静脉注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠体内，ＥＬＩＳＡ测定小鼠血浆中ｈＦ     

全长和截短的δ内毒素cryIAc基因在昆虫杆状病毒表达？…

在昆虫病毒转移载体ｐＶＬ１３９３多角体基因启动子下游克隆了全长的苏芸金杆菌δ内毒素基因ｃｒｙＩＡｃ，得到了重组转移载体ｐＶＬＹ１，用ＫｐｎＩ将ｃｒｙＩＡｃ基因进行了截短，得到了重组转移载体ｐＶＬＹ２。随后在两种重组转移载体ｃｒｙ基因的下游引入了ＩＥ１启动子驱动的ｎｅｏ基因作为筛选标记和ＳＶ４０小ｔ抗原终止区作为ｃｒｙ基因的终止信号，得到了重组转移载体ｐＶＬＹ１ｎｅｏ和ｐＶＬＹ２ｎｅｏ，分别用两种重     

电击法转移含人凝血因子Ⅸ基因重组质粒的影响因素

反转录病毒载体在基因治疗中可能会产生野生型病毒而引起安全性问题，本文研究含ＦＩＸｃＤＮＡ重组质粒基因治疗血友病Ｂ的可能，构建了不具反转录病毒载体结构的两重组质粒ｐＳＣＩＸＴＮ和ｐＣＩＸＴＮ，前者含ＳＶ４０早期启动子和ｈＣＭＶ启动子共同控制的ＦＩＸ ｃＤＮＡ，后者仅含ｈＣＭＶ启动子控制的ＦＩＸｃＤＮＡ，它们都含有ＴＫ启动子驱动的ｎｅｏ基因，通过电击法将基因转移到ＰＡ３１７和ＨＴ１０８０细胞，在ＨＴ１