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真核细胞转录系统启动T7启动子起始的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
利用氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)和人低密度脂蛋白受体基因(LDLR)作为报道基因,根据α-鹅膏蕈碱(α-amanitin)对真核生物RNA聚合酶的选择性抑制,分析T7噬菌体启动了为哺乳类动物细胞启动外源基因表达的机制。结果表明:真核生物RNA聚合酶Ⅱ可启动T7启动子的转录;同时应用DNA-蛋白质凝胶泳动技术,发现人工合成的T7启动子能与核蛋白质结合,进上步证明了哺乳类动物细胞妄动T7启动子的转录 相似文献
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抗菌肽A-蜂毒素杂合肽基因在大肠杆菌中的克隆与初步分泌表达 总被引:2,自引:0,他引:2
采用 Eco R Ⅰ和 Bam H Ⅰ接头将化学合成的大小为45 对碱基的 C A(1 - 7) M(5 - 12) 杂合肽基因克隆到 E.coli 分泌表达载体p I N- Ⅲ· Omp A2 上的 Eco RⅠ- Bam HⅠ位点之间,并对其在 Lpp启动子和 Lac 启动子/ 操纵子调控下的分泌表达进行初步研究重组子的地高辛( Dig) 核酸探针杂交和酶切分析结果表明杂合肽基因克隆成功;抑菌活性的检测结果表明杂合肽基因表达产物有一定的抑菌活性 相似文献
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目的:为确认Tn3-gpt已插入小鼠巨细胞病毒(mouse cytomegalovirus,MCMV)基因组的特定位置,改进大分子病毒DNA的测序方法,建立以230kb DNA为模板直接进行DNA序列测定的方法。方法:待测MCMV的Tr3-gpt插入突变株感染NIH3T3细胞后,从培养液中制备病毒颗粒并从中纯化得到基因组DNA,以此DNA为模板,合成的寡核苷酸为引物,用热循环方法按Promega公司的DNA Cycle Sequencing System试剂盒的方法进行测序。结果:获得纯度较高可直接作为模板进行测序的:DNA,测序所得放射自显影图片条带清晰明亮,间隔正常,分辨率较高,可顺利读出插入位点的MCMV的DNA序列,证实Tn3-gpt插入在特定的位置。结论:长达230kb的大分子病毒DNA可直接作为模板,用热循环测序方法进行测序,无需切割成小片段后才进行测序。 相似文献
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