小鼠胃肠道5-羟色胺免疫反应阳性肥大细胞

利用免疫组化技术和甲苯胺蓝(TB)染色技术,对小鼠胃肠道5-羟色胺免疫反应阳性细胞(5-HT+细胞)、肥大细胞(MC)和5-羟色胺免疫反应阳性肥大细胞(5-HT+MC)进行了研究.结果表明:小鼠胃肠中5-HT+细胞多分布于黏膜上皮细胞之间、腺泡上皮细胞之间和固有层内;MC多分布于黏膜层和黏膜下层结缔组织之中;小鼠胃和小肠中分别有49%和47%的MC与免疫组化染色的邻片中5-HT+细胞在位置上相对应,该部分MC为5-HT+MC;小鼠胃和小肠中分别有24%和20%的5-HT+细胞为MC.本文从形态学的角度证明了小鼠胃肠道MC可分泌5-HT,MC是消化道5-HT的来源之一.     

迷迭香酸对小鼠炎症介质的影响

通过角叉菜胶致小鼠足肿胀法检测炎症渗出液中前列腺素E2(PGE2)、丙二醛(MDA)、组胺(Histamine)和5-羟色胺(5-HT)的含量变化,以及血清中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮(NO)含量的变化,研究迷迭香酸抗炎的作用机制.结果表明,连续给小鼠灌胃7 d,迷迭香酸能明显抑制角叉菜胶致小鼠后足肿胀,并且显著降低炎症渗出液中前列腺素E2、丙二醛、组胺和5–羟色胺的含量,显著提高血清中过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活性,显著降低血清中一氧化氮含量.说明迷迭香酸能够通过抑制炎症部位炎症因子的合成或释放而起到抗炎作用,为迷迭香酸更好地应用于营养食品、保健药品中提供理论依据.     

牛奶中过敏原组分的分离纯化及主要过敏原的鉴定

目的:分离纯化并鉴定牛奶中引起过敏反应的主要致敏原组分,并分析其与组胺释放的关系.方法:等电点沉淀、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE-Sepharose离子交换层析等技术分离纯化牛奶过敏原组分.脱脂乳浸液免疫C57/BL6小鼠制备抗血清.Western-Blotting分析脱脂乳致敏原组分.间接ELISA检测抗血清中slgE和sIgG;同时荧光法检测各致敏组分体外诱发免疫小鼠腹腔肥大细胞组胺释放率.结果:分离纯化出酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白等致敏组分(纯度>90%).免疫印迹表明酪蛋白是主要致敏原组分.抗血清sIgG水平差异显著,sIgE水平没有大的变化;组胺释放率与sIgG水平是一致的,而与sIgE水平没有明显相关性.酪蛋白抗血清sIgG效价最高为1:25 600,组胺释放率高达(73.28±9.31)%.结论:牛奶中主要过敏原组分鉴定为酪蛋白,对牛奶过敏症的体外诊断治疗以及低/无过敏原配方奶的研制有一定的意义.     

牛乳清蛋白BALB/c小鼠过敏模型的建立及其优化

目的:建立牛乳清蛋白的BALB/c小鼠过敏模型,并探讨不同佐剂、免疫途径及饲料纯度等因素对建立牛乳清蛋白的BALB/c小鼠过敏模型的影响。方法:用不含牛乳及乳制品的特制饲料饲养BALB/c小鼠以乳清蛋白致敏,间接ELISA法测定特异性IgE,用荧光法检测体外激发小鼠致敏肥大细胞释放的组胺。结果:成功建立BALB/c小鼠乳清蛋白过敏模型,条件优化结果显示,氢氧化铝佐剂结合皮下注射最好地促进特异性IgE产生;用不含牛奶及其他食物过敏原的特制饲料饲养的小鼠特异性IgE的本底水平低,适于建立小鼠过敏模型,荧光法检测肥大细胞释放组胺的结果与特异性IgE检测结果一致。结论:用特制饲料饲养小鼠,氢氧化铝佐剂结合皮下注射乳清蛋白适于建立BALB/c小鼠过敏症模型,该模型可用于过敏症机理研究。     

生巴戟天与盐巴戟天改善三氯化铝诱导的老年痴呆小鼠学习记忆能力的研究

目的比较生巴戟天与盐巴戟天对老年痴呆模型小鼠脑组织去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MAD)的影响.方法将50只小鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组、生巴戟天组和盐巴戟天组.除对照组外,其余各组通过灌胃给予AlCl3(200mg·kg-1)建立老年痴呆模型,连续50d.生巴戟天组、盐巴戟天组小鼠分别灌胃给予6g·kg-1的生巴戟天、盐巴戟天水提物,阳性对照组小鼠灌胃给予32mg·mL-1吡拉西坦,对照组与模型组分别灌胃给予等体积的生理盐水.采用Morris水迷宫法评价学习记忆能力,采用高效液相色谱-电化学法检测小鼠脑组织中NE,DA和5-HT含量,采用考马斯亮蓝测定法测定小鼠脑组织中SOD和MAD活性.结果与对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期显著增加(P<0.05),穿越次数显著减少(P<0.05),脑组织NE,DA,5-HT含量与SOD活性显著下降(P<0.05),MAD活性显著升高(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组、生巴戟天组、盐巴戟天组小鼠的逃避潜伏期显著减少(P<0.05),穿越次数显著增加(P<0.05);脑组织NE,DA,5-HT含量与SOD活性显著增高(P<0.05),MAD活性显著降低(P<0.05);盐巴戟天组小鼠脑组织NE,DA,5-HT含量与SOD活性明显高于生巴戟天组(P<0.05),MAD活性明显低于生巴戟天组(P<0.05).结论生巴戟天与盐巴戟天水提物均能提高抗氧化能力,提高单胺类神经递质含量,起到改善老年痴呆小鼠学习记忆能力.盐巴戟天对老年痴呆小鼠学习记忆能力能改善作用显著优于生巴戟天.     

四君子汤对D-半乳糖诱致衰老小鼠脑抗氧化能力和线粒体DNA(mtDNA)损伤的影响

目的 探讨四君子汤(Sijunzi decoction,SJZ)对D-半乳糖诱致衰老小鼠脑抗氧化能力和线粒体DNA(mtDNA)损伤的影响.方法 给小鼠连续皮下注射D-半乳糖(1000 ms/(kg·d-1))8周制备衰老模型,并于第3周开始给予四君子汤高剂量组(20 g/kg)、中剂量组(10 g/kg)、低剂量组(5 g/kg)和维生素E(250 ms/kg)处理;8周后采用水迷宫测定小鼠学习记忆能力;采用比色法测定脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和琥珀酸脱氢酶(SDH)的活力;Fura-2/AM双波长荧光法检测海马神经细胞钙离子浓度;常规PCR检测小鼠海马细胞mtDNA缺失突变.结果 四君子汤可明显改善模型小鼠的学习和记忆能力,并提高脑组织GSH-PX和SDH的活力,降低脑细胞内钙离子浓度,防止模型小鼠脑海马细胞mtDNA缺失突变.结论 四君子汤具有改善D-半乳糖诱致小鼠学习记忆障碍的作用,其作用与其提高脑组织抗氧化能力,降低海马胞内钙离子浓度,减轻细胞线粒体DNA缺失突变的作用有关.     

大豆磷脂对小鼠红细胞膜和脑组织中脂肪酸含量的影响

采用高效液相色谱法研究了小鼠灌胃大豆磷脂乳液(剂量为w(大豆磷脂/体质量)=2.5、5.0、10.0 g/kg)30 d对小鼠红细胞膜和脑组织中脂肪酸含量的影响.结果表明:(1)w(大豆磷脂/体质量)=10.0 g/kg剂量组小鼠红细胞膜和脑组织中亚油酸、亚麻酸的含量及多不饱和脂肪酸(PUFA)占总脂肪酸(TFA)的比例显著增加(P＜0.05),红细胞膜中油酸的含量显著下降(P＜0.05);(2)w(大豆磷脂/体质量)=5.0 g/kg剂量组小鼠红细胞膜中亚油酸、亚麻酸的含量和w(PUFA/TFA),以及脑组织中亚油酸的含量显著提高(P＜0.05);(3)w(大豆磷脂/体质量)=2.5 g/kg剂量组小鼠红细胞膜和脑组织中各所测脂肪酸的含量无显著差异.说明大豆磷脂可增加小鼠红细胞膜和脑组织中亚油酸、亚麻酸等的含量,改善两者的脂肪酸组成,但两者的变化存在差异.     

五味子酸性多糖对酒精诱发的小鼠急性脑损伤脑组织中SOD,MDA的影响

目的采用50%乙醇12 mL/kg灌胃建立小鼠急性脑损伤模型,观察五味子酸性多糖(SCAP)对酒精诱导小鼠急性损伤脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量的影响.方法将50只小鼠随机分为正常对照组(CON)、模型组(MOD)、SCAP低(L)剂量组(5 mg/kg)、SCAP中(M)剂量组(10 mg/kg)和SCAP高(H)剂量组(20 mg/kg).SCAP处理组小鼠每日分别灌胃SCAP,对照组和模型组分别给予同体积蒸馏水,连续15 d.最后一次给药1 h后,MOD与SCAP组均灌服50%乙醇12 mL/kg,CON组给予蒸馏水.12 h后禁食,取脑组织,检测脑组织中SOD活性和MDA的含量;应用亚油酸-硫氰酸铁法对SCAP进行抗氧化活性的研究;应用Oyaizu法对SCAP的还原活性进行测定.结果五味子酸性多糖能显著提高脑组织中SOD活性,降低MDA含量(与模型组比较,P0.05).SCAP对亚油酸体系的氧化抑制率强于维生素E,表明SCAP的还原能力要强于维生素E.结论五味子酸性多糖具有保护急性酒精性损伤小鼠的脑组织的抗氧化作用.     

Hantszch A.反应在组胺测定中的应用研究

基于组胺与1,3-环己二酮-甲醛发生Hantszch A.反应建立了测定组胺的方法.在优化的实验条件下,组胺浓度在6.00×10-5～1.50×10-3 mol/L范围内与体系的相对荧光强度呈良好的线性关系,线性方程为△F=3.03c+27.6,相关系数r=0.999 4.对3.00×10-4 mol/L的组胺平行测定11次,相对标准偏差为1.8%,检测限(3σ)为2×10-5 mol/L.方法的回收率为92.3%～98.7%,将其应用于合成样品的测定,结果比较满意.     

延胡索对小鼠学习能力及抗氧化作用的影响

研究了延胡索对小鼠学习能力及抗氧化作用的影响.给小鼠按8g/(kg*d)、16g/(kg*d)的剂量灌胃延胡索水煎液,连续15d,观察小鼠开场行为,测定其免疫器官指数、学习记忆能力、脑中多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)含量、心肌和肝脏中丙二醛(MDA)和脂褐素(LPF)含量及肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化.结果表明,与对照组比较,各实验组小鼠在新环境中自发活动显著增加,主要免疫器官指数增加,学习能力显著提高,脑内多巴胺和5-羟色胺含量显著提高,心肌、肝脏中丙二醛和脂褐素含量显著降低,肝脏中SOD活力显著升高.提示延胡索能增强小鼠学习能力和抗氧化作用.     

培养液组胺的检测及鲣鱼产组胺菌的生物活性评价

通过直接将培养液中的组胺经丹酰氯衍生化生成稳定的物质,以1,7-二氨基庚烷为内标,建立高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-VWD)方法检测培养液中的组胺;并研究了温度和pH对产组胺菌生长和组胺产生的影响。结果表明,培养液中组胺的检测方法定量限为0.5μg/mL,回收率在100%～107%,满足方法培养液中组胺的检测。经分离得到的2株产组胺菌分别记为J2和J4,2株菌在添加L-组氨酸的胰酶大豆肉汤里均能够产生组胺;菌株J2和J4最适生长温度均为30℃,最适pH分别为7和6,菌株J2和J4产组胺的最适温度分别为25℃和30℃,最适pH均为5,在适宜的实验条件下组胺产生量最大值为12.47 mg/L。     

开口箭对小鼠5-羟色胺分泌的影响

目的:采用灌胃、石蜡切片、免疫组化染色和ELISA等方法,探讨开口箭对小鼠5-羟色胺(5-HT)分泌的影响.方法选取20²2g健康昆明小鼠20只,均分成A,B,C,D 4组,分别以蒸馏水和0.25、0.50、1.00mg/mL的开口箭灌胃,0.20mL/次/d,连续灌胃7d.第8d对全部小鼠摘眼球取血,ELISA检测血清5-HT质量浓度;取血后立即处死小鼠,取十二指肠,4%甲醛固定,石蜡切片,免疫组化染色,镜下统计5-HT阳性细胞数量.结果与A组相比,B,C,D组小鼠血液5-HT质量浓度逐渐降低,十二指肠肠壁组织中5-HT阳性细胞数也明显减少.结论开口箭会下调小鼠5-HT的分泌.     

枸杞叶总黄酮抗抑郁作用初步研究

研究枸杞叶总黄酮的抗抑郁作用及可能机制,为其作为抗抑郁药物的应用提供药理学参考.用小鼠强迫游泳和悬尾实验观察枸杞叶总黄酮对小鼠行为绝望模型的抗抑郁作用,通过旷场实验考察枸杞叶总黄酮对小鼠自主活动的影响;并用SOD和MDA检测试剂盒检测小鼠血清和脑组织的SOD活力、MDA的质量含量.结果表明,连续灌胃给药14d,枸杞叶总黄酮高(300mg/kg)、中(100mg/kg)、低(30mg/kg)剂量均能明显缩短强迫游泳实验中小鼠的不动时间,枸杞叶总黄酮高、中剂量能明显缩短悬尾实验中小鼠的不动时间,枸杞叶总黄酮各剂量对小鼠自主活动均没有显著影响;枸杞叶总黄酮高、中剂量能有效提高血液和脑组织的SOD活力、降低MDA的质量含量.枸杞叶总黄酮具有抗抑郁作用,作用机制可能与其提高脑组织SOD活力、降低MDA的质量含量有关.     

龙须菜寡糖分离纯化和抗食物过敏功效的研究

为探究深海细菌Flammeovirga pacifica降解龙须菜所产生的寡糖抗食物过敏功效,以龙须菜为原料,通过发酵、超滤、Superdex Peptide HR 10/300柱层析等方法获得高纯度寡糖.离子色谱结果显示:分离纯化获得的寡糖主要为四糖和六糖,其质量分数分别为48.47%和25.69%.小鼠过敏模型实验结果表明,腹腔注射该寡糖(100μg/只)能显著降低过敏小鼠血清特异性Ig E和Ig G1水平,提高特异性Ig G2a水平.通过灌胃(10 mg/只)能显著降低小鼠粪便中组胺的水平,且能有效缓解空肠组织过敏病理现象.小鼠脾淋巴细胞实验结果显示,该寡糖能在转录和转译水平上显著降低Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)含量,促进Th1细胞因子IFN-γ分泌.说明该寡糖能有效调节辅助性T细胞的免疫功能向Th1细胞转换,从而抑制Th2细胞主导的食物过敏反应.     

花生过敏小鼠腹腔肥大细胞SOC活性与ROS相关性研究

研究花生过敏状态下的C57BL/6小鼠腹腔肥大细胞的激活与钙离子通道之间的内在联系, 以及探讨肥大细胞钙离子通道与ROS(reactive oxygen species)之间的关系. 18只雌性C57BL/6小鼠随机分为PBS组(A组)、花生过敏模型组(B组)、vitamin A和vitamin E灌胃治疗组(C组). 酶联免疫吸附实验检测各组腹腔上清液中特异性的IgE和IgG2a水平, 以及细胞因子的变化, 另外测定腹腔上清液与血清中的组胺、ROS含量. 腹腔灌洗液中细胞涂片, 进行肥大细胞计数和脱颗粒比例统计, 荧光共聚焦显微镜观察腹腔肥大细胞钙离子通道SOC(Store oprated channel)的活性. 腹腔上清液中花生特异性IgE、IL-4、IL-10、组胺、ROS、血清中的组胺和ROS、腹腔灌洗液中肥大细胞总数、肥大细胞脱颗粒比例, 都呈现出A组相似文献   

5'-核苷酸对小鼠获得性免疫调节作用研究

 为了评价5’-核苷酸对小鼠获得性免疫功能的影响,将健康雌性BALB/c小鼠以普通饲料、无核苷酸饲料（NF）及不同剂量5’-核苷酸的饲料（0.0025%,0.01%,0.04%,0.16%）喂养4周后,观察小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、血清免疫球蛋白水平以及脾脏淋巴细胞亚群的改变。结果显示无核苷酸饮食可以显著减弱淋巴细胞增殖能力（OD差值0.06±0.03）和足跖肿胀度（0.12±0.06）mm;CD4+/CD8+（1.90±0.12）显著下降,T调节细胞比例（5.56±0.11）%显著升高;溶血空斑数（1.48±0.21）有减弱趋势。饲料中添加5’-核苷酸后,免疫水平有所回升。当添加到0.04%时,小鼠的各项免疫水平均比NF组有显著提高,达到正常对照组水平。总之,无核苷酸饲料喂养小鼠免疫功能降低。在无核苷酸饲料中添加5’-核苷酸能恢复小鼠免疫功能,当饲料中核苷酸含量为0.04%时小鼠免疫功能恢复到最佳水平。     

孕鼠子宫内5-HT免疫反应阳性肥大细胞的研究

以正常孕鼠和自然抗着床鼠的子宫为实验材料,采用组织化学和免疫组织化学技术,研究了小鼠子宫肥大细胞(mast cell,MC)在胚泡着床前后(孕3~7 d)表达5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的状况.结果表明:(1)绝大多数子宫MC为5-HT免疫反应阳性,阳性率在77.3%~93.6%之间;(2)自然抗着床鼠的5-HT阳性率显著高于正常孕鼠(P<0.05).实验结果提示:(1)子宫MC是孕鼠子宫内5-HT的重要来源,5-HT在着床过程中可能具有免疫调节作用;(2)子宫内MC表达5-HT量的异常与抗着床现象的发生有一定的关系.     

支链氨基酸增强小鼠的游泳能力对其血氨和5-羟色胺变化的研究

目的探讨支链氨基酸（Branched-chain amino acids,BCAAs）对训练小鼠抗疲劳运动能力的影响。方法50只小鼠随机分为实验组（B1、B2、B3、B4）和对照组（C）。实验组分别灌胃补充BCAAs0.45、1.25、3.75和10g/kg.d,对照组灌胃生理盐水。各组小鼠5周递增负荷游泳训练后进行力竭游泳并取材。观察BCAAs对小鼠脑组织5-羟色胺（5-HT）、血氨（PA）和力竭游泳时间的影响。结果实验组小鼠血氨含量升高,脑组织匀浆中5-HT含量下降,但力竭运动游泳时间均显著延长。结果血氨浓度随剂量的增加而增大,C与B1组相比血氨水平无显著性差异,但明显低于B2、B3、B4组（P〈0.01）;C组小鼠5-羟色胺浓度显著高于实验组（P〈0.01）,实验组间随着补充剂量的增大5-羟色胺浓度减小;实验组小鼠力竭游泳能力明显强于对照组（P〈0.01）。实验组间,B2、B3组小鼠力竭时间明显长于B1组（分别为P〈0.05,P〈0.01）,B4组力竭时间与B1、B2、B3组相比则下降。结论BCAAs能够对抗运动性疲劳的发生发展,增强运动能力,但具有量效关系。     

受体缺乏改变小鼠脑内组胺含量及昼夜节律

在乙谜麻醉下,分别于明时(8:00 a.m.)及暗时(8:00 p.m.)断头处死野生型及组胺H1R基因敲除型小鼠,迅速取出脑组织并分离出皮层、纹状体、海马、下丘脑、丘脑、中脑及脑干等脑区.这些脑组织被制成匀浆并用HPLC荧光检测法测量其组胺含量.结果显示暗时处死时,H1R基因敲除型小鼠海马、丘脑、中脑及脑干中的组胺含量明显低于野生型小鼠.明时处死时,野生型小鼠各脑区组胺含量均较暗时处死显著降低,但这一变化在H1R基因敲除型小鼠中并未观察到.这些表明作为组胺的功能靶,H1R不仅介导组胺的功能,而且调节大脑中组胺含量与释放的昼夜节律.     

组胺H1受体缺乏改变小鼠脑内组胺含量及昼夜节律

在乙谜麻醉下,分别于明时(8:00 a.m.)及暗时(8:00 p.m.)断头处死野生型及组胺H1R基因敲除型小鼠,迅速取出脑组织并分离出皮层、纹状体、海马、下丘脑、丘脑、中脑及脑干等脑区.这些脑组织被制成匀浆并用HPLC荧光检测法测量其组胺含量.结果显示暗时处死时,H1R基因敲除型小鼠海马、丘脑、中脑及脑干中的组胺含量明显低于野生型小鼠.明时处死时,野生型小鼠各脑区组胺含量均较暗时处死显著降低,但这一变化在H1R基因敲除型小鼠中并未观察到.这些表明作为组胺的功能靶,H1R不仅介导组胺的功能,而且调节大脑中组胺含量与释放的昼夜节律.