荔枝核有效成分富集物抑制细胞摄取胰岛素的机制

研究并比较了荔枝核(LSE)不同极性的有效成分富集物对HepG2细胞胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)模型糖代谢的作用,并对其机制进行探讨.使用大孔树脂对荔枝核不同极性的有效成分进行富集,分别获得经水和不同体积分数(30%、50%、70%)乙醇洗脱的3种荔枝核提取物(LSE30、LSE50、LSE70),以高浓度胰岛素培养基诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗细胞模型,通过葡萄糖氧化酶法、四唑盐比色实验(MTT)、实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)和免疫印迹实验(Western blot),检测LSE30、LSE50、LSE70对胰岛素抵抗细胞模型的葡萄糖消耗量、细胞存活率和A腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)能量代谢通路的基因表达和蛋白表达的影响.结果表明:HepG2细胞在1μmol/L胰岛素中作用24 h,葡萄糖消耗量明显减少(P0.01),说明实验成功诱导出稳定人肝癌细胞胰岛素抵抗模型;荔枝核提取物可以阻止因高浓度胰岛素诱导的AMPKα2和p-AMPK水平的降低.因此,荔枝核提取物可以改善HepG2细胞胰岛素抵抗模型的能量代谢和脂代谢,抑制脂肪酸和蛋白质的合成.     

DHA对糖脂代谢异常HepG2细胞甘油三酯和胆固醇合成的影响

目的探讨不同剂量的二十二碳六烯酸(DHA)对棕榈酸(PA)培养后的HepG2细胞甘油三酯和胆固醇合成的影响。方法 HepG2细胞分为无血清培养基培养的对照组和含有0.25 mmol/L PA的无血清培养基培养的PA组以及用DHA替代20%、50%、100%PA的DHA替代组。对照组和PA组培养24 h后用无酚红低糖培养基鉴定细胞是否出现胰岛素抵抗,并测定细胞内甘油三酯(TG)、胆固醇(TCH)水平;模型成立后用DHA替代20%、50%、100%PA培养12 h,再次检测细胞葡萄糖摄取量、TG和TCH水平,Western blot检测脂肪酸、胆固醇合成关键基因SREBP-1c和SREBP-2的蛋白表达水平。结果 PA处理后HepG2细胞活性明显下降,葡萄糖摄取量显著低于NC组(P0.05),说明HepG2细胞出现胰岛素抵抗,且PA组TG、TCH水平均有不同程度的升高;用DHA替代PA后,细胞活性有所改善,葡萄糖摄取量较PA组有明显升高(P0.05),TG、TCH水平较PA组均有不同程度的降低,并且SREBP-1c和SREBP-2表达随DHA浓度升高呈下降趋势(P0.05)。结论 DHA可抑制SREBP-1c和SREBP-2的表达,从而抑制TG、TCH的合成,改善细胞脂代谢紊乱及胰岛素抵抗。     

人面果酮抗糖尿病活性的筛选

为研究人面果中酮的抗糖尿病活性,筛选具有较强活性的化合物,采用MTT法检测了化合物对HepG2细胞增殖率的影响.用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞,建立了胰岛素抵抗模型(HepG2/IR),并采用葡萄糖氧化酶法,检测了不同浓度化合物对HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗的影响.结果表明:人面果中酮中化合物1、3、4(除化合物2、5)能够明显促进HepG2/IR细胞的葡萄糖消耗,具有潜在的抗糖尿病活性.     

卵泡膜细胞的胰岛素抵抗对其雄激素合成的影响以及胰岛素增敏剂的调控机制

为探索卵泡膜细胞人工诱导胰岛素抵抗后其雄激素合成的变化,以及胰岛素增敏剂曲格列酮、二甲双胍对胰岛素抵抗卵泡膜细胞的调控作用,采用猪卵巢内卵泡膜细胞进行体外培养,地塞米松诱导,构建胰岛素抵抗的细胞模型,用曲格列酮和二甲双胍分别处理模型细胞,检测培养液中葡萄糖和激素水平的变化以及胰岛素信号分子和雄激素合成关键酶的mRNA表达变化.结果表明:卵巢内卵泡膜细胞发生胰岛素抵抗后能明显增进其雄激素合成能力:曲格列酮、二甲双胍均能降低胰岛素抵抗的卵泡膜细胞的糖代谢异常和雄激素水平.     

卵巢自身胰岛素抵抗放大其颗粒细胞增殖功能

探讨在卵巢自身胰岛素抵抗情况下,颗粒细胞增殖能力、雌激素合成能力的改变。方法是以猪卵巢颗粒细胞作为体外研究对象,利用磷酯酰肌醇-3激酶(PI-3K)特异性抑制剂——渥曼青霉素(Wortamanni,WT)人工诱导胰岛素抵抗的细胞模型。结果显示:①处理组细胞的葡萄糖摄取能力明显低于正常组细胞的葡萄糖摄取能力(756.25±158.81cpm/2×104cellsvs1144.75±81.09cpm/2×104cells,p<0.05);②处理组细胞中有丝分裂激活蛋白激酶1(MAPK1)和MAPK2蛋白的表达水平高于对照组,而该蛋白磷酸化p-MAPK蛋白的表达低于对照组;③处理组卵巢细胞MAPK、增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达(相对灰度)升高;④在胰岛素抵抗的状态下,雌激素以及芳香化酶的表达显著上调。结论为卵巢颗粒细胞的自身胰岛素抵抗,明显提高其分裂增殖能力和雌激素合成效能,该机制可能是PCOS卵巢在超排过程中易发卵巢过度刺激综合的重要机制。     

8-烷基小檗碱同系物体外降糖作用

为研究8-烷基小檗碱同系物在体外对糖代谢的影响,采用与人肝细胞表型相似的HepG2细胞,检测24 h后培养液中葡萄糖消耗量,用MTT法监测细胞增殖的情况.结果表明:8-烷基小檗碱同系物在中糖(11.1mmol/L)状态下可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量有不同程度的增加,其中以8-十六烷基小檗碱最为显著.MTT结果显示8-烷基小檗碱同系物对HepG2细胞的增殖有显著的抑制作用.8-烷基小檗碱同系物随着其烷基碳链的延长,其降糖效果越来越明显.     

新资源食品提取物辅助降血糖配方的确定

以α-葡萄糖苷酶抑制剂体外模型实验筛选出4种具有较强活性的新资源食品提取物原料,进行混料配方优化设计,获得较优配方比例为:青钱柳提取物26.05%,葡萄皮提取物10.00%,桑叶提取物22.13%,枇杷叶提取物41.82%。采用高浓度葡萄糖刺激HepG2细胞体外降血糖评价模型对优化配方进行功能评价,结果显示配方可显著提高胰岛素抵抗模型的葡萄糖利用率,对造成的胰岛素抵抗具有一定的改善作用,且呈现一定的浓度依赖效应。     

α-亚麻酸对胰岛素抵抗HepG2细胞脂类合成基因表达的影响

目的分析在α-亚麻酸(ALA,C18:3)干预后,胰岛素抵抗Hep G2(insulin resistance Hep G2,IR-Hep G2)细胞模型脂类合成关键基因表达水平的变化。方法 Hep G2细胞造模期分为两组,由无血清培养基培养的对照组(normal control group,NC)以及含有0.25 mmol/L软脂酸的无血清培养基培养的软脂酸组(palmitic acid,PA),培养24 h后鉴定细胞胰岛素敏感性并测定细胞内胆固醇(total cholesterol,TCH)、甘油三酯(Tryglyceride,TG)水平,然后用ALA替代20%的PA培养12 h,再次鉴定细胞胰岛素敏感性并检测细胞内TCH、TG水平,real time q PCR检测TG、TCH合成关键基因mRNA水平,Western blot检测TG、TCH合成关键基因蛋白表达量。结果 IR-Hep G2细胞模型建立成功,并且PA组TCH水平显著高于NC组(P=0.0016),出现了脂代谢紊乱;ALA干预IR-Hep G2细胞12 h后,细胞活性有所恢复,与PA组相比,ALA组胰岛素诱导基因(insulin induced genes,INSIGs)及脂类合成关键蛋白的mRNA表达无明显变化;与基因表达结果不一致的是,ALA干预后可以特异性提升细胞内INSIG-2蛋白相对表达量,但对INSIG-1蛋白相对表达量没有明显影响。同时,ALA可以显著抑制55k Da固醇调节元件结合蛋白-2(sterol regulatory element-binding protein-2,SREBP-2)、HMG-Co A还原酶(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coen-zyme A reductase,HMGCR)及脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)蛋白的表达,且ALA组细胞内TG水平显著降低(P=0.0119)。结论 0.05 mmol/L ALA干预IR-Hep G2细胞后,通过提升INSIG-2蛋白的表达,抑制SREBP-2从内质网到高尔基体的剪切成熟活化,降低细胞内55k Da SREBP-2水平及HMGCR的表达,并且抑制FASN表达,从而抑制了TG/TCH的合成。     

有氧运动和茶多酚对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和血清炎症因子的影响

探讨有氧运动和茶多酚对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗和血清炎症因子的影响.采用4周高糖高脂饮食加小剂量注射链脲佐菌素(STZ)(30 mg·kg-1)构建T2DM大鼠模型.实验共5组,分别为正常对照组(C组)、T2DM对照组(DC组)、T2DM运动组(DE组)、T2DM茶多酚组(DT组)、T2DM运动加茶多酚组(DET组).运动组大鼠进行1 h·d-1,每周6 d的无负重游泳训练,茶多酚组以600 mg·kg-1的剂量进行灌胃.8周后取血测空腹血糖、胰岛素及炎症因子TNF-α、IL-6和CRP水平.结果显示:与DC组比较,DE组、DT组和DET组大鼠空腹血糖和胰岛素抵抗指数均显著下降(P0.05或P0.01),胰岛素仅DET组下降有显著性(P0.05);DET组与DE组、DT组比较,空腹血糖、胰岛素和胰岛素抵抗指数均进一步降低,但仅胰岛素抵抗指数的值与DE组有显著差异(P0.01).与DC组比较,DE组、DT组和DET组大鼠血清TNF-α和CRP水平均显著性降低(P0.05或P0.01),而IL-6仅DT组的下降有显著差异(P0.05);DET组与DE组、DT组比较,仅TNF-α有进一步下降的趋势(P0.05).胰岛素抵抗指数与血清炎症因子TNF-α和IL-6水平之间呈正相关(P0.01).表明有氧运动和茶多酚能改善T2DM大鼠的胰岛素抵抗,其机制可能与炎症因子TNF-α和IL-6水平的下降有关,两者联合干预的叠加效果不太明显,但有进一步改善的趋势.     

壳寡糖胍对胰岛素抵抗及相关蛋白的作用

针对壳寡糖胍(COSG)对动物体内胰岛素抵抗治疗效果及相关机制尚不明确的问题,建立高脂高糖饮食联合链脲佐菌素诱导的2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,并进行COSG灌胃给药治疗8周,研究COSG对T2DM大鼠体内胰岛素抵抗及相关信号通路的影响.结果显示,COSG可明显降低T2DM大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)水平并提高血清中高密度脂蛋白(HDL)水平;此外,COSG可下调T2DM大鼠的空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS)含量,并减小T2DM大鼠胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).进一步研究相关蛋白发现,COSG可抑制骨骼肌中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的磷酸化以及提高胰岛素受体底物-1(IRS-1)酪氨酸位点的磷酸化,并提高蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平和促进葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)转移至细胞膜,从而促进细胞对葡萄糖的摄取;另外,COSG还可以降低磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和肌糖原水平,进而抑制糖异生.从而,COSG达到改善胰岛素抵抗的作用.总之,COSG可改善T2DM大鼠胰岛素抵抗,具有良好的应用前景.     

地塞米松和胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机理

用地塞米松和胰岛素长期作用3T3—L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗，用胰岛素增敏剂罗格列酮改善胰岛素抵抗，微量化GOD=POD法检测培养基中残存的葡萄糖，并检测细胞中葡萄糖转运子G1ut4基因和蛋白及胰岛素信号传递元件IRS—1的基因变化．探讨了地塞米松和胰岛素诱导3T3—L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗的机理．结果发现：①地塞米松和胰岛素诱导3T3—L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗，细胞对葡萄糖的摄取减少．罗格列酮改善抵抗后，葡萄糖的摄取较抵抗组增加．②抵抗时，葡萄糖转运子G1ut4基因和蛋白水平明显降低，改善后基因表达上调显著，蛋白水平升高，介于正常对照组与抵抗组之间．②IRS-1在抵抗时下调，用罗格列酮改善后，IRS—1的基因水平无明显变化．     

胰岛素抵抗及高血糖对GFAT活性的影响

分别观察了胰岛素抵抗和高血糖水平对己糖胺途径限速酶GFAT活性的影响.在alloxan高血糖小鼠模型中,与正常对照组比较,血清果糖胺水平升高了15.9%,肾组织GFAT活性升高了32.8%;经胰岛素治疗后,血清果糖胺水平降低了9.7%,其肾组织GFAT活性也降低了l9.4%.在高糖高脂饲料诱导的胰岛素抵抗的IR小鼠中,与同批正常对照组比较,正糖钳实验中稳态时葡萄糖输注率G IR值降低了69.3%,胰岛素耐量实验中的AUC值升高了38.1%,其肾脏组织GFAT活性也增加了26.6%.在胰岛素诱导的具有胰岛素抵抗的IR-H IR c细胞模型中,与正常H IR c细胞比较,其10、25 nmol/L胰岛素诱导的葡萄糖摄取能力分别降低了25.3%、21.1%,而GFAT活性分别增加了29.7%、46.5%.可见,GFAT活性与一段时间的平均血糖水平和胰岛素抵抗状态密切正相关.     

高脂饲养联合链脲佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型的骨骼肌特征分析

目的观察高脂饲养联合链脲佐菌素(STZ)注射建立2型糖尿病大鼠模型的基本特征,分析2型糖尿病大鼠的骨骼肌变化特征。方法采用9周高脂饲养建立外周胰岛素抵抗大鼠模型,辅以小剂量STZ注射构建2型糖尿病大鼠模型,分别于STZ注射前、STZ注射后持续6周取尾血测空腹血糖(FBG); STZ注射前、STZ注射后第2周、第6周测量胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI)。STZ注射后第6周取比目鱼肌ATP-ase染色观察并分析不同类型肌纤维萎缩情况。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠体质量、FINS和ISI显著降低(P 0.01),FBG和HOMA-IR显著升高(P 0.01)。②STZ注射后,糖尿病组大鼠血糖逐渐升高,在第4周时趋于稳定; FINS显著降低,在第2周时趋于稳定。③2型糖尿病模型发展到第6周时,Ⅰ型肌纤维平均横截面积较对照组降低34.8%(P 0.01),Ⅱ型肌纤维平均横截面积降低幅度为14.1%(P 0.05)。结论 9周高脂饲养联合STZ注射成功建立2型糖尿病大鼠模型,建模后第4周糖代谢指标趋于稳定,在第6周时表现出以Ⅰ型肌纤维萎缩为主的骨骼肌特征。     

高效转染HepG2细胞的逆转录病毒载体系统的构建及应用

为构建含绿色荧光蛋白(EGFP)和人胰岛素原基因的逆转录病毒表达载体,并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达,将IRES-EGFP片段克隆到含调控元件的人胰岛素原基因逆转录病毒表达载体(pLXSN-GI-Ins)中,构建得到表达质粒pLXSN-GI-Ins-EGFP.经脂质体介导转染HepG2细胞后,各孔分别加入含有30.0 mmol/L葡萄糖的培养液继续培养24 h,在荧光显微镜下观察EGFP基因的表达,检测细胞上清液中的胰岛素值.数据显示,成功构建逆转录病毒表达质粒pLXSN-GI-Ins-EGFP.转染HepG2细胞后48 h,表达EGFP基因的细胞数目占总细胞数目的比值为(38.0±5.0)%.结果表明,构建了含EGFP和调控元件的人胰岛素原基因逆转录病毒表达载体,并且能够在HepG2细胞中成功表达.     

胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中脂联素mRNA表达的研究

目的:通过本实验研究脂联素mRNA在胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中的表达.方法:培养3T3-L1前脂肪细胞,诱导分化为脂肪细胞,采用地塞米松诱导建立3T3-LI脂肪细胞胰岛素抵抗模型,运用RT-PCR技术检测脂联素mRNA的表达.结果:随着胰岛素抵抗的发生,脂联素mRNA的表达量明显降低,经过罗格列酮干预胰岛素抵抗后,干预组脂联素mRNA表达量较空白组升高了约103.5%.结论:脂联素mRNA表达量与胰岛素抵抗的发生关系密切,其有望作为治疗胰岛素抵抗的靶基因.     

红芪多糖对2型糖尿病大鼠血脂代谢紊乱及胰岛素抵抗的影响

探究红芪多糖(HPS)对2型糖尿病(T2DM)大鼠脂代谢紊乱及胰岛素抵抗的影响。Wistar雄性大鼠,随机留取5只作为空白对照组(A组),其余大鼠一次性注射大剂量STZ制造T2DM模型,按体重随机分为模型对照组(B组)、二甲双胍组(C组)(67.5mg·kg~(-1)·d~(-1))、红芪多糖高剂量组(D组)(200mg·kg~(-1)·d~(-1))、红芪多糖低剂量组(E组)(100mg·kg~(-1)·d~(-1))。A、B组均灌胃等量超纯水,C、D、E组按上述剂量用药,各组继续给予高脂饲料喂养。连续灌胃6w,6w末处死大鼠,检测空腹血糖(FPG)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL),并计算胰岛素敏感性指数(ISI)。与模型对照组比较,二甲双胍组、红芪多糖高剂量组、红芪多糖低剂量组血糖值均显著降低(P0.05或P0.01),TG、TC、LDL均显著升高(P0.05或P0.01),HDL均显著降低(P0.05或P0.01),胰岛素的敏感性指数升高(P0.01)。HPS对T2DM大鼠有降低血糖,抑制TG、TC、LDL的升高,抑制HDL的降低,提高胰岛素的敏感性指数,减弱胰岛素抵抗的作用,从而缓解T2DM大鼠病情及防止其并发症的发生。     

透析患者红细胞脂肪酸谱与 胰岛素抵抗的相关分析

目的:研究血液透析和腹膜透析患者中红细胞脂肪酸谱与胰岛素抵抗的关系.方法:收集151例血液透析(血透组)和172例腹膜透析(腹透组)患者的血样,检测红细胞脂肪酸谱和评估胰岛素抵抗水平,并对二者之间进行t检验、多元Logistic回归和相关性分析.结果:血透组和腹透组的胰岛素抵抗发生比例分别为43%和32%,两组间脂代谢存在显著差异.根据胰岛素抵抗水平将透析人群分为非胰岛素抵抗组、轻度胰岛素抵抗组和严重胰岛素抵抗组.单因素分析表明体质指数、甘油三酯、高密度脂蛋白、二十四碳一烯酸、十四烷酸、二十二烷酸存在显著差异;Logistic多元回归分析表明透析人群甘油三酯对胰岛素抵抗有显著影响;相关性分析表明红细胞脂肪酸谱饱和脂肪酸与C-反应蛋白、IL-6明显相关.结论:血液透析和腹膜透析人群脂代谢存在显著差异,血液透析患者较腹膜透析患者更容易发生胰岛素抵抗.红细胞脂肪酸谱与透析患者胰岛素抵抗密切相关,摄入饱和脂肪酸过多可能会增加胰岛素抵抗.     

胰岛素增敏剂对卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗的调控作用

以人工诱导卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)细胞模型,观察细胞内关键信号分子的表达以及胰岛素增敏剂的体外作用。通过沃曼青霉素(Wortmannin,WT)特异性地抑制胰岛素传导途径中磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)通路,作用于体外培养的猪卵巢颗粒细胞48h后,再加入曲格列酮、二甲双胍、小檗碱、隐丹参酮48h,观察对IR的改善情况。以葡萄糖氧化酶法检测细胞对葡萄糖的消耗量,以蛋白印记法(Western Blot)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光PCR法,检测葡萄糖转运蛋白4(Glut4)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)、核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)表达。结果表明:胰岛素糖代谢途径被WT阻滞,IR细胞对培养基中葡萄糖的摄取明显抑制。二甲双胍、小檗碱和隐丹参酮,都能使葡萄糖摄取增加,但稍逊于曲格列酮。IR细胞的Glut4的表达下降,MAPK和PPAR-γ表达升高;胰岛素增敏剂可以部分逆转IR细胞的上述信号蛋白的表达异常,以曲格列酮作用最为显著。总之,WT阻断PI-3K途径产生IR,胰岛素增敏剂能改善IR,隐丹参酮和小檗碱增敏的作用类似二甲双胍,而曲格列酮作用最为显著。     

苦瓜提取物对高脂肪喂食诱导的肥胖和胰岛抵抗C57BL/6j小鼠保护作用研究（英文）

通过高脂肪喂食诱导的C57BL/6j小鼠动物模型研究苦瓜提取物对肥胖和胰岛抵抗的保护作用。小鼠喂养2周后成功建立肥胖小鼠模型,随机分为正常对照组,肥胖小鼠模型组和不同浓度的苦瓜提取物灌胃组,灌胃质量分数分别为13.5、27和54 g/kg。以10周为期,每天以同等体积流质灌胃两次,其中,正常对照组和模型组用w=0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,药物组用不同浓度的苦瓜提取物灌胃。记录小鼠每日食物摄入量和每周体质量。同时测定内脏白色脂肪组织质量、血清甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血糖和胰岛素水平,最后根据HOMA法计算胰岛素抵抗指数,HE染色确定附睾白色脂肪组织的脂肪细胞是否肥大。结果显示,54 g/kg苦瓜提取物组对小鼠摄食无影响,但小鼠体质量、附睾和内脏白色脂肪组织总质量减少,该剂量的苦瓜提取物显著抑制被提升的血清TG、LDL-C、葡萄糖、胰岛素浓度和胰岛素抵抗指数;而27 g/kg苦瓜提取物则显著降低TG浓度;13.5、27和54 g/kg苦瓜提取物分别显著升高HDL-C水平;苦瓜提取物能剂量依赖性地减轻高脂饮食诱导的脂肪细胞肥大。     

运动对2型糖尿病胰岛素抵抗相关因子的影响研究

通过分析运动对2型糖尿病胰岛素抵抗的相关因子的影响,发现2型糖尿病主要是胰岛素抵抗和胰岛素分泌受损所导致.因此,只要了解胰腺β细胞的胰岛素抵抗程度,就可以加以弥补,使葡萄糖耐受性维持正常.