小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养

目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离与培养。方法取BALB/c小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对MEF的生长形态进行观察,并对传代细胞培养液、胚胎胎龄、胰蛋白酶浓度进行筛选。结果 MEF在体外为贴壁生长型细胞,第三、四、五代细胞纯度较高且增殖最为旺盛;添加血清的M199和DMEM均能较好的满足原代细胞的生长,两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异;11.5～16.5d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;0.1%胰蛋白酶消化MEF时间以8～11min为宜。结论通过对MEF分离培养影响因素的筛选,为MEF的进一步研究奠定了基础。     

扬子鳄胚胎味蕾发生的初步观察

在４例不同时期的扬子鳄胚胎中观察了味蕾的形态发生及细胞分化过程。孵化至第４８天，部分舌乳头上皮的基部出现味蕾原基。第５２天味蕾体积增大，细胞数量显著增多。第５６天部分味蕾出现味孔，味蕾细胞出现基细胞、支持细胞和味觉细胞的分化。第６２天味蕾的味孔均形成，部分味孔扩大，味毛增多并伸出味孔外。味觉细胞在分化过程中，其细胞核内的异染色质及细胞质中的线粒体均逐渐增多。     

扬子鳄胚胎食管的组织发生

本文观察了１２例不同时间的扬子鳄胚胎中食管的组织发生过程。孵化第１０天食管从前肠中出现形态分化，之后，中胚层间充质细胞逐渐向食管上皮周围聚集。第２４天粘膜下层及环行肌层出现。第４０天纵行肌层开始形成。第５０天以后粘膜肌及固有膜逐渐明显。     

扬子鳄胚胎背部皮肤及鳞甲的发生

本文观察了１６例不同时间的扬子鳄（Ａｌｌｉｇａｔｏｒ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）胚胎背部皮肤及鳞甲的形态和组织发生过程，孵化第２０天，来自胚胎中胚层生皮节的间充质细胞开始向有皮下迁移，表皮仅具周皮层与生发层两层细胞，第２８天背部鳞片开始明显，左右鳞片之间出现很浅的鳞间沟，前后鳞片交界处的原始表皮，真皮层开始向外突出形成鳞甲原基，第３４天鳞甲原基突出伸长，第４０天背鳞的纵嵴明显，第３４－５０天中，鳞甲后级基     

空间辨别性学习记忆活动对大鼠海马齿状回SDF-1免疫阳性细胞的影响

目的:探讨空间辨别性学习记忆活动引致大鼠海马形态学可塑与海马齿状回内基质细胞衍生因子-1(SDF-1)表达的关系。方法:用水迷宫训练SD大鼠建立空间辨别性学习记忆模型,用免疫组化方法和图像分析技术检测大鼠海马齿状回SDF-1免疫阳性细胞的变化。结果:(1)对照组大鼠海马齿状回可见少量SDF-1免疫阳性细胞,阳性细胞胞体呈圆形或椭圆形,胞核较大,胞浆呈棕黄色。阳性细胞主要分布在齿状回颗粒细胞层;游水组大鼠海马齿状回SDF-1免疫阳性细胞的数量和形态与对照组的相比未见差异;模型组大鼠海马齿状回SDF-1免疫阳性细胞数量随着训练时间逐渐增多,细胞形态同对照组,胞浆呈深棕黄色,并有一至多个突起。(2)对照组与游水组7、14、21 d的大鼠海马齿状回SDF-1免疫阳性细胞在形态和数量未见统计学差异(P>0.05);对照组与模型组7、14 d大鼠海马齿状回SDF-1免疫阳性细胞的形态和数量未见统计学差异(P>0.05);模型21 d大鼠齿状回SDF-1免疫阳性细胞的形态和数量与对照组的比有明显统计学差异(P<0.01)。结论:大鼠海马齿状回内SDF-1阳性细胞可能参与空间辨别性学习记忆活动引致的形态学可塑性。     

人与大鼠脂肪干细胞提取方法及生物学特性的比较研究

目的:研究人脂肪干细胞与大鼠脂肪干细胞的提取方法并对比差异,对培养出的细胞做形态学观察及表面标记鉴定.为今后ADSCs分化能力相关研究提供方法及依据.方法:获取人脂肪及大鼠脂肪,利用胶原酶消化法进行ADSCs提取,消化传代以纯化细胞.对比观察细胞形态,并取第3代的细胞进行细胞爬片HE染色、生长曲线测定、成脂和成骨诱导,流式鉴定表面标记物.结果:在相同的培养环境下,两种细胞均呈成纤维细胞样贴壁生长,h ADSCs原代第3天,r ADSCs原代第1天即可见较多细胞伸展为长梭形或短梭形,HE染色可见二者大小形态差异;成脂及成骨诱导组分别用油红"O"、茜素红染色为阳性,对照组为阴性.传代培养后,h ADSCs约1周,r ADSCs约6 d长满.流式鉴定示:二者均CD29(+),CD45(-),CD90(+),CD106(-),符合间充质干细胞特性.结论:本实验建立了高效提取ADSCs的方法,经过比较发现r ADSCs成骨能力较弱,在进行成骨向分化研究时不推荐首选;成脂能力与h ADSCs相似.r ADSCs是较好的动物来源脂肪干细胞,可广泛应用于再生医学研究.     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化-肝癌动物模型的建立

目的 建立大鼠肝纤维化-肝癌模型并动态观察大鼠肝纤维化-肝癌发生过程中的病理形态特点.方法 用0.01％二乙基亚硝胺（DEN）溶液间断喂养SD大鼠诱发肝癌,对大鼠肝脏在不同诱癌阶段的病理变化进行动态观察.结果 用药第4周后,肝细胞点状坏死及炎性细胞浸润;8周时,肝细胞严重脂肪变性、灶性坏死,门管区出现纤维组织增生;9-12周时,增生的胶原束包绕并分割肝小叶,正常的肝小叶结构被破坏,假小叶形成;15周后存活大鼠均形成肝癌,肝癌细胞排列成条索状或团块状,诱癌组为100％成癌（8/8）.结论 成功建立从肝纤维化发展成肝癌的动物模型,设立间歇期提高了大鼠癌变末期的成活率,该模型是动态研究肝癌发生发展进程的理想动物模型.     

中华蜜蜂工蜂复眼的胚后发育研究

通过形态解剖、免疫组织化学、原位细胞凋亡检测等技术,对中华蜜蜂工蜂复眼的胚后发育过程进行了比较研究.结果表明:中华蜜蜂的复眼产生自幼虫头壳表皮的眼分化中心.在3龄幼虫出现的形态发生沟沿背-腹轴方向扫过整个复眼发生区,其后部细胞聚集成群,最终形成光感受器.细胞的增殖从幼虫早期开始,到末龄幼虫达到高峰;活跃分裂的细胞主要集中在两条形态发生沟外侧的增殖细胞带内;那里的细胞凋亡也非常活跃.中华蜜蜂视觉细胞发出的视神经进入前脑大约是在蛹发育的第5天.     

家蚕微孢子虫侵染家蚕胚胎细胞与草地贪夜蛾细胞的病变比较

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)是引起家蚕微粒子病的病原,是一种无线粒体的专性细胞内寄生的原虫.将N.bombycis经KOH处理后,接种于家蚕胚胎细胞(BmE细胞)和草地贪夜蛾卵巢细胞(Sf21).用倒置显微镜对微孢子虫在宿主细胞中感染增殖过程中的形态变化进行了跟踪观察,比较两种细胞接种N.bombycis后所出现的形态学变化.接种后第12天起,两种细胞内均充满不同发育阶段的孢子,并可见大量的胞外游动.在感染晚期,Sf21中有许多孢子从细胞中逸出,留下许多空泡,细胞还保持一定的完整性,而家蚕胚胎细胞则在感染后期完全崩解.这种差异可能是Sf21作为一种非原宿主细胞,对N.bombycis的感染有一定耐受性有关.     

北京鸭腔上囊的研究：Ⅶ,B淋巴细胞分化的免疫球蛋白表达

应用兔抗鸭IgM和5.7S IgG血清,以间接免疫荧光法研究北京鸭腔上囊中B淋巴细胞的分化,得到以下结果:(1)B淋巴细胞表面和胞质免疫球蛋白出现的时间:胚胎11天,CIgM;胚胎15天SIgM;胚胎18天 SIgG;胚胎21天CIgG。(2)B淋巴细胞分化可分为3个阶段.第1阶段(胚胎11～15天),CIgM~+淋巴干细胞分化为SIgM~+前淋巴母细胞;第2阶段(胚胎15～21天),SIgM~+前淋巴母细胞分化为SIgM~+、SIgG~+淋巴母细胞;第3阶段(胚胎21～28天孵出),SIgG~+淋巴母细胞分化为中、小淋巴细胞,并开始从腔上囊迁出。(3)北京鸭腔囊中B淋巴细胞分化过程与鸡具有平行的时间关系。     

大鼠海马神经元neurobasal无血清的原代培养方法

目的:建立纯度和活力较高的无血清原代培养海马神经元的方法。方法:新生SD大鼠海马,用neuro-basal培养基培养,免疫荧光鉴定神经元纯度,MTT法检测其活力。结果:神经元接种12~24 h后贴壁,并长出细小突起,3 d具有典型神经元形态特征,4 d突起形成稀疏的神经纤维网络,8 d后神经元5~10个聚集成团,突起密集,生长稳定,12 d后出现细胞碎片。Tubulin荧光染色显示清晰的神经元,突起绵长且相互交织,占细胞总数的66.7%;GFAP荧光染色的细胞数量少,突起短粗,占33.7%。培养1~5 d MTT代谢率逐渐上升,6~11 d处于平台期,11 d后下降。结论:neurobasal无血清培养获得的神经元纯度大于60%,6~11 d的细胞适于细胞学实验。     

Wnt-dependent de novo hair follicle regeneration in adult mouse skin after wounding

The mammalian hair follicle is a complex 'mini-organ' thought to form only during development; loss of an adult follicle is considered permanent. However, the possibility that hair follicles develop de novo following wounding was raised in studies on rabbits, mice and even humans fifty years ago. Subsequently, these observations were generally discounted because definitive evidence for follicular neogenesis was not presented. Here we show that, after wounding, hair follicles form de novo in genetically normal adult mice. The regenerated hair follicles establish a stem cell population, express known molecular markers of follicle differentiation, produce a hair shaft and progress through all stages of the hair follicle cycle. Lineage analysis demonstrated that the nascent follicles arise from epithelial cells outside of the hair follicle stem cell niche, suggesting that epidermal cells in the wound assume a hair follicle stem cell phenotype. Inhibition of Wnt signalling after re-epithelialization completely abrogates this wounding-induced folliculogenesis, whereas overexpression of Wnt ligand in the epidermis increases the number of regenerated hair follicles. These remarkable regenerative capabilities of the adult support the notion that wounding induces an embryonic phenotype in skin, and that this provides a window for manipulation of hair follicle neogenesis by Wnt proteins. These findings suggest treatments for wounds, hair loss and other degenerative skin disorders.     

链脲霉素实验性大鼠妊娠糖尿病对子鼠心肌细胞超微结构的影响

目的:通过研究链脲霉素(streptoaotocin,STZ)实验性大鼠妊娠糖尿病对子鼠在不同孕期心肌细胞超微结构的影响,探讨妊娠糖尿病致胎儿心脏发育异常的发生机制.方法:将54只SD孕鼠分为STZ注射组(30只)和柠檬酸缓冲液注射组(24只)作对照观察,按取材时孕龄不同将两组又分为第13、16和19天3个亚组.对STZ注射组孕鼠,给予新配质量分数为2%STZ溶液,按STZ 40mg/kg,一次性腹腔注射,3 d后空腹尾静脉采血监测血糖,并测尿糖、体质量.对照组用同样方法注射等量的柠檬酸钠缓冲液.孕鼠于孕龄第13、16、19天随机分批剖宫,取子鼠心脏组织做超微结构观察.结果:STZ注射组子鼠心肌细胞超微结构可见不同程度病理变化:细胞间连接较少、间隙宽窄不一,肌束排列不规整,胞膜结构不完整;胞质电子密度较高,线粒体肿胀呈空泡状气球样变,嵴减少,粗面内质网减少、扩张,可见脂质样小滴;胞核大小不一,不规则圆形,核膜结构不清,核染色质分布不均,可见异染色质;胞外基质可见有胶原纤维排列成束状,毛细血管腔外可见红细胞,有细胞器崩解痕迹.结论:STZ实验性大鼠妊娠糖尿病可致子鼠心肌发生超微结构的异常改变,可能为糖尿病母亲致儿心脏畸形的病理基础.     

胎儿肝脏的形态学研究

187例河南地区胎儿肝重、体重被测量,并用光镜观察肝的组织发生。结果表明:肝重(y)与体重(x)有显著的正相关关系,相关系数为0.9861,回归方程 =-0.0367+0.0417x;肝重随胎龄(x)变化的回归方程 =1.772e~(0.4359x);15-20周肝细胞渐排列为细长的索;23周以前肝中造血细胞(HC)甚多,24周肝血窦中HC数量减少,故肝中HC量减少时的顺序是先血窦后窦周隙;35周时各处HC数量大大减少,这提示,肝造血功能于35周急骤下降。     

不同培养基对山羊毛囊体外培养的影响研究

为得到1种简捷而适宜的山羊毛囊体外培养方法,采用3因子3水平的拉丁方正交试验设计(L9(34))方法,对比研究了无血清的Williams E培养基、无血清的DMEM培养基和添加10％FCS(胎牛血清)的DMEM培养基,及其在3种培养基中分别添加0、2和10ng／mL 3种不同质量浓度的血管内皮细胞生长因子(VEGF)和表皮细胞生长因子(EGF)时对毛囊体外培养的影响。将成年青山羊皮肤上的单根毛囊完整地分离出来,并同时平行培养在9种培养基中,借助于倒置显微镜和目镜测微尺随时不断地观察毛囊生长的形态变化和测量毛根的长度。结果发现:山羊游离毛囊在9种培养基中均能很好地生长;但以无血清的培养基和在Williams E培养基的效果最好;分别和同时添加2％～10％的VEGF和EGF时可加快毛囊的生长;添加10％FCS和不添加细胞生长因子时毛囊也能生长,但生长速度较慢。     

Induction of hair growth by implantation of cultured dermal papilla cells

Mammalian hairs are formed by differentiation and keratinization of cells produced in the epidermal matrix (Figs 3, 4). Using the rodent vibrissa follicle as a model, transplantation studies have shown that the dermal papilla, a discrete population of specialized fibroblasts, is of prime importance in the growth of hair. Papillae induce hair growth when implanted into follicles and can interact with skin epidermis to form new hair follicles. When grown in culture, papilla cells display singular morphological and behavioural characteristics compared with connective tissue cells from other skin sources. We report here that serially cultured adult papilla cells can induce the growth of hair when implanted into follicles which otherwise would not grow hairs. This finding presents an opportunity to characterize properties distinguishing the papilla cell population from other skin fibroblasts, and, more specifically, those which control hair growth. The eventual application of this work to human hair replacement techniques can also be envisaged.     

碱性磷酸酶与酸性磷酸酶在小鼠前胃癌癌变过程中的表达及意义

目的:用NSEE作为诱变剂建立NIH小鼠前胃癌癌变过程中不同时期的模型,探讨碱性磷酸酶(ALP)和酸性磷酸酶(ACP)在小鼠前胃癌癌变过程中的表达及意义.方法:从灌胃之日起,分别在14d、28d、42d、56d、70d、84d处死小鼠,均取其前胃,采用病理切片和聚丙烯酰胺凝胶电泳对小鼠前胃癌癌变进程中细胞形态的改变、ALP和ACP的表达进行了跟踪研究.结果:ALP活性随着癌变进程呈递增趋势,给药后14d、28d、42d、56d,与对照组相比呈显著性差异(P<0.05),而70d、84d,与对照组相比呈极显著性差异(P<0.01);ACP活性在给药后14d、28d、42d、56d随着小鼠前胃癌癌变进程也呈递增趋势,而给药后70d,与对照组相比呈显著性差异(P<0.05),84d,与对照组相比呈极显著性差异(P<0.01);ALP和ACP表达存在正相关关系(r=0.907,P<0.01).结论:在诱发NIH小鼠前胃癌癌变过程中,ALP、ACP的表达均呈现升高趋势,两者成正相关关系,同时均与组织细胞形态的改变相对应.     

胎儿肾上腺的研究

本文观测了河南地区１９８例胎儿肾上腺。肾上腺重（ｙ）与体重、胎龄分别有很好的直线、指数曲线回归关系，回归方程为和；１５周胎肾上腺皮、髓质分明，皮质分化出球状、束状和网状三带，以后的发育中皮质所占比例变小，皮质中网状带渐薄，束状带渐厚。     

C_(57)BL/6遗传背景下无毛突变基因对胸腺及皮肤结构的影响

目的　探讨在C57BL/6背景下突变基因对胸腺及皮肤结构的影响。方法　观察脱毛规律 ,并用常规组织学方法对 19日龄正常C57BL/6小鼠及C57BL/6无毛小鼠的胸腺及皮肤结构进行了对比观察。结果　C57BL/6无毛小鼠 12日龄左右发生脱毛现象 ,2周左右时间除触须外全部脱净 ,并终生保持无毛状态 ;随年龄增长 ,头部、腹部和体侧形成特别的皱纹和褶痕 ,似犀牛状 ,指甲过度生长。皮肤有黑色素沉着 ,而且表面出现一些小的丘疹。组织学发现 19日龄C57BL/6无毛小鼠皮肤表皮有一层角化的角质层 ,毛干消失 ,毛囊腔宽大 ,在真皮深部可见毛球的残余部分 ,皮脂腺结构正常。 19日龄C57BL/6无毛小鼠胸腺的形态、结构与对照鼠无明显差异 ,但萎缩较早。结论　无毛突变基因影响C57BL/6小鼠的毛发周期和胸腺退化     

异常光照周期对小鼠宫内胚胎的影响

目的　研究不同光照方法导致节律紊乱对生物体胚胎生长、发育和生殖功能的影响。方法　 ( 1)雌小鼠以持续光照、持续黑暗、反相光照三种光照处理一周后 ,与雄小鼠合笼 ;( 2 )雌小鼠与雄小鼠合笼后 ,孕鼠以持续光照、持续黑暗、反相光照三种光照处理至 18日龄。观察整 18日龄孕鼠吸收胎、死胎情况 ,测量活胎身长、尾长 ,称胎重、胎盘重 ,并分离肝脏 ,称重计算肝脏相对重量比。结果　孕前和孕期反相光照组 ,胎重和着床数显著降低 ,吸收胎数显著增加 ;孕期反相光照组 ,死胎数显著增加。孕期持续光照组的吸收胎数显著增加。结论　异常光照周期可影响小鼠宫内胚胎的生长和发育