川楝内生放线菌多样性及群落结构研究

为深入挖掘川楝药材中的微生物资源,研究分析了川渝地区川楝内生放线菌的多样性和群落结构.运用PCR-DGGE技术对重庆万州、四川资阳、四川遂宁三个地区采集的川楝样品进行分析.DGGE图谱显示不同地区相同部位的样品以及相同地区的不同部位之间川楝内生放线菌都存在多样性差异,这种差异来自于地域环境和自身代谢水平的不同.不同部位总体上呈现树皮的多样性最丰富,而果实的多样性最差.对DGGE条带进行回收测序,共获得24条序列,归于11个属,链霉菌属(Streptomyces)为优势菌属占25%,其余的川楝内生放线菌归于为芽球菌属(Blastococcus)、气微菌属(Aeromicrobium)、中村氏菌属(Nakamurella)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、棒杆菌属(Corynebacterium)、红球菌属(Rhodococcus)、冷杆菌属(Cryobacterium)、微杆菌属(Microbacterium)、诺卡氏菌属(Nocardioides)、利夫森氏菌属(Leifsonia)等稀有放线菌属,占总数的75%.结果表明分布于不同地域的川楝各组织内生放线菌多样性及群落结构存在差异,蕴藏着丰富的放线菌资源.     

唐古特大黄内生放线菌分离鉴定及生防作用研究

以唐古特大黄为材料,采用匀浆涂布法进行内生放线菌的分离,并运用平板对峙法和生长速率法筛选内生放线菌的抑菌活性;皿内抑菌结果表明,菌株4-21对稻瘟病菌抑制率高达84.12%.通过形态学观察、生理生化特性检测和16SrDNA序列分析将菌株4-21鉴定为Streptomyces albidoflavus.通过盆栽试验证明,菌株4-21对水稻稻瘟病具有良好的防治效果,其相对防治效果为52.73%.结果表明,内生放线菌4-21在水稻稻瘟病的生物防治中具有潜在的应用价值.     

宁夏灵武白芨滩国家级自然保护区苦豆子内生放线菌区系分析

从宁夏灵武白芨滩国家级自然保护区不同土壤类型、不同优势植被的6个样区,采集苦豆子种子及健康植株60份,分离出内生放线菌288株．鉴定表明,同一植株不同组织中,内生放线菌数量以根部最多,其次为种子,叶部最少;淡灰钙土中苦豆子内生放线菌数量比风沙土中多;旱中生杂类草沙生植被草原苦豆子内生放线菌数量最多．各样区苦豆子共分离出11个属的内生放线菌,以链霉菌属和诺卡氏菌属为优势属,其中链霉菌属以白孢类群和灰褐类群为主．     

药用植物虎杖内生放线菌的分离及抑菌活性的研究

采用平板涂布法从药用植物虎杖(Polygonurn cuspidatum)中分离出内生放线菌41株,以大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella typhl)、白色念珠菌(Monilia albican)为靶标菌,采用滤纸片扩散法研究了虎杖内生放线菌发酵液的抑菌活性。结果显示,共有13株内生放线菌对5种靶标菌表现了不同程度的抑菌活性,占分离总数的31.7%。有5株内生放线菌表现出较明显的抑菌活性,特别是PEA004和PEA013菌株对枯草芽孢杆菌的抑菌圈分别达17 mm,15 mm,并且对其它几种靶标菌也表现出不同程度的抑菌活性。     

兰州百合植物内生及根际土放线菌最适分离培养基的筛选研究

以兰州百合的鳞茎、根及根际土为实验材料,对其植物内生和根际土放线菌在不同的培养基上进行分离培养.根据不同培养基中所得放线菌菌落数量与种类,应用统计学方法,来选择出最适植物内生以及根际土放线菌生长的最适培养基.方法:对兰州百合鳞茎及根部表面消毒处理后,采用组织悬液法将原液涂布于添加抑菌剂的腐殖酸培养基、寡营养培养基、改良的高氏Ⅰ号等10种不同的培养基上.对根际土壤采用120℃预处理1 h,然后将处理后的根际土样作10-1、10-2、10-3梯度稀释并分别涂布于添加抑菌剂的SCA培养基、HVA培养基、葡萄糖—天冬氨酸琼脂培养基等7种不同的培养基上.置于23℃恒温培养箱中培养30 d,统计每个培养基上放线菌菌落数量及种类.结果:不同培养基分离兰州百合植物内生及根际土放线菌,其数量和种类有很大差异.其中,最适于百合鳞茎、根部内生及根际土放线菌生长的培养基分别为IMA-2琼脂培养基(共109株)、腐殖酸培养基(共662株)和改良高氏Ⅰ号培养基(共112株).     

香蕉内生真菌、放线菌类群分析

采用内生菌分离法对华南种植的健康香蕉根、叶内生真菌、内生放线菌进行分离研究表明：叶内部的内生真菌主要为盘长孢刺盘孢菌物Colletotrichum gloeosporioides占60.77％；而根内部曲霉Aspergillus spp. ，青霉Penicillium spp.，拟青霉Pacecilomyces spp.的分离频率较高，共占70．4％。在根、叶内生放线菌中灰红紫类群链霉菌分离频率最高，分别占65.2％与78．2％；在整个植株中玫瑰浅灰链霉菌Streptomyces roseogriseolus的分离频率最高(占57．7％)，叶中该种链霉菌占69.0％，根中占43．5％。对峙实验表明：内生真菌在体外对香蕉枯萎病的病原菌(尖孢镰刀菌香蕉专化型)不显示明显的拮抗作用而内生放线菌则显示明显的拮抗活性，玫瑰浅灰链霉菌中有42．5％的菌株显示拮抗作用，该种链霉菌在提高香蕉植株对香蕉枯萎病的抗性中的作用值得重视。     

汕头南澳海绵Halichondria sp.放线菌分离的研究

海绵相关微生物是药物开发的重要资源.本文利用6种培养基对汕头南澳普遍存在的海绵Halichondria sp.的共附生放线菌进行分离和培养,共得到36株放线菌.基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,这些放线菌分别属于Streptomyces、Nocardiopsis和Micromonospora属.抗菌活性筛选结果显示,分离菌株分别对Staphylococcus aureus、Bacillus subtilis和Escherichia coli等的生长有抑制作用.同时分子方法筛选显示这些放线菌具有潜在产生聚酮类、角蒽环类和非核糖体多肽类的能力.本研究结果为海绵相关微生物在药物开发方面积累了基础数据.     

刺五加内生放线菌的分离与多样性研究

从采集自5个不同地点的刺五加全株植物,采用8种分离培养基,从植株不同部位分离,经BOX-PCR排重后,共得到内生放线菌265株.从不同培养基分离出的放线菌数目有较大差异.LNMS培养基分离菌株最多,60株.海藻糖-无机盐培养基分离最少,17株.从刺五加植株根及根茎分离到的放线菌数量最多,占菌株总数的77%,叶中分离的最少,为6%.从吉林柳河和吉林梅河口植株内分离的菌株较多.利用16SrRNA基因序列分析鉴定,菌株分属于7个亚目,9个科,9个属.     

喀斯特地貌高海拔自然保护区土壤放线菌多样性研究

为了揭示贵州喀斯特地貌高海拔读取土壤放线菌多样性,通过在贵州喀斯特地貌高海拔自然保护区采集土壤,对放线菌进行分离、提纯和培养;并对已获得的放线菌菌株的16Sr DNA、18Sr DNA、ITS以及26S通过引物进型PCR扩增,扩增后行进DNA序列测定以及菌株鉴定。结果表明:该区域土壤中包含了1株为疑似新型放线菌、1株为链孢囊菌属,为较稀有菌属。4株为拟诺卡氏菌属,11株为链霉菌属、为常见菌属。此次研究初步揭示了贵州喀斯特地貌高海拔地区土壤中放线菌多样性。     

新疆青海极端环境发现大量未知放线菌

 从新疆、青海的重盐碱地区、盐湖采集样品,分离其中的嗜盐、嗜碱及低温放线菌.研究了它们在几种盐的不同浓度,不同 pH条件下的生长情况.利用多相分类程序进行鉴定,发现嗜盐放线菌、放线细菌的新科 1个(Yaniaceae),新属 2个(Yania and Streptomonospora),新种8个,嗜碱放线菌新种4个,低温放线菌新种1个.对其中部分新种、新属做了描述.认为新疆、青海的重盐碱地区蕴藏着大量的未知放线菌资源 ;新菌种必然有新基因,新产物,新活性和新用途,是药物开发的重要来源.     

沧州高盐环境嗜盐放线菌多样性研究

利用NaCl的质量分数为10%和20%的不同培养基从35份采自河北沧州高盐环境样品中分离得到33株中度嗜盐放线菌和13株耐盐放线菌.多相分类研究表明,嗜盐菌株具有形态、生理、生化和分子分类特征的多样性,在系统发育上试验菌株分别属于拟诺卡氏菌属、链霉菌属和纤维单胞菌科一新属.分析结果表明,沧州地区高盐环境中嗜盐放线菌主要类群是拟诺卡氏菌属和链霉菌属,另有少量纤维单胞菌科放线细菌;也说明高盐环境是分离新物种的重要来源.     

利用噬菌体有效分离稀有放线菌的初步研究

 利用噬菌体S7和S3专一性感染裂解链霉菌的特性,选用几丁质、土壤浸汁和改良海藻糖-天门冬酰胺3种分离培养基,结合使用预培养、预处理及添加不同抑制剂等多种手段,对采自云南、缅甸的3份土样进行处理.实验检测了在不同培养基上噬菌体对链霉菌的抑制效果,结果表明在几丁质培养基上,噬菌体对链霉菌的抑制效果明显,提高了稀有放线菌的出菌率,增加了物种多样性.利用噬菌体是一种有效分离稀有放线菌的方法.     

SEPTIC技术快速检测放线菌

为了评价SEPTIC(sensing of phage-triggered ion cascade)技术在放线菌快速检测中的应用价值.应用纳米阱微芯片检测噬菌体感染放线菌时导致细胞内离子释放发生的微范围内的电位变化.将放线菌和噬菌体等体积混合,孵育后取混合液滴于探针上,采集数据,每2 nm采集一个数据文件,共采集10 min,计算机分析采集结果.结果显示当放线菌与放线菌噬菌体ΦHAU3混合反应时,在10 min内显示了非常明确的l/f功率谱特征,而且功率谱强度明显高于阴性反应的功率谱,并出现了明确的电压超出士4σ范围的波形,持续约O.25 s的时间,可认为发生了1次放线菌被噬菌体感染的事件,并且探针明确地捕获了这一事件.表明SEPTIC技术能在较短时间内检测、鉴定出活菌的存在.     

水稻内生放线菌降解酶活性的分析

分析了水稻内生放线菌纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶三种酶活性，结果表明：52％的菌株具有纤维素酶活性，35％的菌株具有木聚糖酶活性，61％的菌株具有果胶酶活性．     

柳珊瑚Anthogorgia caerulea相关可培养共生放线菌多样性及其生物毒活性研究

【目的】研究斜阳岛附近海域柳珊瑚Anthogorgia caerulea可培养共生放线菌多样性及其发酵液代谢产物的生物毒活性。【方法】采用纯培养法和基于16SrRNA基因序列的系统发育分析对从广西斜阳岛附近海域采集的柳珊瑚Anthogorgia caeru[ea可培养共生放线菌多样性进行研究,利用卤虫致死法测试其生物毒活性。【结果】从柳珊瑚Anthogorgia caeru[ea中分离获得相关可培养放线菌23株,采用16SrRNA基因序列的系统发育分析后发现,这些菌株属于2个亚纲9个科9个属23种。绝大部分菌株都具有一定的生物毒活性,其中10株菌株有较强生物毒活性,l株有显著毒活性。【结论】广西斜阳岛附近海域柳珊瑚Anthogorgia caeru[ea中存在较为丰富的放线菌多样性,部分菌株具有较强的生物毒活性。     

镍矿区紫茎泽兰根际及内生细菌多样性研究

利用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)技术对四川省攀枝花市镍矿区紫茎泽兰根际及不同器官中内生细菌多样性进行分析. 结果表明, 紫茎泽兰根际与不同器官内生细菌多样性存在明显差异, 香农 威纳指数(H)、丰度(S)及均匀度(EH)皆表现为根际土＞叶＞茎＞根. 土壤重金属含量与内生细菌多样性相关性分析表明, 样品的丰度(S)与Zn含量呈显著正相关 (P<0.05). 典型对应分析(cononical correspondence analysis, CCA)显示, 根际土细菌多样性受Zn、Cd、Pb、Ni等重金属负向影响; 紫茎泽兰叶内生细菌多样性与土壤Cu元素浓度呈负相关关系. DGGE条带回收测序结果显示, 根际及内生细菌主要为变形菌门(Proteobacteria)、异常球菌 栖热菌门(Deinococcus Thermus)、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、放线菌门(Actinobacteria)及部分不可培养的细菌.     

稀有放线菌的选择性分离方法

 为了设计稀有放线菌的分离方法,对噬菌体S7,S3,重铬酸钾、萘啶酮酸、利富平、硫酸庆大霉素、柱晶白霉素、放线酮、制霉菌素等抑制剂及几种碳源进行了试验,设计或改良了几种培养基,研究它们分离稀有放线菌的效果.发现噬菌体能有效降低常见链霉菌的出菌率,重铬酸钾抑制真菌、细菌的效果好,MOPS、海藻糖、丙烯酰胺和乙二胺四乙酸能提高稀有放线菌的出菌率.推荐海藻糖-脯氨酸培养基、改良高氏2号、改良脯氨酸培养基作为稀有放线菌分离培养基.还提供了一些分离稀有放线菌的经验.     

利用KS基因筛选Ⅱ型聚酮类化合物产生菌的方法研究

根据酮基合酶编码基因(ketoacyl synthase,KS)的同源性设计简并引物,并利用PCR技术快速筛选携带聚酮类化合物编码基因的放线菌菌株.试验筛选了33株放线菌菌株,检测获得PKSⅡ型阳性菌株16株.克隆并测序获得16条KS基因序列,进行BLAST同源性比对,与GenBank中已知的KS基因序列的相似度在89%~99%之间.提交GenBank,获得的各菌株KS基因登录号为FJ620885~FJ620889,FJ620892,FJ878801~FJ878810.抑菌实验表明,携带KS基因的16株放线菌中,13株具有抑制真菌活性,2株具有抑制革兰氏阳性细菌活性.系统进化树分析表明16株放线菌可以分为7个类群,其中,具有产生新型聚酮类化合物潜力的菌株8株,说明筛选出的KS基因具有一定的多样性.结果表明,利用PCR技术可以快速有效筛选Ⅱ型KS基因,为生物资源的开发利用奠定基础.     

苏都黄连内生放线菌的分离、鉴定及抗菌活性研究

对分离自内蒙古呼伦贝尔的苏都黄连根部的内生放线菌进行抗真菌活性测试,并对农作物致病真菌具有拮抗作用的内生放线菌进行分类学鉴定.研究结果表明,苏都黄连根部分离得到的10株内生放线菌中,菌株LJ-1发酵液对9种农作物病原菌具有较好的拮抗作用,抗真菌谱较广,其中对大豆菌核病菌和辣椒疫病菌具有显著的拮抗作用,抑菌圈直径分别为22.10mm和30.90mm,具有开发为新型生物农药的潜力.经形态特征、培养特征、生理生化特征和分子分类学分析鉴定,菌株LJ-1与Streptomyces tauricus JCM 4837T在同一分支上,相似性为99.73%,最终鉴定为Streptomyces tauricus.     

贵州省放线菌资源及多样性研究现状

放线菌作为一类极其重要的微生物资源,与人类的生产、生活关系极为密切。贵州省由于特殊的喀斯特地貌和生态环境孕育着丰富的放线菌多样性。不同于动植物及大型真菌,对包括放线菌在内的其他微生物资源的资源调查和多样性研究较为缺乏,相关资料也很零碎。在有关贵州省放线菌菌株资源相关文献的查找、分析基础上,汇总了贵州省土壤放线菌多样性(4属共48种)、喀斯特洞穴放线菌多样性(43属共157个种)、空气放线菌(仅4种)及贵州省放线菌资源的开发研究概况,以期促进贵州省放线菌多样性的保护及其资源开发利用。