个性化结直肠癌肿瘤疫苗的制备

目前,由于存在肿瘤特异性新抗原难鉴定以及无法将广谱肿瘤抗原通过激活性内吞受体途径递送给抗原提呈细胞等制约因素,使得肿瘤疫苗的临床疗效不佳,同时,肿瘤细胞表面抗原的高度唾液酸化修饰会导致免疫耐受.所以,本研究尝试利用糖代谢掺入,使肿瘤抗原的唾液酸位点标记上正交基团-叠氮(-N3),同时将特定的激活性吞噬受体的配体标记上另...     

不同癌细胞系中gp96的唾液酸化程度研究

以自行合成的叠氮标记的甘露糖进行细胞代谢,代谢后以叠氮化的唾液酸替代天然的唾液酸于细胞糖蛋白的糖链中呈现,依赖于点击化学方法,建立分离唾液酸化糖蛋白的方法,并研究gp96蛋白在不同癌细胞系中的唾液酸化程度.经酶联免疫吸附反应检测各细胞系均含有gp96蛋白,且含量无显著差异.而分析gp96的生物素化和唾液酸修饰程度,发现...     

利用肿瘤抗原多肽疫苗进行肿瘤的免疫治疗

利用肿瘤抗原多肽疫苗进行肿瘤的临床免疫治疗已成为肿瘤根除性治疗的重要发展方向.随着诱导机体免疫应答的各类不同肿瘤抗原的不断发现,多种肿瘤多肽疫苗已进入临床试验,并取得一定的效果.但高效广谱的疫苗还有待于进一步研究.文中总结了设计选用肿瘤多肽疫苗的依据和原则,着重阐述了用作疫苗的肿瘤抗原的选择及其发展方向,为研究肿瘤抗原多肽疫苗提供参考.     

重组治疗性乙型肝炎疫苗（YIC）的实验研究

研制了抗原-抗体复合物型乙肝治疗性疫苗。用小鼠实验证明这一治疗性疫苗的作用机理为：通过复合物中抗体Fc段与抗原呈递细胞表面的Fc受体结合,促进了细胞摄取抗原。复合物中的抗原经呈递后可比单纯抗原更有效地激活T细胞增殖,释放更多的γ-干扰素和白细胞介素-2,属TH1类型应答。复合物可在小鼠中诱生较单纯抗原诱生的抗-HBs高10倍以上。复合物还可诱生更强的细胞免疫,表现为经特异的抗原刺激后,γ-干扰素的mRNA量增多。还发现复合物可在对HBsAg低应答鼠系中（B 10.S）诱生与正常应答鼠相当的抗体效价。在HBsAg阳性转基因鼠中,复合物可使部分鼠的HBsAg转为阴性,并可产生抗-HBs,反映这一疫苗具有疗效。为制备人用乙肝治疗性疫苗建立了用重组酵母菌表达的HBsAg与人高效价抗乙肝免疫球蛋白组建治疗性疫苗的工艺,以及产品标化及效力的参比实验技术。     

心肌肌钙蛋白I-C复合物酶联免疫检测方法的建立

为了制备抗人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体、建立检测人cTnI链酶亲和素-生物素双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,用基因工程表达的人cTnI免疫雌性BALB/c小鼠,以杂交瘤技术制备得到三株特异性抗人cTnI的单克隆抗体记为6G3,6A6,3G9.三株杂交瘤细胞中6G3和6A6为IgG1,3G9为IgG2b,腹水效价分别为4×10-5,4×10-5和10-5.亲和常数为5.0×109,6.4×109和3.8×109mol-1.Westernblotting结果表明6G3和6A6能够识别cTnI-C复合物.把6G3抗体生物素化并制备抗cTnI、cTnC和cTnI-C的大鼠多克隆抗体.以多抗作为固相捕捉抗体,生物素化6G3抗体作为检测抗体,建立检测cTnI的双抗体夹心ELISA方法并初步应用于临床病人标本检测.以cTnI-C复合物多抗捕捉检测方法具有良好的灵敏度、特异性和准确性,灵敏度为0.9ng/mL,较包被其他抗体捕捉方法提高1~2倍.批内变异系数为5.03%,回收率为94.56%.测定17例AMI病人和18例血清样本临床诊断结果符合率为100%.     

三羧基分枝状胆甾衍生物的合成

报道了新型肝靶向性脂质体配体重要中间体-胆甾三羧基分枝状胆甾衍生物〖WTHZ〗L〖WT〗的合成.以寡聚乙二醇单胆固醇醚为起始原料,经过磺酰化,叠氮化,还原,偶合等反应得到目标化合物.该配体中采用分支试剂季戊四醇来连接胆固醇和功能基团,从而使该化合物具有多个羧基的树状结构,能与多个胰岛素相结合,提高暴露在脂质体表面的胰岛素残基数量,从而提高脂质体对肝细胞的亲和力,增强肝靶向性.该重要中间体的合成能在温和条件下进行,并得到较高的收率.     

SECM的产生收集模式检测小鼠免疫球蛋白IgG

基于扫描电化学显微镜(SECM)产生收集模式,开展小鼠免疫球蛋白IgG(作为抗原)检测研究.利用分子自组装的方式,以硫辛酸为媒介,利用金与硫的键合作用以及羧基与氨基的化学反应将羊抗鼠抗体修饰在金电极上,辣根过氧化氢酶(HRP)标记的小鼠抗原与未标记的小鼠抗原再通过竞争与有限的抗体位点结合,完成小鼠抗原检测平台的搭建.HRP与过氧化氢(H_2O_2)的催化反应使得对苯二酚(H_2Q)被氧化为对苯醌(BQ),BQ在探针上被还原.利用逼近曲线,通过记录加入不同浓度比的小鼠抗原混合液时探针上还原电流的变化来进行待测物(小鼠抗原)的检测,结果表明,小鼠免疫球蛋白IgG在1～1 000 pg·mL~(-1)浓度范围内,探针电流与浓度的变化呈线性关系,检测限为0.1 pg·mL~(-1).     

应用酶联免疫吸附试验检测山羊日本血吸虫病抗体的研究

本研究首先制备了日本血吸虫水溶性止卵抗原和兔抗山羊酶标复合物。经测试确定了:抗原的最适包被浓度(5ug/ml);酶标复合物的最佳工作浓度(1:2500)以及血清不同稀释度下的阴—阳临界值,从而成功地建立了山羊日本血吸虫病抗体的酶联免疫检测法。以1:80稀释作参考,对25份标准阳性血.清和19份标准阴性血清的考核结果证实:在最适条件下,该法特异性,敏感性良好,具有临床和科研应用价值。随后,应用酶联免疫吸附试验对7只实验山羊血吸虫病抗体消长作了长期、细致地观察,结果表明:特异性IgG最早于尾蚴感染后第40天出现;吡喹酮治疗后,7个月消失。     

壳聚糖交联天然沸石用于水溶液中亚甲基蓝的吸附研究

制备壳聚糖交联天然沸石复合物吸附剂,用于水溶液中亚甲基蓝的吸附.研究吸附过程中吸附剂用量、时间等条件的影响.实验表明,实验最佳条件为亚甲基蓝初始浓度50 mg/L,吸附剂用量2.0 g/L时,吸附180 min达到平衡,亚甲基蓝的去除率达到99.1%.壳聚糖交联天然沸石复合物对亚甲基蓝的吸附过程,由热力学参数可知是自发的;据吸附动力学参数,该过程符合伪二阶动力学模型;符合Langmuir等温吸附模型.     

一种蛋白A的Z结构域衍生物的构建及对IgG亲和力的研究

蛋白A是金葡菌中一种重要的致病因子,有较强结合多种哺乳动物的IgG的能力,因此降低机体产生特异性SPA抗体的水平,使金葡菌具免疫逃逸功能.研究一种与IgG亲和力较弱的蛋白A衍生物,对金葡菌疫苗的开发具重要意义.研究表明,蛋白A的Z结构域中位于第13、14位的Phe,Tyr是两个与IgG结合的关键位点.本文首次通过PCR突变技术,将这两个关键氨基酸均改造为Gly,构建突变体ZFY.Discovery Studio3.5受体-配体相互作用力模块分析显示,突变体ZFY与IgG结合力降低到-61.68kcal/mol,仅为原相互作用力的10.69%;构建得到ZFY蛋白,经ITC测定,ZFY与兔IgG的亲和常数降低到1.2×104 M-1,仅为原亲和常数的0.39%,证明了ZFY是一种与IgG亲和力较弱的蛋白A衍生物,为实现新型蛋白A疫苗治疗金葡菌感染奠定基础.     

双抗体夹心ELISA检测禽流感病毒方法的初步建立

用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒(AIV)抗原的双抗体夹心ELISA方法. 经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件为:兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1: 8 000(浓度为3.531 ug/mL),抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1: 800,酶标二抗的工作浓度为1: 4 000. 与其他禽易感病毒(NDV、IBV、EDS-76V)等均没有交叉反应. 结果表明,本方法具有很高的特异性.     

副猪嗜血杆菌铁调节外膜蛋白的免疫原性研究

副猪嗜血杆菌感染已对世界养猪业造成巨大损失,作为一新发的细菌传染病,目前对其致病及免疫机理研究较少,故应用蛋白质组学及反向疫苗学技术有助于开发其新型疫苗.通过研究,鉴定出副猪嗜血杆菌的3种铁调节外膜蛋白IROMP1, IROMP B和HbpB.选择这3种蛋白进行免疫原性和攻毒保护试验研究,结果表明其中的HbpB能诱导明显的混合抗体(IgG1和IgG2a)应答,其高免血清具有明显的调理吞噬活性,HbpB能在小鼠攻毒试验中提供90%保护率,因此HbpB可成为开发副猪嗜血杆菌亚单位疫苗的候选免疫原性蛋白.     

碳纳米管金属复合材料的合成及其吸波性能

通过乙炔催化裂解制得碳纳米管,采用浓硫酸和双氧水的混合溶液对碳纳米管进行表面羟基化修饰,利用化学镀使Pd、Co以及FePt金属纳米粒子成功地吸附在碳管表面,结果发现碳纳米管及其复合物均为介电损耗型介质,Co-碳纳米管复合物相比纯碳纳米管在高频区域有较强的宽范围吸收.     

静电纺丝技术制备Tb（BA）3phen/PVP复合纤维与发光性质研究

采用静电纺丝技术合成Tb(BA)3phen/PVP复合纤维.扫描电镜分析表明,纤维表面光滑,无交联,直径集中分布在350 nm.红外光谱分析表明,Tn3+与配体发生键合,在424 cm-1出现了Tb3+ - O2-特征振动峰.紫外-可见吸收光谱分析表明,Tb (BA)3 phen/PVP复合物的吸收带发生蓝移.激发光谱分析表明,Tb(BA)3 phen/PVP复合纤维在214-355 nm之间有较宽的吸收谱带,对应着配体的π→π*跃迁,最佳吸收波长位于275 nm.发射光谱分析表明,最强发射峰位于545 nm处,对应着Tb3+的5 D4→7 F5跃迁.     

SARS病毒的S1蛋白基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立

为了建立方便、敏感和特异的SARS病毒血清学诊断方法,利用PCR扩增,克隆了SARS冠状病毒S蛋白基因中从第68～918位碱基的基因序列(S1蛋白).并通过pGEX-4T1表达系统在大肠杆菌BL21中高效表达了SARS病毒S1蛋白,用超声波破碎菌体及用不同浓度的尿素洗涤包涵体,纯化了S1蛋白,纯度可达75%以上.以在E.coli高效表达的S1蛋白为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG为二抗,建立了检测SARS抗体的间接ELISA方法.经检测,筛选出最佳反应条件为5μg/孔.用纯化的E.coli表达的抗原包被酶标板,用5 g/L的小牛血清进行封闭,以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清.实验表明,应用表达的蛋白作为诊断SARS抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点.     

CTAB/ATT复合物修饰玻碳电极测定邻硝基酚的研究

利用恒温振荡的方法制备了阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)与凹凸棒土(ATT)的复合物(CTAB/ATT),并用红外光谱进行了表征.采用物理涂覆法将CTAB/ATT的复合物固定在玻碳电极表面,制成CTAB/ATT复合物修饰电极,研究了邻硝基酚在该修饰电极上的电化学行为.结果表明,邻硝基酚在该修饰电极上具有良好的灵敏度、选择性和稳定性.在优化的实验条件下,利用差分脉冲伏安法测定其峰电流,邻硝基酚的浓度在4.0×10-6~2.0×10-5mol/L范围内与电流呈线性关系,线性方程i(μA)=-0.0176+0.0951c(10-6mol/L),相关系数r=0.9978,最低检测限2.0×10-7mol/L.     

氧化胁迫对骨骼肌型钙释放通道与相关蛋白作用的影响

利用[3H]-ryanodine结合实验,SDS-PAGE和Western Blotting,光子相干光谱法(PCS)和DPH荧光偏振法,考察氧化胁迫条件下氧化型通道调控剂1,4NQ和Na2SeO3对RyR1通道活性,SR膜蛋白分布,RyR1的平均粒径和SR膜流动性的影响.结果显示,高浓度的1,4NQ和Na2SeO3处理使RyR1通道活性和SR膜的流动性降低,并且导致SR上的膜蛋白交联形成大分子交联复合物,而RyR1参与了它的形成,DTT可以逆转交联复合物的的形成.结果提示,高浓度氧化剂对RyR1通道的抑制作用,可能是由于氧化了负责关闭通道的职能巯基导致蛋白间错误交联,从而影响了钙释放通道和钙释放单元的结构和功能.     

Zn-Fe氰化物配合物的合成及其催化环氧丙烷开环聚合

以N,N,N′,N′-四甲基乙二胺为配体合成了Zn-Fe氰化物配合物催化剂， 以叔丁醇为链转移试剂， 用正交试验方法探索了该催化剂开环聚合的最优条件， 正交实验结果表明, 最佳反应条件为t=100 ℃, t=6 h, w(Cat)=15 mg, w(t-BuOH)=15 mg. 分析 结果表明, 反应产物的数均分子量M_n为10000~13000，分子量分布较窄 (M_w/M_n≤1.30). 并对聚合反应机理进行了探讨.     

GAGE-1 DNA肿瘤疫苗的构建及其抗肿瘤治疗效果的试验研究

目的 观察G antigen 1 (GAGE-1)核酸疫苗pcDNA3.1+/GAGE-1免疫小鼠后,对表达GAGE-1抗原的B-16/GAGE-1肿瘤细胞的保护作用.方法 将C57 BL/6小鼠随机分为4组,与0、2、4周分别接种pcDNA3.1＋/GAGE-1（实验组1）、pcDNA3.1＋/GAGE-1/白介素2（实验组2）、pcDNA3.1＋（对照组1）,pcDNA3.1＋/白介素2（对照组2）各三次.末次免疫后10d小鼠用于肿瘤细胞攻击试验：分别于左背部、右背部皮下种植B16肿瘤细胞、B16/GAGE-1肿瘤细胞.种植肿瘤细胞（荷瘤）后观察成瘤时间、肿瘤大小和荷瘤后小鼠的生存时间及生存率. 结果： pcDNA3.1+/GAGE-1/IL-2质粒免疫的小鼠在种植B16/GAGE-1、B16/pcDNA3.1+后,发现小鼠成瘤时间明显延迟,成瘤减小,生存期明显延长.结论:pcDNA3.1+/GAGE-1/IL-2 DNA 疫苗在体内能诱导出显著的GAGE-1特异性肿瘤免疫应答,且能抑制体内已经存在的少量肿瘤细胞的成瘤     

硫化亚锡-碳球复合物的制备及其在亚硝酸盐检测中的应用

采用水热法制备异质结构的硫化亚锡-碳球(SnS-CSs)复合物,并使用扫描电镜和X射线衍射对其进行表征.利用循环伏安法研究SnS-CSs修饰玻碳电极对亚硝酸盐的电催化氧化性能.结果表明:SnS-CSs的电化学活性优于SnS和CSs;在最佳实验条件下, SnS-CSs/GCE电极的氧化峰电流与亚硝酸盐浓度在0.5～1 200.0μmol·L~(-1)范围内呈线性关系,检测限为0.32μmol·L~(-1).该修饰电极具有良好的重现性、稳定性和抗干扰性,是一种具有广阔应用前景的亚硝酸盐电化学传感器.