蛭弧菌裂解泛耐药革兰氏阴性菌及培养条件研究

用双层平板法和液体培养法对蛭弧菌裂解泛耐药菌进行研究. 结果表明: 该株蛭弧菌能裂解泛耐药鲍曼不动杆菌、泛耐药铜绿假单胞菌、大肠杆菌这3株革兰氏阴性菌, 不能裂解凝结芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌这2株革兰氏阳性细菌.以泛耐药鲍曼不动杆菌为宿主菌, 研究影响蛭弧菌生长和发挥噬菌特性的因素. 35℃是蛭弧菌发挥噬菌作用的最适温度. 蛭弧菌的数量在pH75时达到最大值. 浓度为1%的NaCl有利于蛭弧菌发挥噬菌特性. 在培养蛭弧菌时添加0005mol/L的Mg2+、0003mol/L的Ca2+可以提高蛭弧菌的裂解活性. 0001mol/L的谷氨酸钠可提升蛭弧菌的裂解能力. 氯仿会将蛭弧菌全部灭活.     

海洋噬菌蛭弧菌对对虾病原菌及其他细菌的寄生作用

用宿主双层琼脂平板法，测定海洋噬菌蛭弧菌对２５株对虾病原菌和大肠杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌及金黄色葡萄球菌的寄生作用，结果表明噬菌蛭弧菌菌株不同寄生的范围不同，但所有供试寄主细菌都能被某些蛭弧菌寄生，形成清晰的噬斑．用相差显微镜和电镜观察蛭弧菌的形态及噬菌过程     

海洋蛭弧菌BDSG1的发酵培养条件研究

从厦门市集美鳌园附近海域分离得到一株海洋蛭弧菌BDSG1.实验结果表明,该菌的最适生长温度为25℃,最适pH值为8.3.在人工生态环境中对该蛭弧菌与宿主弧菌相互作用的消长情况的研究表明,蛭弧菌BDSG1对弧菌有较强的裂解和净化作用.通过单因素及五因子正交试验对蛭弧菌BDSG1发酵生产条件进行优化,得到了最优培养基配方,发酵最佳时间为50 h,菌液浓度可达9.5×1010pfu/mL.     

有益微生物在暗尾东方鲀养殖中应用的研究

研究结果表明噬菌蛭弧菌和光合细菌结合使用对暗尾东方鲀养殖环境具有明显的改善作用,并能有效提高暗尾东方鲀的成活率,对暗尾东方鲀也有一定的促生长作用.25 d后实验组比对照组池塘中的细菌总数少2个数量级,70 d后实验组比对照组池塘中的细菌总数少3个数量级;25 d后对照组COD为6.45 mg/L,使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10 mL/m3及光合细菌皆为5 mL/m3,实验组的COD分别为4.66、4.46、4.38 mg/L;25 d后对照组NH3-N为0.53 mg/L,使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10 mL/m3及光合细菌皆为5 mL/m3,实验组的NH3-N分别为0.38、0.35、0.34 mg/L;90 d后对照组NH3-N为0.52 mg/L,使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10 mL/m3及光合细菌皆为5 mL/m3,实验组的NH3-N分别为0.25、0.23、0.22 mg/L;25 d后对照组硫化物为0.018 mg/L,使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10 mL/m3及光合细菌皆为5 mL/m3,实验组的NH3-N分别为0.014、0.012、0.010 mg/L,90 d后对照组硫化物为0.018 mg/L,使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10 mL/m3及光合细菌皆为5 mL/m3,实验组的硫化物分别为0.009、0.008、0.007 mg/L.使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10 mL/m3及光合细菌皆为5 mL/m3,实验组暗尾东方鲀的成活率分别比对照组提高3.3%、7.6%、7.4%;使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10 mL/m3及光合细菌皆为5 mL/m3,实验组暗尾东方鲀分别比对照组平均净增长12、17、15 g.     

有益微生物在暗尾东方鲀纯养殖中应用的研究

研究结果表明噬菌蛭弧菌和光合细菌结合使用对暗尾东方鲀养殖环境具有明显的改善作用，并能有效提高暗尾东方鲀的成活率，对暗尾东方鲀也有一定的促生长作用。25d后实验组比对照组池塘中的细菌总数少2个数量级，70d后实验组比对照组池塘中的细菌总数少3个数量级；25d后对照组COD为6．45mg／L，使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10mL／m^3及光合细菌皆为5mL／m^3，实验组的COD分别为4．66、4．46、4．38mg／L；25d后对照组NH3-N为0．53mg／L，使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10mL／m^3及光合细菌皆为5mL／m^3，实验组的NH3-N分别为0．38、0.35、0．34mg／L；90d后对照组NH3-N为0．52mg／L，使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10mL／m^3及光合细菌皆为5mL／m^3，实验组的NH3-N分别为0．25、0．23、0．22mg／L；25d后对照组硫化物为0．018mg／L，使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10mL／m^3及光合细菌皆为5mL／m^3，实验组的NH3-N分别为0．014、0．012、0．010mg／L，90d后对照组硫化物为0．018mg／L，使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10mL／m’及光合细菌皆为5mL／m’，实验组的硫化物分别为0．009、0．008、0．007mg／L。使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10mL／m^3及光合细菌皆为5mL／m^3．实验组暗尾东方鲀的成活率分别比对照组提高3．3％、7．6％、7．4％：使用噬菌蛭弧菌浓度为3、5、10mL／m^3及光合细菌皆为5mL／m^3，实验组暗尾东方鲀分别比对照组平均净增长12、17、15g。     

微生物实验教学中蛭弧菌的分离与鉴定实验

通过富集培养后从鱼体表分离得到了有活性的蛭弧菌,双层平板培养后能出现明显的透明状噬菌斑;用银染法染色后观察到蛭弧菌呈逗点状,同时观察到蛭弧菌的连续运动状态;通过16S rRNA基因序列的同源性分析结果表明,分离到的鱼体表蛭弧菌与大多数典型蛭弧菌的同源性均较高,最高达99%,可以分类到Bdellovibrio属。该实验内容与生活贴近且涉及实验技术广泛,有助于激发学生的实验热情,促进创新型人才的培养,也为今后在微生物学实验教学中开设综合创新实验奠定了基础。     

嗜酸氧化亚铁硫杆菌的保藏方法

对几种适用于中短期保藏嗜酸氧化亚铁硫杆菌的保藏方法进行对比研究。研究结果表明：在多种保藏方法中，采用单蒸水悬浮细菌（pH-6．8），在4℃保藏效果最佳，与传统的传代保藏效果接近；以稀硫酸（pH=2．0），悬浮在4℃、浓缩静置和浓缩菌液用石蜡油密封在4℃保藏的效果次之；而用9K基本盐溶液（pH=2．0），悬浮在4℃的保藏效果最差；采用不同保藏方法处理后，该菌的生长迟滞期都有不同程度的延长；而营养缺乏、pH值为7左右、无氧、低盐浓度的环境有利于菌种的保藏。     

应用噬菌体检测对虾发光病致病菌哈维氏弧菌的可行性研究

探讨了应用哈维氏弧菌噬菌体检测对虾发光病致病菌哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的方法和可行性.实验表明,从对虾育苗场分离的哈维氏弧菌噬菌体对对虾发光病致病菌哈维氏弧菌的噬菌作用具有相当高的特异性,它不能裂解同样来源的溶藻弧菌、副溶血性弧菌、光合细菌,却能特异地裂解本实验所用的不同来源的哈维氏弧菌,噬菌斑出现率可达80%~100%,并且噬菌斑的出现率与虾苗发生发光病的发病程度有一定的相关性,可应用于哈维氏弧菌的检测和对虾发光病致病菌的诊断.     

源自重组菌BL21-pET28a-cdE降氰酶的基本性质研究

在前期研究工作的基础上,对含降氰酶基因重组菌BL21-pET28a-cdE开展遗传稳定性以及降氰酶基本特性的研究,比较分析原代菌与传代重组菌的菌落形态特点、质粒稳定性、蛋白表达、酶活水平,并对镍柱纯化获得的95%纯度的降氰酶进行了最适温度、最适pH、保藏稳定性的实验考察。结果显示,重组菌在无抗生素压力下传至100代时的质粒稳定性可保持在73%,菌落形态、蛋白表达、酶活水平等指标与原代的相一致。降氰酶的最适氰降解反应条件为30℃、pH 7.0。添加2%甘油可在4℃条件下稳定保藏降氰酶50 h,其相对酶活力为102.2%,而添加2%乙醇可使降氰酶在-20℃条件下稳定保藏1个月,其相对酶活力仍可达到80.9%。研究结果表明,重组菌BL21-pET28a-cdE具有良好的遗传稳定性,为未来大规模发酵制备降氰酶处理氰污染提供了可能。     

固定化蛭弧菌净化景观水体中病原微生物的试验研究

淤泥容纳、滋生和释放病原微生物威胁城市景观水环境安全。利用陶化后的淤泥颗粒固定蛭弧菌净化城市景观水体中病原微生物,可避免物化消毒对景观水体中其他动植物造成伤害。陶化淤泥颗粒固定蛭弧菌及固定化蛭弧菌对大肠杆菌、实际景观水体中总大肠菌群和粪大肠菌群裂解的试验结果表明:淤泥陶化温度为800℃、吸附时间为6 h、培养温度为30℃、摇床转速为140 r/min时,蛭弧菌固定化的效果最好;在此条件下固定的蛭弧菌,在72 h的试验周期内,对大肠杆菌的去除率达到97.4%,远超对照组的38.4%;采用陶化淤泥颗粒固定蛭弧菌去除城市景观水体中总大肠菌群和粪大肠菌群两种指示性病原微生物,去除率分别达到97.5%和78%。     

免疫金层析技术快速检测副溶血弧菌方法的初步研究

本研究应用兔抗V.parahaemolyticus IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线,·羊抗兔IgG包被对照线,胶体金标记免抗V.parahaemolyticus IgG-1,建立了检测副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的免疫金层析试纸条法(IGCA).结果表明,阳性者试纸条检测线和对照线均出现红色线,实验过程仅需5～15min即可判断结果,该法对V.parahaemolyticus的最低检测量为3.60× 104cfu/mL,与溶藻弧菌、霍乱弧菌、美人鱼弧菌、麦氏弧菌、弗氏枸橼酸杆菌和沙门菌等常见肠道菌不发生交叉反应.将试纸条4℃存放6个月、常温存放3个月,37℃存放1个月,检测结果无差异.说明建立的试纸条检测方法操作简便快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好,结果容易观察和判断,非常适于基层养殖部门应用.     

Debaryomyces sp.甘油激酶基本动力学性质研究

通过平板初筛和摇瓶复筛,从105株菌中筛得一株甘油激酶的高产菌株,并研究了其所产甘油激酶的动力学性质.研究结果表明:在MES系统中,甘油激酶有较好的酸碱稳定性,pH稳定范围为5.5～10.5;最适pH和最适温度分别为pH 8.0和50℃,该酶催化甘油的米氏常数(Km)为3.5×10-5mol/L,催化ATP的Km为4.46×10-4mol/L.同时对一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

动物微生物学实验菌种保藏与管理

菌种保藏的方法有传代培养法、甘油法、干燥法、冷冻真空干燥法及液氮超低温法等,不同方法保藏菌种的种类、时间不同,要根据实际情况选择合适的方法。在实际工作中,对传代培养法进行改良,取得较好效果,同时,采取相应的措施对菌种保藏工作进行管理。     

济南地区蛭弧菌(Bdellovibrio)的初步研究

从济南地区的生活污水、湖水和土壤中分离到9株蛭弧菌。它们均为直或弯曲的杆状或弧状,大小为0.20～0.31μm×0.66～1.01μm。单根极生鞭毛。在其中2株蛭弧菌的细胞两端还发现有数根须状结构。蛭弧菌 No.1对氯仿敏感,它的增殖并不依赖于其寄主的增殖。它们的寄主范围较广,可以跨越属或科。温度对于蛭弧菌 No.1的增殖速度有显著影响。每个 E.coliK_(12)细胞约释放2个蛭弧菌 No.1细胞。     

虾红素的提取及稳定性研究

比较了南美白对虾、三疣梭子蟹和克氏原鳌虾壳中虾红素乙醇提取液的紫外可见光谱特征,并对微波萃取、超声辅助提取和常规水浴提取虾红素的提取效果进行了比较.结果表明:来源于南美白对虾、三疣梭子蟹和克氏原鳌虾壳的虾红素在473 nm均有特征吸收,而且超声辅助提取效果好于常规水浴法和微波萃取方法.虾红素提取液在-20℃保藏65h后的稳定性好于室温和-4℃保藏法,而且虾红素提取液能够耐受80～100℃加热15～30 min处理,在pH＜5条件下,虾红素提取液的稳定性高.     

蛭弧菌在细胞匀浆中增殖的初步研究

自生活污水中分离得到了蛭弧菌 Bd—No.2,用超声波破碎仪处理了 Bd—No.2的寄主 E.coli K_(12)和非寄主革氏负(G~+)根瘤菌1.174、革氏正(G~+)枯草芽孢杆菌及卡氏酵母菌,用它们细胞匀浆液的稀释液培养蛭弧菌 Bd—No.2,双层平板计数确证它们都能使 Bd—No.2增殖,说明可以“腐生”培养。表明某些菌体不为蛭弧菌利用是与它们细胞壁的屏障作用有关。     

鸡白痢沙门氏菌O_(12)特异性噬菌体的分离及生物学特性研究

采用双层平板培养法从成都某养鸡场的污水样本中分离得到一株鸡白痢沙门氏菌O12(宿主菌)的噬菌体(Ph-1),并对菌斑形态及理化特性进行了初步研究.试验结果显示,纯化后该噬菌体的噬菌斑直径约3mm;经高于60℃温度处理1h后噬菌体失活;PH5-7时该噬菌体可保持较高效价和较强的紫外线耐受性;该噬菌体的最佳感染复数(MOI)为0.01-0.001;一步生长曲线显示该噬菌体的潜伏期为40min,裂解期持续60min.     

鸡白痢沙门氏菌O12特异性噬菌体的分离及生物学特性研究

采用双层平板培养法从成都某养鸡场的污水样本中分离得到一株鸡白痢沙门氏菌O₁₂(宿主菌)的噬菌体(Ph-1), 并对菌斑形态及理化特性进行了初步研究. 试验结果显示, 纯化后该噬菌体的噬菌斑直径约3mm; 经高于60℃温度处理1h 后噬菌体失活; PH5-7时该噬菌体可保持较高效价和较强的紫外线耐受性; 该噬菌体的最佳感染复数(MOI)为 0.01-0.001; 一步生长曲线显示该噬菌体的潜伏期为40min, 裂解期持续60min.     

鸡白痢沙门氏菌O12特异性噬菌体的分离及生物学特性研究

采用双层平板培养法从成都某养鸡场的污水样本中分离得到一株鸡白痢沙门氏菌O12 (宿主菌)的噬菌体(Ph-1), 并对菌斑形态及理化特性进行了初步研究. 试验结果显示, 纯化后该噬菌体的噬菌斑直径约3mm; 经高于60℃温度处理1h 后噬菌体失活; PH5-7时该噬菌体可保持较高效价和较强的紫外线耐受性; 该噬菌体的最佳感染复数(MOI)为 0.01-0.001; 一步生长曲线显示该噬菌体的潜伏期为40min, 裂解期持续60min.     

响应面分析法优化蛭弧菌生长条件

为了优化蛭弧菌的生长条件,在前期研究确定适于蛭弧菌BD1生长的最佳pH、盐度、二价金属离子(Ca2+、Mg2+)、谷氨酸钠的浓度范围的基础上,综合考虑4个因子对蛭弧菌BD1生长的影响,利用Design Expert 6.0软件进行响应面分析,优化菌体生长条件,得到该菌株生长模型,并在模型最优值时得到各因子的水平。结果表明:BD1的最优培养条件为盐度(NaCl浓度)为2.9%,培养液pH值为7.4,Ca2+、Mg2+浓度为6.4 mmol,谷氨酸钠浓度为4.2 mmol。菌体生长过程中,盐度和二价金属离子,谷氨酸钠和二价金属离子,谷氨酸钠与盐度交互作用不显著,pH与盐度,pH与谷氨酸钠,pH与二价金属离子交互作用显著。菌体生长模型达到显著水平,可以对BD1在不同条件下的生长情况进行分析和预测。