AFLP的一种改进方法

扩增片段长度多态性技术是一种兼具稳定性及多态检出率高的ＤＮＡ指纹分析技术,具有广泛应用前景,但该技术费用高,操作较复杂,本文对ＡＦＬＰ技术从限制性内切酶水解,扩增条件,检测方法三方面作了一些改进,建立了一磋稳定的和简便易行的实验条件,同时对这种改进的方法对家蚕基因组ＤＮＡ的多态性进行了初步研究,得到了良好的ＤＮＡ的多态性检测效果,不仅分辨力较高,而且带型稳定。     

马铃薯病毒一步法RT-PCR诊断研究

运用一步法RT-PCR对马铃薯和烟草中的马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒进行了检测,实验表明:对酚-SDS方法提取的病毒核酸进行扩增,一步法RT-PCR检测到的扩增产物的灵敏度较两步法RT-PCR的高100倍左右.两种提取方法对比,用一步法RT-PCR进行扩增,检测到的PEG法扩增产物的灵敏度较酚-SDS法扩增产物的灵敏度高3倍.建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的马铃薯病毒一步法RT-PCR检测技术.     

环介导等温扩增技术研究进展

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种高效、简便、高特异性、无需热循环设备的核酸扩增技术. 由于LAMP依然具备巨大的改造潜力,所以近些年来,一直有研究改进其技术以期达到更好的扩增检测效果. 本文对LAMP的基本原理、应用领域范围以及技术改良方向进行了综述,为今后该技术的改良与发展提供参考.     

PCR 技术用于 DNA 多态性分析 apoB—3′HVR 和 D17S30位点的体外扩增

本文用PCR技术扩增了北京地区73名无关个体的apoB—3'HVR和其中50名的D17S30位点.经琼脂糖凝胶电泳检测,在人群中表现出一定程度的多态性;同一样品分别扩增apoB—3'HVR和D17S30,其扩增带有明显的差别;而同一样品分次扩增后,其扩增带完全一致,表明扩增产物的可重复性.与DNA 指纹技术相比,这种方法虽然鉴别能力较低,但操作简便,灵敏度高,适于微量生物样品检验.我们将该技术应用于两例亲子鉴定案,其中一例排除了嫌疑父亲,另一例则不能排除.     

环介导等温基因扩增技术在林木病害检测中的应用展望

森林病害主要是由病毒、细菌、真菌和寄生性生物引起的,其中真菌所致病害种类最多,约占森林病害的80%以上。环介导等温基因扩增(LAMP)技术是一种快速高效的DNA扩增方法,具有简单、快捷、特异性强、准确性高等特点,笔者论述了LAMP技术的原理及其在病毒、细菌、真菌和寄生性生物等方面的应用及研究。该技术广泛应用于食品、临床、环境、农业、工业和畜牧业等领域。环介导等温扩增技术为快速分子检测提供了一条新的途径,在林木病害检测领域将会有广阔的应用前景。     

运用PCR技术检测育龄妇女宫颈分泌物中沙眼衣原体感染

运用ＰＣＲ技术检测育龄妇女宫颈分泌物中的沙眼衣原体。方法：根据国外报道的ＣＴ基因序列，利用计算机辅助设计选出一对寡核苷酸引物，扩增片段为５１０ｂｐ。结果：运用经改进完善后的ＰＣＲ技术检测育龄妇女宫颈分泌物中ＣＴ的阳性率为１４．８％，扩增的灵敏度为０．１ｆｇ／μｌ，划性为１００％。结论：ＰＣＲ技术检测ＣＴ感染快、简便、特异性强、灵敏度高。     

RAPD-PCR技术及其在昆虫学研究中的应用综述

聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction,简称 PCR)技术是一项可在生物体外对特定 DNA序列进行快速扩增的新技术。随机扩增的多态性 DNA技术 (Random amplified polymorphic DNA,简称 RAPD)是一项基于 PCR技术上的 DNA分子水平上的大分子多态检测技术。本文对该技术在昆虫学研究领域的应用状况做了一个系统的收集和整理 ,认为它在昆虫分类、系统进化、抗药性机理及抗性基因检测等方面的研究中具有着广泛的应用前景 ,而且它的应用前景随着技术和统计方法的完善将更加广阔。     

AFLP技术及其在动物遗传育种中的应用

扩增片段长度多态性(AFLP)被称为“下一代分子标记”。是检测DNA多态性的一种新技术．该技术可靠性强,多态性检出率高,因而被认为是最有效的DNA指纹分析技术,AFLP已广泛应用于分类学、种群遗传学、病理学、DNA指纹分析的研究和建立数量性状基因图谱,成为最主要的遗传标记,论述了AFLP的原理、特点、影响实验成功的关键因素及在动物遗传育种中的应用。     

STR遗传标记荧光复合扩增系统的法医学应用

目的：建立D20S601、D6S474、D6S2418荧光标记复合扩增体系,并对其进行法医学实用性研究。方法：利用传统复合扩增技术扩增D20S601、D6S474、D6S2418基因座,在不同条件下对复合扩增系统的同一性、灵敏性、可重复性等进行测试,用实际案例进行验证。结果：建立的D20S601、D6S474、D6S2418荧光标记复合扩增体系的扩增条件要求不高,法医实用性研究证明该体系实用性好。结论：建立了D20S601、D6S474、D6S2418遗传标记的荧光标记复合扩增体系。法医学应用性研究证明,该系统分型结果稳定,重复性好,灵敏度高．对陈旧斑痕具有检测能力,能够对常见介质上的斑痕正确分型,与常见的动物及微生物无交叉反应,可成功应用于法医检案。     

免疫PCR技术的策略

免疫PCR是一种新兴的免疫标记技术，具有高敏感性和特异性的特点．本文对免疫PCR的方法、DNA标记探针的构建及扩增产物的检测进行了综述．     

食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立

食品及其原料中沙门氏菌的快速、现场检测对食品安全控制具有重要意义.根据沙门氏菌invA基因核苷酸序列设计一组引物,应用环介导等温扩增技术（LAMP）,分别对7种不同血清型沙门氏菌和4种非沙门氏菌进行扩增,同时建立沙门氏菌人工污染的食品模型,比较了LAMP法与活菌计数检测的敏感性.结果表明,该方法仅对沙门氏菌产生特异性扩增,灵敏度高达336,mL-1,食品样品经细菌富集培养后,检测灵敏度高达8.25,g-1.所建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于沙门氏菌污染食品的快速检测.     

LAMP法鉴定家鸡性别的初步研究

为建立一种利用环介导等温扩增（LAMP）技术高效快速鉴定家鸡及早期胚胎性别的反应体系,本研究以W染色体上假基因序列EE 0.6序列为模板,设计LAMP引物,对反应温度、反应时间、Mg2＋浓度、dNTP浓度等条件进行优化.结果表明,在25μL反应体系中,Mg2＋终浓度为6 mmol/L,dNTP终浓度为1.5 mmol/L,63℃反应60 min时为最佳反应体系.在该反应体系下,LAMP成功地鉴定出家鸡性别的雌雄,准确率达到100%.此方法将成为一种快速有效地鉴定家鸡早期胚胎性别的新方法,且可以在生产实践中广泛推广应用.     

罗非鱼无乳链球菌LAMP快速检测方法的建立

针对无乳链球菌高度保守的表面免疫相关蛋白基因,采用环介导等温扩增技术(LAMP),设计4条特异性引物,优化反应体系,建立罗非鱼无乳链球菌快速诊断方法.研究结果表明,LAMP方法检测灵敏度达到30 CFU·m L-1,且对2株罗非鱼源无乳链球菌均能扩增出特异性片段,而对14株非无乳链球菌均未扩增出相应片段.建立的LAMP检测方法具有高度的特异性和灵敏性,反应在1 h内完成,为罗非鱼无乳链球菌病的快速诊断提供了一种重要的技术手段.     

猪瘟强毒株与兔化弱毒疫苗株的LAMP鉴别检测

为了鉴别猪瘟病毒（CSFV）野毒感染和疫苗接种,系统比较分析CSFV标准强毒株、疫苗株、不同基因亚型的野毒株的全基因组序列差异,设计一套分别针对猪瘟强毒与弱毒NS5B基因的环介导等温扩增（LAMP）引物,建立特异性的猪瘟强毒株与疫苗株的LAMP检测方法.LAMP扩增产物用罗丹明B指示剂或者琼脂糖凝胶电泳进行检测.该方法特异性好,比RT-PCR灵敏度高出1 000倍,且重复性稳定性良好,为快速准确地鉴别CSFV野毒感染和疫苗接种提供了有效的方法.     

植物病毒分子检测方法研究进展

介绍了双链RNA、核酸杂交、多聚酶链式反应、核酸序列扩增、基因芯片等分子检测方法在植物病毒检测中运用的成功技术，并具体介绍了各种分子检测方法的原理和特点。     

基于LAMP的售书网站的设计与实现

LAMP(Linux+Apache+MySQL+PHP)以其高效、快捷、安全、成本低廉等优势获得了企业应用开发的青睐。文章介绍了LAMP开发平台构建,以及在该平台上设计和实现电子商务售书网站的过程。     

代谢组学技术在兽药违规使用监测中的应用及研究进展

兽药残留分析检测技术的开发与创新是动物源性食品安全监测的重要研究内容。作为系统生物学的重要组成部分,代谢组学研究及其检测技术在动物源性食品安全领域发挥了不可或缺的作用。基于当前代谢组学技术在兽药残留检测领域的研究成果,阐述了代谢组学的概念、原理与分类;以"瘦肉精"和类固醇两类违禁兽药残留检测为例,简述了液相色谱串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS)、气相色谱串联质谱法(gas chromatographytandem mass spectrometry,GC-MS)等代谢组学常用检测技术对动物血液、尿液等生物样本进行残留分析检测的应用现状,分析了非靶向代谢组学与靶向代谢组学存在的精确度差与通量低等问题,以及代谢组学技术对大型仪器设备与专业数据库过度依赖的局限性;进一步提出了代谢组学技术在兽药残留检测的应用中应根据样品特点及检测目的,将多技术平台(液相色谱-电喷雾飞行质谱、超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱)、分析平台(主成分分析、偏最小二乘判别分析)与多组学技术(基因组学、转录组学、蛋白组学)联合使用以提高代谢组学技术在兽药残留检测领域的适用性与应用范围,为兽药残留分析检测提供新的研究方向。     

cDNA-AFLP技术在植物差异基因表达研究上的应用

cDNA-AFLP技术是能够对生物体转录组进行全面分析的新技术，因其具有多态性丰富、稳定性高、效率高等优点，被广泛应用于基因表达研究。随着科技发展，该技术不断得到完善与创新，并取得了很多研究成果。本文简单介绍了cDNA-AFLP技术的基本原理及技术特点，概述了其在植物差异基因表达上的应用现状，并对其发展前景进行了展望。     

火灾探测技术的现状及发展方向

对火灾自动探测技术的发展概况及优缺点进行了总结，指出了今后发展方向，尤其介绍了CO作为探测特性参数之一的必要性：最后指出了今后尚需解决的课题：如低功耗、高灵敏度CO传感器的应用及与其他传感元件的复合：主动吸气式探测技术在普通环境中应用；分布光纤测温技术研究及产品化：特殊场所的火灾探测：以及降低成本的同时与自动化、现代通讯及其他领域新技术的进一步融合等问题。     

罕见病诊断的相关技术及发展

 罕见病大多数是遗传性疾病,其发病率低,种类繁多且表型复杂多样,导致临床上难以进行及时和准确的诊断。随着分子遗传学、分子诊断技术、基因测序技术及组学技术的进步,罕见病诊断取得了重大发展。在传统基因检测技术基础上,二代测序技术迅速发展并广泛应用于罕见病的诊断和研究中,三代测序技术也展示出潜在应用价值。虽然传统的酶学检测技术仍占有重要地位,但已不能满足罕见病诊断的需求;蛋白质组学、代谢组学的崛起,使多种罕见病的准确诊断成为可能。同时结合分子影像技术和生物信息技术,计算机辅助诊断也展现出了广泛的应用前景。