肝素共混丝素蛋白膜上AT-的固定化及其体外抗凝血性能

用抗凝血酶(antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)和肝素对生物材料进行表面改性,以提高其抗凝血性能.以低浓度肝素丝素共混蛋白膜为基质,利用等离子体处理辅助的共价交联方法对AT-Ⅲ进行固定化.用过剩法对固定化效果进行评价,固定化后的活性采用体外凝血时间进行检测,人血管内皮细胞在材料上的生长情况用MTT法测定.结果显示,通过该方法可以有效地将蛋白固定化,低浓度肝素丝素共混膜固定化AT-Ⅲ后,不仅其抗凝血性能有了一定的改善,而且与普通的肝素共混膜相比,细胞毒性也有所降低.该研究结果拓展了AT-Ⅲ蛋白的应用范围,同时为抗凝血材料的设计提供了一种新的思路.     

肝素共混丝素蛋白膜上AT-的固定化及其体外抗凝血性能

用抗凝血酶(antithrombin- ,AT- )和肝素对生物材料进行表面改性,以提高其抗凝血性能.以低浓度肝素丝素共混蛋白膜为基质,利用等离子体处理辅助的共价交联方法对AT- 进行固定化.用过剩法对固定化效果进行评价,固定化后的活性采用体外凝血时间进行检测,人血管内皮细胞在材料上的生长情况用MTT法测定.结果显示,通过该方法可以有效地将蛋白固定化,低浓度肝素丝素共混膜固定化AT- 后,不仅其抗凝血性能有了一定的改善,而且与普通的肝素共混膜相比,细胞毒性也有所降低.该研究结果拓展了AT- 蛋白的应用范围,同时为抗凝血材料的设计提供了一种新的思路.     

丝素改性聚氨酯膜的物理性质及其细胞相容性

用丝素蛋白或丝素肽表面改性的聚氨酯膜表现出良好的柔韧性，它能够克服丝素膜刚而脆的弱点；由水分散型聚氨酯制备的改性膜的透气性高于疏水性聚氨酯膜；细胞培养实验结果表明：经丝素蛋白或丝素肽改性后，聚氨酯膜的生物相容性明显提高且处理效果是稳定的。     

用ELISA法测定SPA与多种动物IgG的结合特性

应用酶联免疫吸附试验对兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊、鲫鱼、鸭、蟾蜍和黄鳝9种动物血清IgG与SPA的结合特性进行了研究。酶标SPA浓度梯度,IgG包被浓度梯度及特异性自体和异体IgG阻断试验的结果表明:兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊及鲫鱼的IgG能与A蛋白结合,而鸭、蟾蜍及黄鳝的IgG不能与A蛋白结合。这些结果对进一步用葡萄球菌A蛋白作免疫测定和纯化IgG具有实用意义。     

金黄色葡萄球菌A蛋白的分离和纯化

金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A,简称SPA)能特异地结合许多高等动物和人的免疫球蛋白,因此常作为第二抗体应用在免疫化学研究及临床免疫学上。由于SPA是菌壁蛋白,分离高纯度的样品难度较大。本文采用金黄色葡萄球菌Cowan Ⅰ菌株为实验材料,比较了几种制备SPA粗品的方法,并以亲和层析及制备电泳方法提纯SPA,获得电泳单点纯的样品。     

金黄色葡萄球菌蛋白A的荧光标记和应用

来源于金黄色葡萄球菌(Staphlococcus aureus)细胞壁的A蛋白(Staph ptotein A,简作SpA)能与各种抗体球蛋白G(IgG)的Fc区相结合,且不减弱抗体抗原的结合。V.Ghetie等人认为SpA是作为多价交联剂作用于IgG受体的。Jrgen Sjahl曾用胰蛋白酶(Trypsin,TR)和溶金黄色葡萄球菌酶(Lysostaphin,Ls)两种酶水解A蛋白,测     

一种蛋白A的Z结构域衍生物的构建及对IgG亲和力的研究

蛋白A是金葡菌中一种重要的致病因子,有较强结合多种哺乳动物的IgG的能力,因此降低机体产生特异性SPA抗体的水平,使金葡菌具免疫逃逸功能.研究一种与IgG亲和力较弱的蛋白A衍生物,对金葡菌疫苗的开发具重要意义.研究表明,蛋白A的Z结构域中位于第13、14位的Phe,Tyr是两个与IgG结合的关键位点.本文首次通过PCR突变技术,将这两个关键氨基酸均改造为Gly,构建突变体ZFY.Discovery Studio3.5受体-配体相互作用力模块分析显示,突变体ZFY与IgG结合力降低到-61.68kcal/mol,仅为原相互作用力的10.69%;构建得到ZFY蛋白,经ITC测定,ZFY与兔IgG的亲和常数降低到1.2×104 M-1,仅为原亲和常数的0.39%,证明了ZFY是一种与IgG亲和力较弱的蛋白A衍生物,为实现新型蛋白A疫苗治疗金葡菌感染奠定基础.     

表面等离子共振测定CD45-FITC抗体与蛋白A特异性结合常数

运用表面等离子共振(SPR)平台建立测定CD45-FITC抗体与蛋白A特异性结合常数的方法。当偶联蛋白A的传感芯片上流过CD45-FITC抗体溶液时,双通道SPR仪实时监测CD45-FITC抗体与蛋白A特异性结合过程,获得了该反应不同温度下的结合速率常数k_a、解离速率常数k_d和结合平衡常数K_a,以及该反应的活化能E_a和焓变△H。结果表明该特异性结合比较适宜的条件是:中性或微碱性、较高的离子强度和较高的温度。该方法操作步骤简单、快速、灵敏度高、消耗样品少,是研究分析免疫球蛋白IgG抗体和蛋白A等生物分子相互作用比较理想的方法之一。     

丝素蛋白/改性Fe3O4纳米粒子复合材料的制备

文章采用共沉淀法制备Fe3O4纳米粒子,分别用油酸钠、聚乙二醇对纳米粒子改性.超声下用乙醇分散改性纳米粒子,再与丝素蛋白溶液形成凝胶,制备出丝素蛋白/磁性纳米粒子复合材料.采用红外光谱仪、透射电镜、振动样品磁强计等对产物进行表征.结果表明,复合产物的铁氧特征吸收峰出现在583 cm-1处,透射电镜显示改性后的纳米粒子较均匀地分布到丝素蛋白溶液中,并表现出较好的磁性.油酸钠较聚乙二醇(PEG)改性Fe3O4纳米粒子的效果更好.     

含RGD序列水蛭素嵌合抗栓剂的构建与表达

通过对水蛭素及一些含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的多肽类血小板聚集抑制剂结构与功能的分析,设计并构建了两个在水蛭素C端融合RGD序列的嵌合分子。嵌合体基因分别重组到表达载体pET-21a(+)中并转化大肠杆菌BL21(DE3)。经限制酶消化和DNA序列分析,证明两种重组质粒与设计完全一致。由于RGD-水蛭素嵌合基因上游连接了金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)的信号肽序列,在IPTG诱导下两种嵌合分子都获得了分泌表达,表达产物主要集中在细胞周质空间。通过离子交换层析和凝胶过滤层分别对两种嵌合体蛋白进行纯化,纯化产物在Tricine-SDS-PAGE中都显示为单一条带。活性分析结果表明两种嵌合体蛋白在保留水蛭素抗凝血酶活力的同时,还呈现抗血小板聚集活性。     

4种含RGD的短肽对细胞粘附作用的影响

从两方面对比研究了4种含Arg-Gly-Asp(RGD)的细胞粘附肽RGD,RGDS,RGD-(NH₂)₂即RGE-NH_{2和RGDS-NH2对细胞粘附的影响. 一方面研究了固定在聚乙交酯丙交酯共聚物（PLGA）膜上的4种细胞粘附肽通过其细胞定向作用对大肠癌细胞（HCT-8）和人成骨肉瘤细胞（OS732）细胞粘附性 的促进作用; 另一方面研究了外源性细胞粘附肽对HCT-8和OS732在纤维连接蛋白（FN）上粘附的竞争性抑制作用. 结果发现,除了RGD-(NH2)2,其他3种肽都具有明显抑制细胞粘附的作用且具有一定的浓度依赖关系,其中以RGDS和RGDS-NH2的能力最强,RGD稍弱. 对于HCT-8细胞,3种肽的最大抑制率分别为53.3%, 56.3%,37.5%;而对OS732细胞,3种肽的最大抑制率分别为50.9%,49.8%,34%.}     

RGD对人纤维肉瘤细胞HT1080增殖、黏附及转移影响的研究

利用合成的RGD(Arg-Gly-Asp)三肽研究了其抑制人纤维肉瘤细胞HT1080的增殖、黏附及转移作用.采用MTT法检测了不同浓度的RGD对HT1080细胞增殖及黏附纤维粘连蛋白(fibronectin)能力的影响;采用细胞划痕法研究了RGD对HT1080细胞在纤维粘连蛋白中迁移能力的影响.结果表明,合成的RGD能抑制HT1080细胞的增殖,并具有抗肿瘤细胞黏附、抗转移的活性.     

Interaction between integrin a Ⅱbβ 3 and synthesized cyclic hexapeptide containing RGD

The RGD sequence generally exists in the extracellular matrix proteins and can be recognized by many integrin proteins. The binding ability of immobilized biotinylated cyclic hexapeptide [cyclo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-Gly-)] containing RGD to integrin a ab β3 was tested by the methods of ELISA and SPR. Results showed that a spacer of 1.48-2.2 nm between the peptide and the biotin residue was long enough to send the RGD sequence into the binding center embedded within a Ⅱbβ 3, and the equilibrium dissociation constant was 1.1 μm. The work provides an ideal model system for the research of cell adhesion on solid surfaces.     

固定化单宁的性质及其在啤酒澄清上的应用

本文研究了使用表氯醇共价结合到氮基已基纤维上的固定化单宁的性质及其在啤酒澄清上的应用。固定化单宁对蛋白质的吸附量受蛋白质溶液PH的影响,在吸附的最适PH因蛋白质的不同而不同。固定化单宁对铁离子的吸附量是每克固定化单宁(湿重)吸附6.1mg,已吸附蛋白质或铁离子的固定化单宁不影响其再对铁离子或蛋白质的吸附。在固定化单宁上吸附的牛血清白蛋白用0.001N NaOH,0.005N盐酸或3N尿素洗脱而再生。其洗脱率在80％以上。固定化单宁在4℃贮存一年,室温放置11天或在0.5N盐酸中处理7小时,其吸附力不变。用固定化单宁处理过的啤酒在4℃贮存一年不产生冷浑浊,500mg固定化单宁能澄清啤酒150ml。     

生物传感器用于葡萄酒中葡萄糖含量测定的研究

将葡萄糖氧化酶(GOD)固定再生丝素蛋白在中,制得葡萄糖氧化酶传感器。该传感器在pH=7.0的磷酸缓冲溶液中,葡萄糖浓度在1.0×10-4 —2.5×10-3mol/L范围内呈良好线性关系。检测限5.0×10-5 mol/L,响应时间1分钟。该传感器用于葡萄酒中葡萄糖含量的测定,与酶-比色法测得结果一致。     

质子交换膜燃料电池膜电极关键材料研究进展

膜电极是质子交换膜燃料电池(PEMFC)的关键技术部件,本文根据其构造综述了近几年国内外在膜材料、电极催化剂和气体扩散层方面的研究进展,包括Nafion改良膜、磺化聚芳烃（SPA/SPE）类膜、Pt改性催化剂、非贵金属催化剂以及气体扩散层。对各种材料进行了评价和比较,并指出今后应着眼于Nafion膜的简便改良方法、芳香烃聚合物共混膜的研制、含有Co、N等电极催化剂的研究以及具微孔层、表面较粗糙、疏水性较大的扩散层的研发。     

Functionalization of PCL fibrous membrane with RGD peptide by a naturally occurring condensation reaction

Poly(e-caprolactone)(PCL)is widely adopted as an ingredient for tissue engineering scaffolds.To improve its cell affinity,in this study,we developed a new method to introduce bioactive RGD peptides onto the surface of PCL via condensation reaction between 2-cyanobenzothiazole(CBT)and D-cysteine.The PCL fibrous membranes were prepared by electrospinning,and RGD functionalization was characterized by fluorescence microscopy,scanning electron microscopy(SEM),X-ray photoelectron spectroscopy(XPS)and water contact angle(WCA).As expected,our results demonstrated the successful RGD immobilization on the surface of PCL.RGD modification improved the hydrophilicity of PCL,changing their WCA from 112.20°to38.35°.Cell adhesion,spreading and proliferation of 3T3fibroblasts were also enhanced.We therefore believe that the methods reported in this study was facile and effective for functional modification of the hydrophobic PCL scaffolds.The moderate reaction conditions are also suitable for covalent immobilization of bioactive molecules onto PCL.     

血红素类蛋白质-纳米氧化铝-金胶自组装体系的直接电化学与电催化

三种血红素类蛋白质--细胞色素c、肌红蛋白、血红蛋白,被固定在纳米氧化铝-金胶自组装体系修饰玻碳电极表面,紫外光谱实验结果表明固定在纳米氧化铝-金胶表面的蛋白质保持其原始的二级结构不变.用电化学阻抗光谱和循环伏安技术表征了界面的组装过程及其电化学性质,结果表明纳米氧化铝-金胶模板不仅为蛋白质固定提供了良好的环境,而且加快了蛋白质分子与电极之间的电子转移.讨论了扫描速度对细胞色素c电化学行为的影响及其对过氧化氢的电催化还原等性质.     

Interaction between integrin αIIbβ3 and synthesized cyclic hexapeptide containing RGD

The RGD sequence generally exists in the extracellular matrix proteins and can be recognized by many integrin proteins. The binding ability of immobilized biotinylated cyclic hexapeptide [cyclo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-Gly-)] containing RGD to integrin α_αbβ₃ was tested by the methods of ELISA and SPR. Results showed that a spacer of 1.48–2.2 nm between the peptide and the biotin residue was long enough to send the RGD sequence into the binding center embccedded within α_IIbβ₃, and the equilibrium dissociation constant was 1.1 μm. The work provides an ideal model system for the research of cell adhesion on solid surfaces.