茶多酚对肿瘤细胞多药耐药性逆转作用的研究

用免疫组化法和流式细胞仪对肿瘤细胞系MCF－7和MCF－7／Adr的P－糖蛋白表达水平进行定性定量研究。用噻唑蓝比色法（MTT）研究茶多酚的细胞毒性及其对耐药性的逆转作用,并与Pgp抑制剂－奎尼定进行了比较。免疫组化法检测P－糖蛋白表达水平,MCF－7／Adr呈强阳性,而CF－7呈阴性;流式细胞仪定量检测结果MCF－7／Adr细胞系细胞阳性率为15％,MCF－7细胞系细胞阳性率为1.8%。MCF－7／Adr细胞系存在Pgp的过度表达。噻唑蓝比色法（MTT）检测结果茶多酚、奎尼定的加入对阿霉素对MCF－7的细胞毒性几乎没有影响。而茶多酚、奎尼定的加入明显增加了MCF－U／Adr对阿霉素的敏感性。免疫组化与流式细胞技术结合,可用于肿瘤细胞系P－糖蛋白表达水平的定性定量检测。茶多酚不仅具有一定的抗癌活性,还与奎尼定一样具有多药耐药性逆转作用。     

X射线一次急性照射与分次累积照射对猕猴精子发生中染色体畸变的影响

本实验以性成熟猕猴(Macaca mulatta)12只,分为对照、一次急性照射和分次累积照射三组,每组4只猴子。经200仑X 射线一次急性和分次累积(每隔24小时照射20仑,10天内累积总剂量为200仑)局部照射猕猴睾丸,以精子发生中精母细胞第一次减数分裂后期和早末期所出现的染色体畸变为指标,此较研究猕猴在总剂量和剂量强度相同的情况下,经一次急性照射和分次累积照射的细胞遗传学效应。对照组的平均染色体畸变率为0.297±0.103%,200仑X 射线一次急性照射组和分次累积照射组的平均染色体畸变率分剐为2.979±0.179%和1.276±0.144%。由此可见,两种不同处理组的染色体畸变率均高于对照组,而一次急性照射组的染色体畸变率又比分次累积照射组增加一倍以上。经统计分析指出:各组染色体畸变率之间差异是显著的,对照～处理P<0.001(对照～一次急性照射P<0.001;对照～分次累积照射P=0.005-0.001),一次急性照射～分次累积照射P=0.005-0.001。实验证明:在总剂量和剂量强度相同时,猕猴睾丸经X 射线一次急性照射所引起的细胞遗传学损伤比分次累积照射更为严重,并表明200仑X 射线分次累积照射诱发染色体畸变的效应并不是按照简单的相加法则而累积的。     

_60_Co_射线不同时间辐照蚕豆萌动种子的细胞学研究

本试验采用~(60)CO—γ射线同一剂量(1850伦)和剂量率(90伦/分)昼夜每隔2小时照射萌动的蚕豆种子.以一天为一周期,共观察了两个周期的细胞变异情况.试验结果表明:辐照对根尖细胞有丝分裂有明显的抑制效应,但处于不同时期的细胞对辐射的敏感性有明显的差异,DNA合成期(S期)对辐射较敏感.畸变频率与畸变类型成正相关,但不同时期辐照所产生的畸变类型也有一定的特异性,在早S期照射则染色体畸变较多,占总畸变率的48.4%,在染色体畸变中,又以断片出现较多,占染色体畸变的50%;而在S期后受照则出现核畸变较多,占总畸变率89.2%,在核畸变中,又以微核出现最多,占整个核畸变的82.8%.所以,进行辐射育种工作时,如照射萌动种子,注意从细胞周期的动态上去考虑,选取适当的时期进行照射也是很重要的.     

(60)~Co-r射线辐射番茄种子对根尖细胞遗传学效应的影响

用６０Ｃｏ－ｒ射线辐射番茄干种子，水培法生根后，观察根尖细胞有丝分裂中出现的桥、断片、粘连、微核等染色体畸变类型，辐射剂量在（５～１０）ｋｒａｄ范围内畸变率较低；在（１０～２０）ｋｒａｄ范围内畸变率最高，畸变类型最丰富，在此范围内随剂量增加，断片数量增多，桥的类型除单桥外还出现多桥且数量增多，在２０ｋｒａｄ以上范围的高辐射剂量对染色体破坏力较大，不利于番茄育种和生长，经对照实验和统计分析可知，辐射剂量的增加对有丝分裂有抑制作用     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＣＲ１）性的方法,提高化疗效。本采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡ＭＤＲ１－ＡＳ ＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＾＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳ ＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的     

白桦脂酸体外抗肿瘤的活性和机制

研究白桦脂醇（Betulin）和白桦脂酸（Betulinic Acid, BA）对3种癌细胞株的增殖抑制作用以及白桦脂酸诱导MCF 7细胞毒的分子机制. 应用结晶紫染色方法对白桦脂醇和白桦脂酸对肿瘤细胞的生长抑制作用进行筛选； 应用RT-PCR技术检测MCF 7细胞p21 mRNA, p53 mRNA, Bcl 2 mRNA和Bax mRNA的表达. 结果表明, 白桦脂醇和白桦脂酸有显著抑制肿瘤细胞生长的作用, 且有浓度依赖性; 白桦脂酸能够诱导MCF 7细胞凋亡, 并诱导其p21 mRNA和p53 mRNA表达增高, 但对其Bcl 2 mRNA和Bax mRNA 的表达无影响.     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性和诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ１）性的方法,提高化疗效果。本文采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡,发现ＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ１,促进阿霉素诱导ＭＤＲ＋１Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,为其临床应用提供理论依据     

奥曲肽对鼻咽癌细胞株CNE2生长和细胞周期的影响

观察了一定剂量的奥曲肽对鼻咽癌细胞株CNE2的细胞生长与细胞周期的影响,探讨药物对的抗肿瘤作用,从而为临床治疗鼻咽癌提供一种新的思路,并在理论上奠定一定基础。用MTT法检测细胞生长抑制作用,流式细胞仪（FCM）检测细胞周期,t检验进行统计学分析。结果表明：1．0nmoL／L-1．0μmol／L的奥曲肽均能抑制鼻咽癌细胞株CNE2的生长,且在此范围内明显呈药物量——效关系,1．0μmol／L的奥曲肽可以使鼻咽癌细胞株CNE2阻滞在G0／G1期。一定剂量的奥曲肽能够抑制鼻咽癌细胞株CNE2的生长,奥曲肽有望在药物治疗鼻咽癌方面发挥一定的作用,值得进一步研究。     

新型植物来源生物碱——唐松草阿原碱对人体肿瘤细胞株的细胞毒性研究

研究从毛莨科唐松草属植物尖叶唐松草根部提取的新型醚键双生物碱－唐松草阿原碱对几种人体肿瘤细胞株的毒性作用。唐松草阿原碱以质量浓度从2．5μg/mL到100μg/mL作用于6种体外培养的肿瘤细胞株及2种正常细胞株,对其中4个肿瘤细胞株种表现了强烈的杀伤作用。IC50分别为：宫颈癌Hela37 μg/mL,肝癌LCC60μg/ml,胃癌MGC65μg/mL,非小细胞肺癌PLA－80182μg/mL,对2个正常细胞株的毒性分别为：肝细胞L－0265μg/mL,小鼠成纤维细胞NIH3T378μg/mL,而对另一株肝癌HepG2及乳腺癌细胞MCF－7无明显作用（IC50＞100μg/mL）。     

带HSV－tk基因的重组腺病毒杀伤离体肺癌细胞的研究

带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的腺病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分裂细胞有很强的杀伤作用．在感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ,ＭｕｌｔｉＰｌｉｃｉｔｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到１００％．四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９,ＬＡＸ,ＳＰＣ,ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的腺病毒（ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ）的杀伤作用表现出不同的敏感性．另Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ（ＡＣＶ）和ＧＣＶ对感染了重组腺病毒ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞都有一定杀伤作用,但杀伤效果有很大差别;就Ａ５４９而言,ＧＣＶ的杀伤作用比ＡＣＶ高７～８倍．此外ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ结合ＧＣＶ杀伤肿瘤细胞时有“旁观者效应”,即感染了ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞与未感染细胞混合后,后者也明显地遭到杀伤．     

Gui-Pi-Wan extract acts as a radioprotective agent

The radioprotective effects of 6 Gui-Pi-Wan extracts were investigated by examining cell viability and 30-d survival of mice after total-body ⁶⁰Co irradiation. Pretreatment with Gui-Pi-Wan precipitate by water extraction and alcohol precipitation (PWA) prior to irradiation resulted in significantly higher cell survival and lower apoptosis rates at 24 h after 5 Gy radiation, and increased 30-d survival in mice after exposure to a potentially lethal dose of 8 Gy. These results collectively indicate that PWA of Gui-Pi-Wan extracts is an effective radioprotective agent.     

rH2AX核内斑点在不同成胶质瘤细胞中的剂量时间效应研究

将成胶质瘤细胞MO59K和MO59J两种细胞分别给予1Gy,2Gy,4Gy和8Gy的6MV-X线照射,并分别于0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h收集细胞,检测rH2AX核内斑点时间及剂量效应特点.结果发现,MO59K细胞和MO59J细胞随着照射剂量的增加rH2AX核内斑点数量增加;并且MO59K细胞接受8Gy照射后rH2AX斑点在24h内能够恢复到放疗前的水平,而MO59J细胞内rH2AX斑点不能恢复到照射前水平.提示MO59J细胞较MO59K细胞敏感,照射后rH2AX核内斑点更难恢复到未照射水平.     

重组质粒pEgr-1-TRAIL辐射诱导乳腺癌细胞效应的实验研究

目的将具有辐射诱导表达特性的重组质粒p Egr-1-TRAIL转入乳腺癌MCF-7细胞中,诱导肿瘤杀伤基因TRAIL的表达,实现辐射和基因对MCF-7细胞的双重杀伤效应.方法用ELISA法检测不同剂量X射线诱导TRAIL表达的量效关系及2 Gy X射线照射后不同时间TRAIL的表达;用流式细胞仪检测不同处理组MCF-7细胞早期凋亡情况.结果不同剂量X射线照射转染p Egr-1-TRAIL重组质粒的乳腺癌细胞MCF-7,TRAIL表达量明显高于假照组(P0.001~0.05),其中5 Gy X射线照后表达量最高,TRAIL表达量为假照组的5.1倍.2 Gy X射线照射后4 h,TRAIL表达量明显升高(P0.05),并随时间延长逐渐增加,照射后32 h达峰值,表达量为照射前的4.6倍.MCF-7-p Egr-1-TRAIL/0 Gy组早期凋亡细胞百分数较MCF-7/0 Gy和MCF-7-p3.1Egr/0 Gy组明显增加(P0.01),随着照射剂量的增加,MCF-7-p Egr-1-TRAIL/5 Gy组细胞早期凋亡率与其他处理组比较均存在统计学意义(P0.001~0.05),MCF-7/0 Gy组细胞生长最快,而MCF-7-p Egr-1-TRAIL/8 Gy组细胞生长最慢.结论乳腺癌细胞转染p Egr-1-TRAIL重组表达质粒联合X射线照射能够增加MCF-7细胞凋亡,抑制其生长.     

pEgr1-Trail重组质粒联合电离辐射对MCF-7细胞杀伤效应的实验研究

目的研究p Egr1-Trail重组质粒联合电离辐射对MCF-7细胞的杀伤效应,为增强肿瘤放疗效果提供实验证据.方法应用Annexin V-EGFP/PI双染法检测细胞凋亡;应用酶标仪检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期.结果不同处理组作用MCF-7细胞后24 h、不同剂量X射线照射后24 h后,各处理组MCF-7细胞的生长抑制率呈上升态势,生长抑制由弱到强的顺序为:2.0 Gy,p Egr1-Trail+0.5 Gy,5.0 Gy,p Egr1-Trail+1.0 Gy,p Egr1-Trail+2.0 Gy,Egr1-Trail+5.0 Gy.各处理组联合2.0 Gy X射线照射后6 h,细胞凋亡率开始上升,48 h达高峰,其中p Egr1-Trail+2.0 Gy组与其他各处理组比较差异具有统计学意义,且细胞凋亡最为显著(P0.05).在细胞周期方面,2.0 Gy X射线照后6 h各处理组S期细胞百分数呈现上升趋势,24 h达高峰;照后24 h,G_2+M期细胞百分数开始上升,且各处理组比较差异均具有统计学意义(P0.05);照后48 h,G_2+M期细胞百分数达到最高,依旧是p Egr1-Trail+2.0 Gy组上升最显著.结论 p Egr1-Trail重组质粒联合电离辐射作用于肿瘤细胞表现出协同杀伤效应,促凋亡作用强于单独X射照射组或p Egr1-Trail基因干预组.     

ICR小鼠体内染色体畸变试验的优化

目的 使用ICR小鼠开展体内染色体畸变实验,通过在不同时间点给予环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)及秋水仙素(colchicine,COL),对比不同给药/取材时间点及不同给药浓度对小鼠骨髓细胞染色体畸变发生率的影响。方法 共36只约7～8周龄ICR雄性小鼠首先随机分为药后18 h取材组和给药后24 h取材组,再下设COL 4 mg/kg体质量(取材前4 h,i.p.)和10 mg/kg(取材前2 h,i.p.)给药组,以0.9% 氯化钠注射液为溶媒对照,分别给予CP 0 mg/kg、10 mg/kg和40 mg/kg,每小组各3只动物。记录实验期间给药前后动物体质量。阴性对照组和10 mg/kg CP组间隔24 h分两次给药,40 mg/kg CP为单次给药。给药后18 h或24 h取材,取材前2 h或4 h分别腹腔注射COL。取材时摘取全部实验动物双侧股骨,收集骨髓细胞悬液制备Giemsa染色体标本用于分析染色体畸变类型,并计算每组平均结构畸变细胞率(不含ctg及csg,AC%)、结构畸变细胞率(含ctg及csg,ACG%)、多畸变细胞率(不含ctg及csg,MAC%)及多倍体细胞率(PC%)。结果 本研究所用CP和COL对动物体质量无明显影响,给药剂量和给药频率可行。与各小组内的溶媒对照组相比,所有CP给药组的AC%、AGC%和MAC%均显著性升高(P<0.01),且给药剂量高时染色体损伤更为严重;CP18 h-COL4h组的AC%、ACG%和MAC%均低于CP18 h-COL2h组,并存在显著性差异(P<0.05),提示使用高剂量的COL(10 mg/kg)可产生额外的染色体损伤。溶媒对照组中的结构性畸变类型绝大多数为裂隙,而染色体单体及染色体断裂是CP引起的最主要畸变类型。结论 开展ICR小鼠染色体畸变试验时,在CP给药后约18 h、COL给药后4 h取材较为理想。本研究通过对试验条件的摸索不但积累了背景数据,也为相关研究者提供借鉴。     

pEgr-Endostatin重组质粒联合电离辐射抗肿瘤效应的实验研究

目的研究pEgr-Endostatin辐射诱导肿瘤的表达特性及其抗肿瘤作用,为提高临床肿瘤放疗疗效提供实验证据.方法 Western blotting法检测pEgr-Endostatin重组质粒联合电离辐射诱导黑色素瘤B16细胞蛋白表达;建立动物模型,用ELISA法检测不同处理组Endostatin的剂量水平,比较不同处理方式的差异.结果 Western blotting法检测结果显示:重组质粒转染的黑色素瘤B16细胞上清中均有Endostatin蛋白表达,而未转染重组质粒的B16细胞和转染空质粒的B16细胞上清中未见Endostatin蛋白表达.ELISA法检测结果表明:体外接受2~10 Gy X射线照射,Endostatin表达水平明显增加,且照射剂量为4 Gy时Endostatin的表达水平最高.2 Gy照射8~72 h后,Endostatin表达水平与假照射组比较明显增加,在48 h时Endostatin表达水平最高.动物实验表明:荷瘤+25 Gy照射组、荷瘤+pEgr-Endostatin照射组、荷瘤+pc DNA3.1+25 Gy照射组和荷瘤+pEgr-Endostatin+25Gy照射组肿瘤生长率显著低于单纯荷瘤组(P0.05#0.01),荷瘤+pEgr-Endostatin+25 Gy照射组亦明显低于荷瘤+25 Gy照射组和荷瘤+pEgr-Endostatin组(P0.05#0.01).结论 pEgr-Endostatin重组质粒联合电离辐射能使Endostatin蛋白表达增加,从而抑制血管内皮细胞生长、发挥抗肿瘤作用.     

Chromosomal localization of a novel retinoic acid induced geneRA28 and protein distribution of its encoded protein

GeneRA28 is a retinoic acid induced novel gene isolated in our laboratory previously. All-trans retinoic acid (ATRA) was used to induce lung adenocarcinoma cell line GLC-82, andRA28 was obtained by subtractive hybridization. Green fluorescent protein (GFP) has emerged as a unique tool for examining introcellular phenomena in living cells. GFP possesses an intrinsic fluorescence at 488 nm that does not require other co-factors. In this report, an eukaryotic expression plasmid pEGFP-C1-RA28 was constructed and transfected with parental cell line GLC-82 to analyze protein expression and its distribution in living cells. Moreover, radiation hybrid (RH) technique was used to localizeRA28 to the chromosome. The results show that geneRA28 is mapped to the chromosome 19q13.1 region, its encoded protein is distributed on cell membrane. All the results further demonstrate that GFP and RH techniques are accurate, fast, repetitive, and will be powerful methods for investigating the gene and protein localization.     

全颅放疗对大鼠血脑屏障LRP和P—gP表达的影响及临床意义

目的探讨不同剂量放射线对大鼠血脑屏障上肺耐药相关蛋白fLRP）、多药耐药蛋白（P-gp）表达的影响影响及其其临床意义。方法将50只成熟雄性Wister大鼠随机分为5组,分别采用0,10,20,30,40Gy60Coγ／射线进行全脑常规分割外照射,1次,d,2Gy／次,5次／周。于完成预定照射剂量后16h断头取脑,采用免疫组化法检测各组大鼠血脑屏障上LRP和P—gP的表达情况。结果0Gy组LRP和P—gP表达均较强,随着照射剂量的增加,LRP表达呈现逐渐下降趋势,其中20Gy下降最明显,30,40Gy组下降幅度减弱,40Gy时表达最弱。20,30,40Gy组和对照组比较差异有显著性;10Gy组与20,20,30,40Gy组比较差异有显著性;其余各组比较无统计学差异。P—gP的表达也随着照射剂量的增加呈现减弱的趋势,20Gy降低幅度最大,30Gy时达到最低值,40Gy时略增强。对照组分别与20,30,40Gy组相比较,差异有显著性;10Gy组与20,30,40Gy组比较,差异有显著性;其余各组比较无差异。结论一定剂量的放射线作用于大鼠血脑屏障之后,其上的耐药相关蛋白表达均可降低,20Gy时降低最明显,此时配合化疗药物效果最佳。     

抗人胃腺癌细胞株AGS单克隆抗体的制备和初步鉴定

用人胃癌细胞株AGS作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人胃癌细胞mAb,应用间接ELISA法进行筛选,显微操作法进行亚克隆并用琼脂糖双向免疫扩散法鉴定亚类,免疫化学法检测特异性,获得l株分泌抗AGS细胞株的mAb的杂交瘤(命名为1B4).该杂瘤分泌的mAb与人宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株HepG2和正常胎儿肺细胞均为阴性反应,而与AGS细胞呈阳性反应.结果表明,该mAb对AGS细胞株具有一定的特异性,可为胃癌相关抗原的筛选研究提供一定的帮助.