三种PCR引物法制备生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因cDNA探针检测效果的比较

采用正义、反义引物及正义和反义引物双链PCR法制备了生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因的cDNA探针。检测结果表明，三种PCR引物法标记的cDNA探针显色灵敏度均可达到10ps／μL，对目标基因DNA的检测灵敏度可达90ps／μL，但反义引物PCR法标记探针的检测效果要好于正义和反义引物双链PCR法制备的探针；在目标基因DNA浓度一定的情况下，探针的浓度对检测效果的影响并不大；正义、反义引物PCR法制备的探针可不经煮沸变性处理直接使用；用50ng／mL浓度的反义引物PCR法制备的生物素标记cDNA探针可检测到带毒啤酒花叶片和花瓣中的啤酒花潜隐病毒RNA。     

人用单克隆抗体某些鼠源性病毒探针的初步建立和应用

本文报导了用光敏生物素标记的鼠肝炎(MHV)、鼠痘(Ectro)全基因组核酸探针来检测人用单克隆抗体鼠源性病毒的初步应用。同时用间接免疫荧光(IFA),鸡胚绒毛尿囊膜感染试验(CAM),病理包涵体检查。结果是探针法与IFA法均能检测MHV。Ectro通过上述试验均为阴性。     

构建碳点—罗丹明B比率探针检测汞离子污染

双发射比率探针以其优良的抗干扰性能成为近年来荧光探针研究的热点。本文采用微波法合成碳点,并构建了碳点-染料的新型比率探针,可以用于定量检测汞离子(Hg~(2+))污染。该比率探针检测汞离子的线性范围为0.56～5.0μmol·L~(-1),检出限为0.56μmol·L~(-1)。随着汞离子浓度的增加,比率探针体系在紫外灯下的颜色会从紫色逐渐变化为橙色,从而实现汞离子的可视化筛查。实验发现在汞离子检测中,当其他金属离子的浓度为汞离子浓度10倍时,比率探针对汞离子仍有较强的选择性。使用此方法对实际自来水样品进行了检测,自来水中没有检出汞离子;而在自来水的3种浓度汞离子加标回收实验中,加标回收率均为91.17%～104.83%.     

胎球蛋白—胶体金探针的制备

本文用柠檬酸钠还原法制备胶体金，以光吸收法和琼脂糖电泳法检测胎球蛋白－胶体金探针的稳定性，为胶体金探针的制备探索最佳条件。实验结果表明：ｐＨ在２～３．５时，探针稳定性较差；ｐＨ在５～１０时，需要较少量胎球蛋白即可获得稳定探针，在电场中也可稳定存在，ｐＨ在６～１０之间探针的电泳行为相似。实验表明，琼脂糖电泳有可望成为鉴定和分离胶体金探针的简易途径。     

利用衍生DNA研制定量检测基因芯片

 为了建立基因芯片定量检测技术体系,在同一张芯片上完成不同浓度DNA的梯度测定,本研究以检测探针序列为基础,合成不同的衍生DNA作为标准曲线测定的探针序列.由于衍生序列与检测探针序列之间不改变碱基配对关系,同时具有相同的PCR扩增序列,使得标准品的浓度与测定值之间具有较好的相关性,从而解决了基因芯片定量测定中的标准曲线制作问题.结果显示,用衍生DNA序列作为标准DNA,其基因芯片测定值与浓度之间的相关性系数达到0.995以上,用此方法建立定量基因芯片测定的浓度与实际浓度一致.本研究为研制定量检测基因芯片提出了新的思路.     

核酸分子杂交检测黄瓜花叶病毒

为检测黄瓜花叶病毒的存在,应用Northernblot,将提取的黄瓜花叶病毒RNA样品,经甲醛变性凝胶电泳分离,使RNA解离成单链,然后用上行毛细管转移法,将凝胶上的单链RNA片段转移到尼龙膜上.经适当洗涤、干燥后,在烤箱中80℃保温2h,用于杂交.以带有黄瓜花叶病毒目的片段的细菌质粒制备DNA探针,用放射性同位素32P标记探针DNA,100℃变性处理用于杂交的探针,然后进行杂交.结果表明,在杂交膜上显示与特异性探针结合的阳性RNA条带,检测到了黄瓜花叶病毒的存在.     

生物素标记核酸探针杂交检测灵敏度的比较研究

用Biotin-11-dUTP进行缺口翻译缺备生物素标记的人β-珠蛋白基因探针并用该探针进行了斑点杂交，硝酸纤维素膜印迹杂交 及琼脂糖凝胶直接染交方法学比较，结果表明：经ABAP法显色后，上述三种杂交法中，DNA最低可检测量依次为5，10，50pg，以斑点杂交法最灵敏。     

一种新的Bola型表面活性剂及其临界胶束浓度的不同方法测定

成功合成了一种以苯丙氨酸为极性头基的新的Bola型表面活性剂——1,12-二苯丙氨酸十二烷(DADPhe),并依次用表面张力法、电导率法和芘荧光探针法测定了1,12-二苯丙氨酸十二烷的临界胶束浓度(CMC),测定结果分别为0.04 mmol·L-1、0.03 mmol·L-1和0.029 8mmol·L-1。实验结果表明,此3种方法的测定值略有不同,其中电导率法和芘荧光探针法的数值相近,而表面张力法所得数值与其他2种方法有微小差异,推测与环境因素有关。进一步分析比较3种实验结果的差异性发现,芘荧光探针法测定的结果更为准确适宜。     

用非同位素标记的pAV 401探针进行分子杂交鉴定马铃薯纺锤块茎类病毒

用Eoehringer Mannheim Biochemica的pAV401探针,以分子杂交的方法鉴定了马铃薯和番茄中的马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTV)。试验表明当用探针浓度为200ng/ml, β-半乳糖苷酶为100 mU/ml,即酶结合物稀释至1:100时,可以测定出提纯PSTV—RNA最低浓度为390pg/斑点,感染PSTV的马铃薯和番茄叶片汁液最高稀释浓度为1:128。样品提取方法试验表明,以酚法教果为最佳。健康马铃薯汁液对提纯PSTV—RNA鉴定效果无明显影响。样品汁液在稀释前予先变性对提高杂交效果无明显作用。本文对Boehringer pAV401探针检测PSTV的灵敏度,所用探针浓度以及显色系统进行了讨论和评价。     

舔针式pH计应用于鹅肉加工在线品质分析

针对目前鹅肉加工企业缺乏pH即时无损检测的现状，试用探针式pH计直接插入测定法及与现行国标法——酸度计电极电位法比较，对20℃和4℃保藏鹅脯肉作序时检测，用SPSS软件析数据的相关性。结果表明探针式pH计测定的数据有效可信，可以克服需取样、浸汁等预处理及耗时较长、成本较高的不足，表明该方法能广泛应用于鹅肉加工在线品质分析，实现无损检测目的。     

食品中单增李氏菌实时荧光PCR检测鉴定方法的建立

运用实时荧光PCR(Real-time PCR)技术建立了对食品中单增李氏菌进行检测的快速方法，设计的引物和探针的序列特异性强，省去凝胶电泳的繁琐，降低了污染的可能性，在对26种病原菌进行检测过程中，运用实时荧光PCR法和经典培养法进行比较，结果表明用实时荧光PCR法检测单核细胞增多李斯特氏菌，更快速、敏感、特异性更高。     

电位型无标记IgG免疫探针

用戊二醛交联法在铂电极上固定IgG抗体 ,制备了可重复使用的电位型无标记IgG免疫探针 .用两种IgG抗体制备的免疫探针 ,响应时间均小于 6min ;对IgG的测定范围分别为 0 .2 0～ 1.2 0 μg·L- 1 和 0 .2 0～ 0 .90 μg·L- 1 ;相关系数分别为 0 .9984和 0 .9977;检测下限小于 0 .2 0 μg·L- 1 .如以 0 .2 5mol·L- 1 脲为再生液 ,探针可重复使用 8次     

等离子鞘层在等离子弧焊中的应用

指出了尾焰电压和等离子云探针检测方法的本质，都是检测电弧的等离子焰，根据等离子体鞘层理论分析，用尾焰电压和等离子云探针检测等离子焰时，在金属检测板或金属探针表面附近将产生鞘层电压，相对于被焊工件为负电压值，鞘层电压与等离子体的温度及等离子体组分有关，动态平衡时，在金属检测板或金属探针表面的负电压值为一常量，可以根据公式计算该电压值，文中提出了一种无源探针检测等离子云的方法，该方法更加证明了等离子焰检测中等离子鞘层理论的重要性。     

LA-PCR法制备赤麂Y2涂染探针与原位杂交

应用显微切割技术获得赤麂的Y2单条染色体,经LA-PCR（linker-adaptor PCR）扩增后用DIG标记制备探针,然后用Southern blot杂交法对所制备的探针进行验证并对毛冠鹿的中期核型进行原位杂交.结果表明：用该法制备的涂染探针是成功的,原位杂交也获得了阳性结果,可以初步验证毛冠鹿中的Y染色体.     

四苯乙烯基荧光探针的合成及对硝基爆炸物的检测

基于四苯乙烯的聚集诱导发光(AIE)性质,设计合成了一种可用于硝基爆炸物检测的荧光探针分子S1.采用核磁氢谱、碳谱和高分辨质谱对其结构进行表征后,以4-硝基苯酚为模型化合物,利用紫外可见分光光度计和荧光光谱仪对S1进行爆炸物检测,结果发现此荧光探针分子S1的检测极限可低达4.59μmol/L.     

探针压力对四探针法测量银薄膜电阻率的影响

本文用四探针法测量了220纳米厚的银薄膜的电阻率,研究了探针压力对银薄膜电阻率的影响。结果表明：随着探针压力从1.47牛顿增大到4.41牛顿,银薄膜的电阻率略微增大,最大探针压力时的电阻率比最小探针压力时的电阻率大约增加了7%。     

纳米金的制备、表征及应用研究

纳米金材料基于其良好的光学和电子学特性,近年来已成为科学家们研究的热点之一。实验以氯金酸为原料,柠檬酸三钠为还原剂,采用经典的柠檬酸三钠还原法制备出纳米金溶液,利用目测法、紫外-可见分光光度法和扫描探针显微镜法对其进行表征,结果表明:纳米金粒子尺寸均匀、呈球形单分散分布。利用自组装单分子膜原理,通过层层组装将纳米金粒子和DNA探针依次固定到玻碳电极表面制备探针电极,利用电化学工作站检测其信号,结果表明纳米金标记DNA探针可显著增强目标DNA的检测信号,提高检测的灵敏度,并使响应电流增强。     

时间分辨荧光法对D-和L-色氨酸的手性识别

本文用时间分辨荧光探针技术实现了不经分离识别D-和L-色氨酸,其中,用灵敏的微环境探针--芘做探针.该法基于BSA与D-和L-色氨酸不同的相互作用,因此,改变了探针的微环境性质如极性和荧光寿命芘在BSA体系中能发射强且稳定的荧光,而D-和L-色氨酸则可对它们发生不同程度的淬灭.基于不同的淬灭速率常数则可达到对D-和L-色氨酸的手性识别.该法简单,快速,样品损耗少,适宜于D-和L-色氨酸的手性识别.同时,也为对映体的识别开辟了一条新的道路.     

醌氧化还原酶检测荧光探针制备及性能

醌氧化还原酶的检测对提高癌症的诊断效果和预测药物的使用情况都十分重要，通过6步反应成功合成了一种用于醌氧化还原酶检测的荧光探针DBD-Q-1,探针由识别基团三甲基对苯醌和荧光团组成，使用核磁共振和高分辨质谱进行表征确定了其结构.随着醌氧化还原酶浓度的增大，荧光探针的荧光逐渐增强.在此过程中荧光探针DBD-Q-1结构中的三甲基对苯醌部分脱去形成内酯结构，从而导致探针荧光增强.当向其中加入其他生命相关物质时，荧光探针的荧光并没有明显改变，探针表现出对醌氧化还原酶良好的选择性.荧光探针DBD-Q-1在细胞中展现出了对醌氧化还原酶良好的成像效果.     

玉米精细胞质膜特异糖蛋白胶体金免疫定位

用亲和层析,SDS-PAGE及印迹技术,从玉米精细胞中分离纯化质膜蛋白。用ConA-HRP检测获得分子量为37和39kD两种糖蛋白特异成分。用它们分别免疫小鼠得到多克隆抗体,以兔抗鼠IgG胶体金(15nm)为探针,检查此两种蛋白在精细胞质膜上的分布。免疫定位表明,37kD, 39kD多肽是玉米精细胞质膜所特异的。有关此多肽的功能有待进一步研究。