正常人和不育患者精子表面凝集素受体的研究

应用4种凝集素和经过FITC标记后分别与正常人或不育患者的精子相互作用,研究其凝集作用和膜上凝集素受体的分布.以铁蛋白或辣根过氧化物酶标记城口豆凝集素后再与精子反应,应用扫描电镜或透射电镜观察了正常人或不育患者精子表面膜受体的分布.     

野花生豆(Crotalaria mucronata)凝集素的细胞表面受体的研究

研究了异硫氰基荧光素和~(125)I标记的野花生豆凝集素,对A型细胞和牛精细胞表面的凝集素受体的定位、分布和数量。结果表明这些细胞表面的凝集素受体比较复杂,难以用一般动力学方法加以说明。D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖和N-乙酰半乳糖胺等糖类和Con A、PHA、BSA对标记凝集素与A型细胞结合的影响各不相同。通过饱和曲线计算出A型细胞和牛精细胞表面的凝集素受体数目,分别为1.29×10~7和3.09×10~6个/细胞.     

荆豆(Ulex europaeus L.)凝集素Ⅰ的细胞表面受体研究

从Ulex europaeus L.种子中纯化的荆豆凝集素I(UEH I),不仅专一地凝集人O型血细胞,也能凝集牛精细胞,表明这些细胞表面存在有UEH I的受体.应用经FITC或~(125)I标记的UEH I与牛精细胞结合,研究受体在精细胞表面的分布;Glc、Con A、PHA和Fuc的浓度对~(125)I-UEH I与O型血细胞结合的影响;O型血细胞和牛精细胞与~(125)I-UEH I的饱和实验,获得饱和结合曲线或竞争性结合曲线,得出各自的Scatchard图,分别计算出O型血细胞和牛精细胞表面的UEH I受体的数目。     

花生凝集素受体在中华绒螯蟹生精细胞的分布

以中华绒螯蟹为材料,应用凝集素印迹法检测中华绒螯蟹生精细胞中的花生凝集素受体.以凝集素组织化学技术为手段,采用生物素标记的花生凝集素对中华绒螯蟹精子发生过程中花生凝集素受体进行了标记,研究精子发生过程中花生凝集素受体的分布特征.结果表明,中华绒螯蟹生精细胞中的花生凝集素受体的分子质量为72 ku;精子发生过程中,不同的生精细胞膜有不同程度的阳性标记.精原细胞质膜上有较强的阳性标记,呈深棕色;精母细胞的质膜阳性标记减少;精细胞与精母细胞染色程度相似.PNA受体在生精细胞中分布,可能与生殖细胞发育以及生殖细胞之间或者生殖细胞与体细胞之间的信息传递有关.精子质膜、顶体区域也有阳性标记,这可能与精卵识别及结合等受精过程息息相关.     

大豆凝集素的分离纯化及活性鉴定

以D-半乳糖胺为配基、 FF-sepharose 4B为固定相, 制备大豆凝集素亲和层析填料. 分离和纯化大豆中的大豆凝集素蛋白, 测定其纯度、 免疫原性和凝集活性, 并与美国Sigma公司的标准品比较. 结果表明： 每毫升GalN-FF-Sepharose-4B层析填料能结合10 mg大豆凝集素; 纯化获得的大豆凝集素分子量为30 000; SDS-PAGE测定纯度大于98%; Western blot结果为阳性; 1 mg/mL SBA血集效价为1/2^10; 其纯度、 免疫原性和凝集活性等指标与大豆凝集素标准品相同, 与理论值相符.     

胃癌细胞株(SGC)细胞表面凝集素受体性质的研究

研究了温度、反应时间、蛋白水解酶和单糖对凝集素与SGC细胞反应的关系,还测定了几种凝集素对SGC细胞的毒性作用.结果表明:SGC细胞在50℃保温30min后,细胞表面的凝集素受体基本失活;凝集素与SGC细胞在25℃温育90min后,其凝集反应的强度不再增加;SGC细胞经胰蛋白酶和胶原酶处理后,对细胞表面受体的活性影响不大,但经木瓜蛋白酶处理后,则其受体活性全部丧失;Man、Glc、GlcNAc可以抑制SFL对SGC细胞的凝集作用,但几种单糖对SLL与SGC的凝集作用均无明显的抑制作用;LPL、LPL_1和SLL对培养的SGC细胞具细胞毒性作用,当浓度分别为0.5mg/mL、0.1mg/mL、5mg/mL时,就能使细胞坏死.     

棉花凝集素对枯萎病菌的抑制作用与其受体的研究

研究了ＦＩＴＣ或ＨＲＰ标记的棉花凝集与枯萎病菌丝体作用后，在荧光显微镜下或扫描电镜下可以清晰地看到ＦＩＴＣ－凝集素或ＨＲＰ－凝集素－受体复合物在菌丝体上的均匀分布实验表明，纯化的棉花凝集素对棉花枯萎病菌丝体的生长有较强的抑制作用，当凝集素浓度达１５０μｇ／ｍＬ时，可以使枯萎病菌丝体的生长完全停止。     

牛精细胞膜上受体的研究

用9种具有人类血型专一性或无血型专一性的凝集素,对牛精细胞表面膜上的受体进行了研究.各种凝集素的浓度各不相同就能使牛精细胞发生凝集反应.VBL对人或羊或牛精细胞发生凝集反应的最低浓度也不相同.上述凝集素用FITC标记,再与牛精细胞作用,从荧光显微镜下可以看到,各种凝集素在牛精细胞膜上的受体的分布各不相同,显示在膜上各种凝集素有其相对应的各自的受体.     

Phaseolus lunatus Linn vel aff的种子中A型血专一性凝集素的研究

用亲和层析法从Phaseolus lunatus Linn vel aff的种子中纯化出一种对人类A型血专一的凝集素.该凝集素的粗浸提液都只对A型血细胞凝集,而对B、O型绝不凝集.当纯化的凝集素浓度为0.98μg/mL时,即能凝集A型血细胞,GalNAc、对硝基苯酚-β-D-吡喃半乳糖苷能抑制其凝集作用;酚—硫酸法测得凝集素含有3.8％的中性糖;该凝集素是一个促有丝分裂原,其细胞转化为67.9％;它的分子量为56500,有两种亚基,分子量分别为17200和14600.凝集素分子中亮氨酸和缬氨酸含量较高,分别为9.83和9.64,而酸性氨基酸含量远比碱性氨基酸为高.     

凝集素对上皮癌细胞的凝集作用

应用多种凝集素与6种上皮癌细胞株细胞、传代人羊膜胚胎细胞株细胞、正常人足月胚胎羊膜细胞和人A、B、O型血细胞、兔血细胞反应,检测其凝集素反应的程度;并通过荧光标记,测定凝集素受体在上述各型细胞膜上的分布;与此同时,还应用辣根过氧化物酶标记雪山豆凝集素,进行扫描电镜观察辣根过氧化物酶标记的雪山豆凝集素受体复合物在SGC肿瘤细胞表面上的分布情况.     

牛精细胞膜上凝集素受体的分离及其测定方法

应用非离子型去垢剂Brij58增溶牛精细胞获得的膜蛋白,经VBL-Sepharose4B亲和柱层析分离,可获得在PAGE、SDS-PAGE中均呈现单一蛋白带的VBL受体.其亚基分子最为46500d.牛精细胞经Brij58增溶的膜蛋白经用~(125)I标记,再经VBL-Sepharose4B亲和柱层析,也能获得~(125)标记的凝集素受体.经测定,用亲和层析法获得的凝集素受体,保持了原有的生物学活性.     

海芋和尖尾芋凝集素与人正常胃肠粘膜和癌变胃肠粘膜？…

从天南星科植物海芋和尖尾芋的根状茎中纯化的海芋凝集素和尖尾芋凝集素，经用ＦＩＴＣ标记，再与人的正常或癌变胃肠组织的石蜡切片反应，表明癌变胃肠粘膜与正常胃肠粘膜细胞表面的糖复合物有很大差异，致使与ＦＩＴＣ凝集素结合反应的强度也有很不相同。     

象鼻南星(Arisaema elephas S.Buchet)凝集素的分离纯化及部分性质研究

本文用Sepharose 4B交联鸡卵类粘蛋白亲和层析柱,从天南星科植物象鼻南星(Arisaema elephas S.Buchet)中,纯化出一种具有凝集红细胞活性的糖蛋白.分子量约13,500道尔顿;等电点pH4.5;含糖量约10％.测得肽链N-末端为L-丙氨酸,并对其氨基酸组成进行了分析.象鼻南星凝集素(AEL)能选择性地凝集人的O型红细胞,及鸽、兔、小鼠、马和熊猫等动物的红细胞,但不凝集人的其它血型及鱼、蛙、龟等动物的红细胞.AEL具有光淋巴细胞转化的功能.能凝集人和某些动物的精子.通过FITC荧促标记,初步观察了AEL受体性精子表面的分布.     

海芋和尖尾芋凝集素与人正常胃肠粘膜和癌变胃肠粘膜细胞的作用

从天南星科植物海芋和尖尾芋的根状茎中纯化的海芋凝集素和尖尾芋凝集素，经用ＦＩＴＣ标记，再与人的正常或癌变胃肠组织的石蜡切片反应．表明癌变胃肠粘膜与正常胃肠粘膜细胞表面的糖复合物有很大差异，致使与ＦＩＴＣ凝集素结合反应的强度也很不相同．     

化学修饰对川泽泻凝集素生物学活性和构象的影响

用特异性化学修饰和荧光光谱的方法分析川泽泻凝集素(APL)活性位点氨基酸的分布情况.研究结果发现,色氨酸的化学修饰使活性降低80%,统计出每分子APL含有2个色氨酸残基,一个色氨酸位于凝集活性中心,另一个位于分子表面的疏水袋中,与凝集活性无关.精氨酸的化学修饰使活性降低50%,半胱氨酸的化学修饰使活性完全丧失.天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸等化学修饰后凝集活性无明显变化.表明色氨酸、精氨酸和半胱氨酸对凝集素的凝集活性中心的构成起重要作用,天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸等氨基酸位于凝集素的凝集活性中心附近,只是在维持凝集素分子的构象上具有一定的作用.     

17种蕨类植物凝集素的筛选研究

17种蕨类植物叶组织经磷酸缓冲液抽提,硫酸铵沉淀,得到蛋白质提取液,用不同类型的红细胞检测凝集活性,实验结果表明,有12种蕨类植物的提取物中含有凝集素,能凝集一种或多种类型的红细胞,不同种类对红细胞的凝集效应不同,产生凝集作用所需的最低蛋白质浓度相差很大,从0．8μg/ml到1100．0μg/ml,在供试的红细胞中,鸽子红细胞对蕨类植物集素提取物最敏感,某些种类提取物与兔红细胞的凝集活性可分别被1种或多种类型糖类所抑制,多数种类凝集素提取物能够耐高温处理（90－100℃）,这可能与蕨类植物凝集素的某些化学性质有关。     

草菇凝集素提取研究

分别以生理盐水、醋酸溶液和磷酸缓冲液对草菇子实体中凝集素进行抽提,并辅以超声波处理提取草菇凝集素.结果显示:当不使用超声波处理时,以5%的醋酸溶液提取的效果最佳,其提取液的兔红细胞凝集效价为256;当辅以超声波处理(450 W)时,以磷酸缓冲液(0.02 mol/L,pH=7.2)为抽提剂,超声波处理时间30 min的效果最佳,其提取液的兔红细胞凝集效价为1 024.     

波纹巴非蛤幼蛤凝集素活性初步研究

对波纹巴非蛤幼蛤外套膜凝集素活性进行测定,结果认为:该蛤幼蛤外套膜凝集素的凝集效价为23,加乳糖的凝集效价为21～22,加麦芽糖的凝集效价为20,加蔗糖、葡萄糖、木糖的凝集效价均为23。麦芽糖、乳糖都可抑制其凝集素对兔红细胞的凝集作用,且麦芽糖的抑制能力强于乳糖。     

同型巴蜗牛凝集素的凝集活性及影响因素

对同型巴蜗牛(Bradybaena similaris)蛋白腺提取液凝集活性进行测定,初步提取其凝集素并进行部分性质鉴定.结果表明:在同型巴蜗牛的蛋白腺中存在凝集素,具有血球凝集活性,能够凝集9种动物红细胞,其中,对家兔红细胞的凝集活性最高,可达28,不过,其对家兔红细胞的凝集活性明显依赖于Ca2+;在pH值为7.0～8.0的范围内其凝集活性较稳定,保持100%的凝集活力;温度为40℃持续作用10 min后就失去活性;向同型巴蜗牛蛋白腺提取液加入45%的固体硫酸铵使凝集素沉淀,再用不同饱和度的硫酸铵溶液依次对沉淀物进行抽提,抽提物的比活力提高了约2.56倍,总活力回收为20.00%.     

荆豆(Ulex europaeus L.)凝集素Ⅰ的研究

用硫酸铵分级沉淀,当饱和度达40％时,荆豆种子中的荆豆凝集素I就被沉淀出来,再经处理,获得冻干的无盐制剂.当凝集素浓度为7.8μg/mL时,就能凝集人O型血细胞,浓度分别为125μg/mL或500μg/mL时,对人B或A型血发生凝集反应.其凝集O型血的凝集作用可被Fuc所抑制.上述制剂可通过CM—纤维素柱和Sephadex G—200柱2次分子筛过滤而纯化,此纯化的凝集素在PAGE中显示一条蛋白带,浓度为1.25μg/mL时可使O型血和牛精细胞发生凝集反应;浓度为40μg/mL或500μg/mL时,可分别使B型和A型血发生凝集反应.