荆豆(Ulex europaeus L.)凝集素Ⅰ的细胞表面受体研究

从Ulex europaeus L.种子中纯化的荆豆凝集素I(UEH I),不仅专一地凝集人O型血细胞,也能凝集牛精细胞,表明这些细胞表面存在有UEH I的受体.应用经FITC或~(125)I标记的UEH I与牛精细胞结合,研究受体在精细胞表面的分布;Glc、Con A、PHA和Fuc的浓度对~(125)I-UEH I与O型血细胞结合的影响;O型血细胞和牛精细胞与~(125)I-UEH I的饱和实验,获得饱和结合曲线或竞争性结合曲线,得出各自的Scatchard图,分别计算出O型血细胞和牛精细胞表面的UEH I受体的数目。     

牛精细胞膜上受体的研究

用9种具有人类血型专一性或无血型专一性的凝集素,对牛精细胞表面膜上的受体进行了研究.各种凝集素的浓度各不相同就能使牛精细胞发生凝集反应.VBL对人或羊或牛精细胞发生凝集反应的最低浓度也不相同.上述凝集素用FITC标记,再与牛精细胞作用,从荧光显微镜下可以看到,各种凝集素在牛精细胞膜上的受体的分布各不相同,显示在膜上各种凝集素有其相对应的各自的受体.     

牛精细胞膜上凝集素受体的分离及其测定方法

应用非离子型去垢剂Brij58增溶牛精细胞获得的膜蛋白,经VBL-Sepharose4B亲和柱层析分离,可获得在PAGE、SDS-PAGE中均呈现单一蛋白带的VBL受体.其亚基分子最为46500d.牛精细胞经Brij58增溶的膜蛋白经用~(125)I标记,再经VBL-Sepharose4B亲和柱层析,也能获得~(125)标记的凝集素受体.经测定,用亲和层析法获得的凝集素受体,保持了原有的生物学活性.     

凝集素对上皮癌细胞的凝集作用

应用多种凝集素与6种上皮癌细胞株细胞、传代人羊膜胚胎细胞株细胞、正常人足月胚胎羊膜细胞和人A、B、O型血细胞、兔血细胞反应,检测其凝集素反应的程度;并通过荧光标记,测定凝集素受体在上述各型细胞膜上的分布;与此同时,还应用辣根过氧化物酶标记雪山豆凝集素,进行扫描电镜观察辣根过氧化物酶标记的雪山豆凝集素受体复合物在SGC肿瘤细胞表面上的分布情况.     

花生凝集素受体在中华绒螯蟹生精细胞的分布

以中华绒螯蟹为材料,应用凝集素印迹法检测中华绒螯蟹生精细胞中的花生凝集素受体.以凝集素组织化学技术为手段,采用生物素标记的花生凝集素对中华绒螯蟹精子发生过程中花生凝集素受体进行了标记,研究精子发生过程中花生凝集素受体的分布特征.结果表明,中华绒螯蟹生精细胞中的花生凝集素受体的分子质量为72 ku;精子发生过程中,不同的生精细胞膜有不同程度的阳性标记.精原细胞质膜上有较强的阳性标记,呈深棕色;精母细胞的质膜阳性标记减少;精细胞与精母细胞染色程度相似.PNA受体在生精细胞中分布,可能与生殖细胞发育以及生殖细胞之间或者生殖细胞与体细胞之间的信息传递有关.精子质膜、顶体区域也有阳性标记,这可能与精卵识别及结合等受精过程息息相关.     

人精细胞膜表面白附子凝集素受体的研究

从天南星科犁头尖属白附子和块基中(?)化的白附子凝集素能凝集人精细胞,起凝时凝集类型以尾对尾居多,完全凝集后或为混合型。用FITC标记白附子凝集素,其F/P为1.0,与人精细胞受体的结合表明该受体分布较均匀,以顶体区域较多。用氯胺T法标记~(125)I—白附子凝集素,其比放射性为1 .9微居里/微克,与人精伯胞膜受体的结合呈S型饱和曲线,Scatchard plot非线性,提示受体之间可能存在协同效应。以饱和分析法计算人精细胞膜表面受体的结合位点数为4.1×10_7。     

中华大蟾蜍蝌蚪发生类坏死的皮肤在恢复过程中Con A受体的变化研究

本研究以中华大蟾蜍后肢芽期的蝌蚪为材料,以0.001/molL 氨水处理皮肤使之发生类坏死.运用荧光标记的凝集素刀豆球蛋白 A(Con A)结合半薄切片技术观察了皮肤发生类坏死后恢复过程中 Con A 受体的变化.结果发现:正常皮肤表面细胞质膜下,细胞质和基膜中有一些Con A 受体分布.经类坏死处理后,表面细胞内出现了一层团块状分布的 Con A 受体,基底细胞膨大,一类膨大的细胞中仅细胞核和质膜上有 Con A 受体分布,另一类细胞中核和质均有 Con A受体分布.类坏死处理后1h,表面细胞内团块状分布的 Con A 受体变成小颗粒排列在质膜下,表皮细胞质中 Con A 受体较多,基膜中也出现较多的 Con A 受体;类坏死处理3h 表面细胞,基底细胞和基膜中 GonA 受体的分布和1h 的相似:类坏无处理后5h,Con A 受体逐渐减少并恢复正常.结果表明,生发类坏死的皮肤在恢复过程中 Con A 受体对保持结构的完整性及正常的生理功能具有重要的意义.     

胃癌细胞株(SGC)细胞表面凝集素受体性质的研究

研究了温度、反应时间、蛋白水解酶和单糖对凝集素与SGC细胞反应的关系,还测定了几种凝集素对SGC细胞的毒性作用.结果表明:SGC细胞在50℃保温30min后,细胞表面的凝集素受体基本失活;凝集素与SGC细胞在25℃温育90min后,其凝集反应的强度不再增加;SGC细胞经胰蛋白酶和胶原酶处理后,对细胞表面受体的活性影响不大,但经木瓜蛋白酶处理后,则其受体活性全部丧失;Man、Glc、GlcNAc可以抑制SFL对SGC细胞的凝集作用,但几种单糖对SLL与SGC的凝集作用均无明显的抑制作用;LPL、LPL_1和SLL对培养的SGC细胞具细胞毒性作用,当浓度分别为0.5mg/mL、0.1mg/mL、5mg/mL时,就能使细胞坏死.     

动物精子发生及成熟过程中凝集素受体的分布与变化

对各种动物精子发生与成熟过程中生精细胞表面凝集素受体的变化做了综述 .精子发生过程伴随着不同凝集素受体的出现和变化 ,这些受体是由生精细胞自身合成的 ;精子在成熟过程中 ,质膜凝集素受体的合成、修饰及分布会进一步发生变化 ,这些变化与精子获得与卵子进行识别、粘附、结合等受精能力密切相关 .     

正常胃肠和癌变胃肠粘膜凝集素受体的研究

ＦＩＴＣ标记的２０种凝集素与正常和癌变胃肠组织的石蜡切片进行标记，结果表明，ＦＩＴＣ－ＰＮＡ和ＦＩＴＣ－ＬＰＬ对正常胃体和幽门上皮细胞呈阴性反应；ＦＩＴＣ－凝集素与胃癌粘膜细胞反应，以ＰＮＡ、ＬＰＬ阳性率最高，与肠癌粘膜细胞反应，则以ＳＭＬ和ＣＫＬ的阳性率最高。实验揭示了癌变胃肠粘膜与正常胃肠粘膜表面的糖复合物各不相同，导致与凝集素结合反应的强度也不相同。     

利用低强度脉冲电磁场对家猪精子电穿孔的研究

用低强度脉冲电磁场对家猪精子细胞进行电击处理，发现台盼蓝染料能够进入细胞，而且通过扫描电镜可以观察到细胞膜表面有明显的孔洞。这证实了低强度瞬态电磁场能够引起猪精子细胞电穿孔和促使外源物质进入细胞内。     

野花生豆凝集素半胱氨酸残基的研究

将野花生豆经浸取、硫酸铵分级沉淀、猪胃粘蛋白-Sepharose4B亲和层析和SephacrylS-200HR分子筛层析后,可得到对人类A型血专一凝集的野花生豆凝集素（Crotalaria mucronata Lectin,CML),纯化的CML在PAGE和SDS-PAGE中均显示单一蛋白带,在含8mol/L,脲和不含脲的缓冲体系中,分别用NEM修饰CML中的半胱氨酸残基,经计算被修饰巯基数目分别为3.1个和3.2个,且修饰后的CML的活性仍不丧失,通过NR/R单向SDS-PAGE和NR/R双向对角线SDS-PAGE研究,发现CML不含二硫键,表明CML中的半胱氨酸残基既与CML的凝集活性无关,也不形成稳定蛋白质结构的二硫键。     

牦牛SRY和TRO基因部分序列克隆与测序分析

对牦牛SRY和TRO的部分基因克隆和序列分析,以期为牦牛X精子和Y精子鉴定、性染色体的基因定位以及分子标记辅助选择研究提供理论依据.从牦牛和西门塔尔牛冷冻精液中提取DNA,用特定引物对SRY、TRO基因部分序列进行扩增并进行TA克隆和测序.结果表明,这两个基因区域在牛种中有极高的保守性,牦牛与普通牛SRY和TRO基因这两个区域的核酸同源性分别高达99.08%和99.39%.     

Complementarity between sperm surface beta-1,4-galactosyltransferase and egg-coat ZP3 mediates sperm-egg binding.

Despite its importance, the molecular basis of mammalian gamete recognition has remained unclear. The enzyme beta-1,4-galactosyltransferase (Gal-transferase) has been viewed traditionally as a biosynthetic component of the Golgi complex, but is also found on the surface of many cells where it can bind its specific glycoside substrate on adjacent cell surfaces or in the extracellular matrix. In mouse it has been suggested that Gal-transferase on the sperm head mediates fertilization by binding oligosaccharide residues in the egg coat, or zona pellucida, and that the ability of the zona pellucida to bind sperm is conferred by oligosaccharides of the ZP3 glycoprotein. However, it has not been confirmed that Gal-transferase and ZP3 are in fact complementary gamete receptors whose interaction mediates sperm-egg binding. Here we show that mouse sperm Gal-transferase specifically recognizes those oligosaccharides on ZP3 that have sperm-binding activity, but does not interact with other zona pellucida glycoproteins. In contrast, all zona pellucida glycoproteins are recognized by non-sperm Gal-transferase, demonstrating a more stringent substrate specificity for the sperm enzyme. This interaction is required for sperm-egg binding because blocking or removing the binding site for Gal-transferase on ZP3 inhibits its ability to bind sperm. After the release of the sperm acrosome, the transferase relocalizes to a new membrane domain where it can no longer bind to ZP3, which is consistent with the inability of acrosome-reacted sperm to bind ZP3 or to initiate binding to the zona pellucida. Following fertilization, ZP3 is modified by egg cortical granule secretions so that it loses sperm receptor activity, which can be accounted for by a selective loss of its binding site for sperm Gal-transferase. These results show that sperm surface beta-1,4-galactosyltransferase and the egg-coat glycoprotein ZP3 are complementary adhesion molecules that mediate primary gamete binding in the mouse.     

Reduced vas deferens contraction and male infertility in mice lacking P2X1 receptors

P2X1 receptors for ATP are ligand-gated cation channels, present on many excitable cells including vas deferens smooth muscle cells. A substantial component of the contractile response of the vas deferens to sympathetic nerve stimulation, which propels sperm into the ejaculate, is mediated through P2X receptors. Here we show that male fertility is reduced by approximately 90% in mice with a targeted deletion of the P2X1 receptor gene. Male mice copulate normally--reduced fertility results from a reduction of sperm in the ejaculate and not from sperm dysfunction. Female mice and heterozygote mice are unaffected. In P2X1-receptor-deficient mice, contraction of the vas deferens to sympathetic nerve stimulation is reduced by up to 60% and responses to P2X receptor agonists are abolished. These results show that P2X1 receptors are essential for normal male reproductive function and suggest that the development of selective P2X1 receptor antagonists may provide an effective non-hormonal male contraceptive pill. Also, agents that potentiate the actions of ATP at P2X1 receptors may be useful in the treatment of male infertility.     

白蜡虫雄性生殖系统的构造及其发育的初步研究

报道了白蜡虫雄虫的生殖系统的构造及其发育情况.     

雷公藤多苷致大鼠精子畸形初步研究

目的 采用雷公藤(Tripterygium wilfordii)多苷灌胃造模,分析大鼠精子异常形态,详细描述大鼠精子异常形态类型,为研究大鼠精子畸形提供参考.方法 雄性成年SD大鼠,雷公藤多苷剂量为30 mg/kg灌胃,给药4周及8周后,分别取大鼠附睾精子,用Diff-Quik染色法,在光镜下行精子形态分析.结果 (1...