东北龙胆地上、地下器官成分积累规律研究

研究龙胆地上器官和地下器官成分积累相关规律 .采用高效液相法 .地下器官中 ,龙胆苦甙含量高于当药苦甙含量 ;而地上器官中当药苦甙含量高于龙胆苦甙含量 .茎中龙胆苦甙含量降低时 ,叶中含量升高 ;当茎中龙胆苦甙含量升高时 ,叶和花中龙胆苦甙含量降低 .同时 ,茎和根中龙胆苦甙和当药苦甙基本上同步上升 ,也同步下降 .可能存在着花期时有效成分向上输送 ,而花期后有效成分向下输送的趋势     

龙胆毛状根的诱导培养

发根农杆菌（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）Ｒ１５００感染龙胆茎段、叶片外植体，１５ｄ后可诱导出毛状根。茎段诱导率高于叶片，可达４２．３％。毛状根的诱导与温度和光照有关。转化根具有抗卡那霉素的特征，在不含激素的ＭＳ培养基上培养，筛选出了生长正常的毛状根系。     

祁连龙胆愈伤组织和再生植株的生长及其两种药效成分分析

通过不同激素组合的培养基筛选出祁连龙胆（Gentiana Przewalskii Maxim.）的快速生长细胞系并获得再生植株. 采用反相高效液相色谱法测定愈伤组织及其再生植株中獐牙菜苦甙（Swertiamarin）、龙胆苦甙(Gentiopicroside)的含量. 结果表明：(1）祁连龙胆愈伤组织在不同培养基上诱导率和生长速度不同，在MS+2?mg/L 2,4 D +1?mg/L 6 BA +6?mg/L GA的培养基上诱导率最高，达78.0％. 在MS+3?mg/L 2,4 D +0.5?mg/L KT的培养基上生长最快，增殖倍数达到7.18； (2）祁连龙胆愈伤组织及其再生植株有效成分及含量与原植株相比均有差别，其中，愈伤组织含有0.265%的龙胆苦甙，低于原植株(4.225%)，再生植株含有0.279%的獐牙菜苦甙和1.579%的龙胆苦甙，前者高于原植株（0.260％），但后者略有下降. 按生长速度推算，愈伤组织及其再生植株积累的药效成分含量明显高于原植株，值得进一步开发利用.     

三花龙胆地上、地下器官成分积累规律研究

研究三花龙胆地上器官、地下器官中龙胆苦苷的积累相关规律．采用甲醇超声波提取和高效液相色谱法分析．7月份以前根、茎、叶中龙胆苦苷的含量逐渐上升;7到8月份,根中龙胆苦苷的含量逐渐降低,茎、叶中龙胆苦苷的含量逐渐升高;8到9月份,叶、花中龙胆苦苷的含量逐渐降低,根茎中龙胆苦苷的含量逐渐升高．以上变化可能与生长期及花期有关：生长期有效成分的含量逐渐于高,花期时有效成分向上输送,花期后有效成分向下输送．     

不同方法对龙胆中地上部分有效成分的含量测定

对龙胆各部分中龙胆苦甙含量测定的方法进行了研究,主要比较了双波长薄层扫描法和高效液相色谱法,同时对各种提取条件进行了比较.结果表明,龙胆苦甙的提取条件,以甲醇温浸5 h为佳.高效液相色谱法进行含量测定为最适宜.     

红豆杉细胞植板方法的研究

在红豆杉细胞植板中、适宜的培养基是优化的ＭＳ培养基,其中ＮＡＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ,６ＢＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ,培养细胞生长周期为４０ｄ;培养在中最优碳源浓度是：蔗糖３０ｇ／Ｌ,葡萄糖１０ｇ／Ｌ,无机盐最佳浓度是：ＮＨ＾＋４１０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＮＬ＾－３４０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＰＯ＾３－４１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ。研究表明,培养基的ｐＨ值与植板率在。氨基酸及维生素等有机成分能明显促进细胞生长。     

红豆杉细胞植板方法的研究

在红豆杉细胞植板中,适宜的培养基是优化的ＭＳ培养基,其中ＮＡＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ,６ＢＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ;培养细胞生长周期约４０ｄ;培养基中最优碳源浓度是：蔗糖３０ｇ／Ｌ、葡萄糖１０ｇ／Ｌ．无机盐最佳浓度是：ＮＨ＋４１０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＮＯ－３４０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＰＯ３－４１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ．研究表明,培养基的ｐＨ值与植板率密切相关．氨基酸及维生素等有机成分能明显促进细胞生长．来自细胞悬浮培养物的条件培养基能显著地促进红豆杉培养细胞的单细胞在低密度植板时的克隆形成     

龙胆汤配伍过程中化学成分的定性定量研究

目的通过定量测定秦艽、龙胆及龙胆汤中龙胆苦苷的含量,并定性比较其他化学成分,以此来揭示复方配伍过程中化学成分的变化。方法用蒸馏水煎煮提取秦艽、龙胆、升麻、龙胆汤及龙胆和秦艽混合物中的成分,用HPLC法测定各个样品中龙胆苦苷的含量及其他成分相对于龙胆苦苷的变化,并对各个样品的龙胆苦苷进行定量比较。结果龙胆和秦艽混合煎液中龙胆苦苷的含量降低了,而且产生了一些新的成分,是单个龙胆和单个秦艽煎液中所没有的,同时也伴随着单味药煎液中成分的消失。加入升麻组成龙胆汤后其化学成分也有质和量的变化。结论复方龙胆汤在配伍过程中其化学成分不但有量的变化,也有质的变化。这可能就是复方和其组成的单味药之间药理作用有异的原因。     

坚龙胆不同部位中龙胆苦苷的含量比较

目的：测定坚龙胆不同部位龙胆苦苷的含量,并评价坚龙胆药材不同部位的质量。方法：采用HPLC法,色谱条件为Agilent ZORBAX SB C18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）,流动相为甲醇∶水（27∶73）,检测波长274nm,流速1.0ml/min,柱温25℃。结果：测定了坚龙胆药材不同部位中龙胆苦苷的含量。龙胆苦苷在0.21～10.5μg范围内线性关系良好,r值为0.999 8,龙胆苦苷平均回收率为98.01%,RSD为2.50%。结论：坚龙胆药材不同部位龙胆苦苷含量均高于《中国药典》2005年版要求,表明坚龙胆全草均可入药。     

甘薯毛状根植株再生研究

用发根农杆菌Ｒ１０００菌株感梁甘薯（渝薯３４品种）,获得转化毛状根,从毛状根中选择出了５个无性系,当毛状根培养在含有２ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋１ｍｏｌ／Ｌ玉米素的ＭＳ培养基上诱导出了愈伤组织,当愈伤组织培养在含有１ｍｇ／ＬＫＴ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．５ｍｇ／ＬＩＡＡ的培养基上,３周以后获得了再生植株,用随机及增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分子标记检测出了再生植株的多态笥。     

外界因子对粘毛黄芩毛状根生长和黄酮类化合物合成的影响

目的:研究不同外界因子对粘毛黄芩毛状根生长和黄酮类化合物合成的影响.方法:研究不同基本培养基、pH值、碳源及激素对粘毛黄芩毛状根生长和黄酮类化合物合成的影响.结果:30g.L-1蔗糖、pH 5.8的1/2MS培养基最适合毛状根生长,但黄酮类化合物合成最高时pH值为6.4.外源激素NAA、GA对毛状根的生长有促进作用,GA效果最为明显.结论:初步优化了粘毛黄芩毛状根的培养条件,为实现粘毛黄芩黄酮类化合物大规模生产奠定了基础.     

Ri质粒转化牛膝及其发状根的培养

用发根农杆菌的Ｒｉ质粒转化药用植物牛膝，诱导出了抗卡那霉素的发状根。将诱导的发状根进行固体平板培养和液体悬浮培养。在附加Ｋｍ３０ｍｇ／Ｌ的ＭＳｏ和１／２ＭＳｏ培养基上，发状根生长良好，而未经转化的对照组则死亡，表现出生激素自主性。在附中外源激素ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ时，能促进发状根的成活，侧根的形成以及提高增殖倍数。表明适量的外源激素能促进发状根的生长。     

乳酸菌USTB--08的高效培养和生产乳酸

在成功筛选出一株高产乳酸的乳酸菌USTB--08基础上,分别采用批量和补料发酵培养,通过改变碳源、氮源、碳氮比、温度和pH值等研究了乳酸菌USTB--08生长和产乳酸的优化控制条件.采用蔗糖和酵母膏作为唯一碳源和氮源（碳氮质量比为5∶1）、温度35℃、接种量1.0%及初始pH 6.50是提高乳酸菌生长的优化参数.进一步在50L全自控发酵罐中,采用质量分数为10%氢氧化钠和25%蔗糖混合溶液作为控制pH值和碳源补料的流加液,在pH 6.00～7.00范围内,恒定控制pH 6.50获得了最大的乳酸菌生物量（OD680nm 13.2）,而恒定控制pH 7.00则获得了最高的乳酸含量（28.0 g.L-1）.本研究首次采用控制pH值与流加蔗糖同步进行的培养方式,获得了高细胞浓度的乳酸菌和高质量浓度的乳酸.     

盾叶薯蓣毛状根的诱导与薯蓣皂甙元的生产

报道盾叶薯蓣形成毛状根诱导的方法及不同毛状根系间生长速率与薯蓣皂甙元含量的差异．结果表明,盾叶薯蓣的幼叶和茎段难被R1601、A4和LBA9402等发根农杆菌菌株诱导出毛状根,但愈伤组织则比较容易;34%的被R1601菌株感染、并在添加200μmol／L乙酰丁香酮的共培养基上培养3d的愈伤可以在30d内形成毛状根;不同的毛状根系在生长速率与薯蓣皂甙元含量方面存在显著差异．     

颠茄发根培养系统的建立

用种子萌发获得颠茄无菌苗,用发根农杆菌A4侵染颠茄无菌苗真叶,所有感染了的叶片都从伤口处产生发根．在无激素培养基中,发根表现出高频侧向分支、生长迅速、失去向地性的典型形态特征．PCR检测表明rolB、rolC确实整合到颠茄发根基因组中,用MS液体培养基发酵培养35 d,3个发根单克隆中发根生物量最大增长率达7．5倍,T6单克隆莨菪碱含量最高(5．61 mg／g),与种植在田间的颠茄植株的根相比,提高7倍;T2单克隆东莨菪碱含量最高,提高9倍多(2．35 mg／ g)．本研究揭示了rol基因足以诱导获得生长迅速和次生代谢产物积累的发根．表明颠茄转基因发根的发酵培养不失为生产托品烷类生物碱的一条好途径．     

地黄花药培养再生植株

把花粉处于单核或双核初期的花药接种在MS培养基上,培养基附加2,4—D0.5mg/l、NAA0.5—1mg/1、6—BA2mg/l、水解乳蛋白500mg/l及蔗糖3％诱导愈伤组织的形成。MS培养基附加6—BA2mg/l、NAA0.5mg/J及蔗糖3％诱导愈伤组织的分化。经过一个阶段的培养再生出地黄小苗。是否为单倍体植株有待组织细胞学工作鉴定。再生植株进行继代培养后,在茎上长出若干不定根,可能为药用植物的品种改良和药物生产提供了一条途径。     

凤尾兰花瓣组织培养初报

将凤尾兰花瓣接种于MS基本培养基上,培养基附加2.4—D0、5mg/l、NAA0.5—1mg/l、6—BA2mg/l、水解乳蛋白500mg/l及蔗糖3％诱导愈伤组织的形成。MS培养基附加6—BA2mg/l,NAA0.5mg/l及蔗糖3％诱导愈伤组织分化。值得注意的是在培养过程中,花瓣小片以及愈伤组织的颜色有几次转变。在愈伤组织上首先分化出小根,逐渐分化出小苗。     

Studies on biological characteristics of ginkgo hairy root culture

The comparative studies on properties of growth and cultivated conditions of seven transformed ginkgo hairy root clones were reported. Different clones display various phenotypes characterized by growth rate. The results show that the suitable inoculum is benefical to the growth of ginkgo hairy root. NH₄ ⁺/NO₃ ⁻, pH, sucrose, and inositol have important effects on the growth of ginkgo hairy root. Foundation item: Supported by China National Center for Biotechnology Development Ministry of Science and Technology Biography: Li Gen-bao(1970-), male, Postgraduate.     

菊各器官的组织培养

菊各器官的离体培养采用MS基本培养基。诱导培养基为MS培养基附加2,4—D1mg/1、6—BA2mg/1、NAAlmg/1或附加6—BA2mg/1、NAA0.5mg/1、LH500 mg/1;分化培养基为MS培养基附加NAA0.5mg/1,6—BA2mg/1,;生根培养基为MS培养基附加IBA2mg/1,将MS培养基中的大量元素减半,附加活性碳200mg/1,对菊花瓣愈伤组织的形成进行了比较实验。所有培养基的蔗糖浓度均为3%,pH5.8～6.0,琼脂为0.7～1.0%。经一段时间的培养,叶叶能再生出完整植株,并且移栽成功;叶柄及茎形成无根小苗;花瓣能再生出根。花序轴、花苞片均有愈伤组织形成;根末形成愈伤组织。