建立实时荧光PCR快速鉴定鸡制品中鸡伤寒沙门氏菌的方法

建立基于Taqman探针实时荧光PCR检测鸡伤寒沙门氏菌(Salmonella gallinarum)的方法.根据GenBank公布的鸡伤寒沙门氏菌基因序列,设计引物和Taqman探针,采用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验.结果表明:特异性引物和探针可从34株鸡伤寒沙门氏菌菌株、26株其他血清型沙门氏菌和7株非沙门氏菌菌株中检测出全部的34株鸡伤寒沙门氏菌.以鸡伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.999,扩增效率为88.2%,最低检测浓度为5cfu/mL.对已接种鸡伤寒沙门氏菌的模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致.该方法特异性好、灵敏度高,是快速鉴定鸡伤寒沙门氏菌的有效方法.     

禽源沙门氏菌不同检测方法的比较及分型研究

本研究采集同一地区三家规模化蛋鸡场的饲料、肛拭子和病死鸡样品共813份,分别采用本实验室改进的环介导等温扩增技术(LAMP)、普通PCR技术以及美国农业部沙门氏菌分离培养标准(USDA MLG 4.05)进行沙门氏菌检测,并对分离株进行血清型鉴定及ERICPCR分型.结果,三种方法均检出沙门氏菌阳性16份,检出率同为1.97%.其中病死鸡、饲料和肛拭子中检出率分别为11.29%、3.03%和1.02%.16株禽源沙门氏菌中有7种血清型,其中12株沙门氏菌ERIC-PCR分型相似性均小于90%.结果表明,本实验室改进的LAMP方法与PCR方法检出率相同,与USDA MLG 4.05的符合率为100%.16株沙门氏菌血清型多样,分子分型的相似度低.     

鸡白痢沙门氏菌直接-多重PCR检测体系的建立

通过对鸡白痢沙门氏菌毒力质粒pSPUV上入侵质粒抗原J蛋白和质粒共转移调控因子的编码基因ipaJ和traJ的序列分析,在特异区域设计PCR引物,经沙门氏菌属不同种及常见肠道致病菌的交叉验证,筛选出三对鸡白痢沙门氏菌特异检测引物ipaJ-417、traJ-387、traJ-476.并且调试出一种利用两种DNA聚合酶的直接三重PCR检测体系:invA-211/traJ-387/16S-495,可以对鸡白痢沙门氏菌进行快速准确的鉴定.     

SPF级实验小鼠4种致病菌多重PCR方法的建立及优化

目的 建立一种可同时检测4种SPF级屏障环境常见致病菌的多重PCR方法。方法 本研究针对鼠伤寒沙门氏菌invA基因、肺炎克雷伯杆菌khe基因、嗜肺巴斯德菌16SrRNA基因、铜绿假单胞菌ecfX基因序列分别设计合成特异性引物,构建可同时鉴别4种菌的多重PCR反应体系,优化后测定其特异性、灵敏性并人工模拟感染样本。结果 建立的4重PCR方法能对同一样品中的4种致病菌模板进行特异性扩增,无交叉反应;对4种目的菌的检测灵敏度为10-3ng/μL;也可从混合感染的病料中特异性地检测出4种致病菌。结论 本试验建立的多重PCR方法具有快速、简便、灵敏的特点,为4种致病菌的快速诊断和监控提供了有效的技术支持。     

我国鸡白痢沙门氏菌病诊断与防治研究概况

鸡白痢沙门氏菌可感染各日龄、不同品种的鸡、其临床症状表现不尽相同、均严重影响鸡的生产性能．细菌学方法仍是不可或缺的诊断手段．随着血清学技术、PCR技术、快速检测试剂盒逐步应用于鸡白痢的检疫之后，对鸡白痢的防制巳跃上了一个新台阶，鸡白痢沙门氏菌的毒力质粒和耐药性研究，为药物、疫苗防治打开了新思路．减毒菌苗、灭活菌苗、脂多糖(LPS)抗原、卵黄抗体、活菌生物制剂、抗生素、磺胺药、中草药、有机酸等措施在鸡白痢的防治中发挥着重要作用。     

应用Tem-PCR技术同时检测3种致病菌的研究

应用靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)技术建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157三种致病菌的高通量简易检测方法.实验分别以沙门氏菌的inv A基因、单核细胞增生李斯特氏菌的hly基因、大肠埃希氏菌O157 rfb E基因为靶基因,设计3对特异性引物,并与通用引物连接组成Tem-PCR引物,通过反应条件优化,建立了TemPCR检测方法.结果表明,建立的Tem-PCR方法特异性强,其检测灵敏度分别为沙门氏菌1.1×103CFU/m L、单核细胞增生李斯特氏菌5.6×102CFU/m L、大肠埃希氏菌O157 2.3×103CFU/m L.方法不需要优化调整各引物对的浓度,易于使用,有效地解决了传统多重PCR方法扩增效率不均衡的问题.     

乳粉中常见致病菌的多重荧光PCR检测

利用多重荧光PCR技术快速检测乳粉中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌.以沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因为靶基因,选择特异性引物,以参照菌种为对象,验证引物的特异性,建立多重荧光PCR检测方法,人工添加沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌,确定方法的检出限.结果表明该方法特异性强、灵敏度高,乳粉中检测的灵敏度为1CFU/mL,可在8h内完成对乳品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌的检测.     

韶关地区鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定

对韶关郊区某些鸡场送检的病鸡进行病理剖检及细菌分离鉴定,确定送检病例30%由鸡白痢沙门氏菌引起,其发病日龄为4~120.从病鸡的心、肝、肠组织等均分离到该菌.药敏试验显示该菌株对呋喃妥因、头孢噻肟和阿米卡星高度敏感.试验结果表明:韶关地区肉仔鸡群鸡白痢沙门氏菌的感染率很高,并已成为严重危害当地养鸡业的重要疾病之一.     

一种快速检测蛋鸡沙门氏菌的方法

为检测蛋鸡泄殖腔拭子中沙门氏菌,在基础培养基BPW的基础上,优化出了培养仅需6 h的选择性增菌液SEM;并根据蛋鸡泄殖腔拭子中的非沙门氏菌干扰菌种类,设计了沙门氏菌特异性检测引物hilAP3.结果表明：1)低数量(1~5 CFU/50mL)沙门氏菌在优化后的一步法选择性增菌液SEM中培养6 h 后,其生长量可达103 CFU/mL 以上,可满足 PCR方法的检测限(102 CFU/mL);2)hilAP3引物能排除蛋鸡泄殖腔拭子中的非目标菌的干扰,特异地检测其中的沙门氏菌;3)建立的SEM增菌6 h与hilAP3特异引物PCR联用的方法检测灵敏度为1~5 CFU/50mL,准确率为100%.因此,该研究中建立的优化增菌液与PCR联用法能在9h内完成沙门氏菌的检测,其灵敏度和特异性高,可应用于蛋鸡场的沙门氏菌检测.     

一起伦敦沙门氏菌食物中毒的实验室检验

目的对一起食物中毒的采集样本进行相关微生物学检验,并应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对检出的菌株进行溯源检测,确定引起食物中毒的病原菌(同源性).方法依据GB4789方法对采集的样品进行病原菌分离、鉴定及药敏试验(K-B法),应用PFGE检测技术对检出的伦敦沙门氏菌进行分子分型,通过BioNumerics软件进行聚类分析.结果所检出5株菌株的生化试验、血清学试验和药敏试验结果一致,PFGE图谱有4株为相同菌株,1株菌株与其他菌株相似率为96%.结论该起食物中毒与伦敦沙门氏菌分离株为相同克隆群,PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究.     

豚鼠沙门氏菌病的诊断

从腹泻豚鼠体内分离到一株革兰氏阴性短小杆菌 ,经生化试验 ,凝集试验等鉴定为肠炎沙门氏菌     

食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立

食品及其原料中沙门氏菌的快速、现场检测对食品安全控制具有重要意义.根据沙门氏菌invA基因核苷酸序列设计一组引物,应用环介导等温扩增技术（LAMP）,分别对7种不同血清型沙门氏菌和4种非沙门氏菌进行扩增,同时建立沙门氏菌人工污染的食品模型,比较了LAMP法与活菌计数检测的敏感性.结果表明,该方法仅对沙门氏菌产生特异性扩增,灵敏度高达336,mL-1,食品样品经细菌富集培养后,检测灵敏度高达8.25,g-1.所建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于沙门氏菌污染食品的快速检测.     

草原毛虫核型多角体病毒的安全性研究 Ⅱ.用Ames法检测核型多角体病毒的致突变性

用Ames法检测了GrNPV的致突变性.实验用常规的点试法,不经代谢活化和经代谢活化的渗入法,和改良的平板渗入法来检测不同剂量的GrNPV对原核生物的致突变性.结果表明,GrNPV对原核生物无诱变作用,无剂量效应关系,从而推测GrNPV对哺乳动物无潜在的致突变性.     

冻猪肉中沙门氏菌的检测与分析

目的:了解兰州市冻猪肉中沙门氏菌污染状况.方法:从农贸市场采集38份冻猪肉馅用不同增菌方法检测沙门氏菌.结果:采用LB+TBG+SC增菌法检测,沙门氏菌检出率约为18.4%(7/38),明显高于BPW+MM增菌法10.6%(4/38).结论:LB+TBG+SC增菌法可提高样品中沙门氏菌的检出率,有利于在杂菌污染严重及沙门菌污染水平非常低的情况下进行沙门菌的检测.不能低估露天农贸市场沙门氏菌食物中毒的危险,应加强食品卫生管理,防止沙门氏菌污染.     

鼠伤寒沙门氏菌集体食物中毒临床报告

目的：对一起集体食物中毒进行检验分析报告。方法：对55例食物中毒者的食用食物、患者及厨师的分泌物进行病原学分析。通过细菌培养,血清学检查鉴定细菌类型。结果：中毒者的食用食物,分泌物均培养出鼠伤寒沙门氏菌。结论：食物污染经消化道传播仍是沙门氏菌属感染的主要途径,注意食品卫生是防止食物中毒的重要环节。     

沙门氏菌rDNA ISR序列测定及特征分析

以细菌ｒＤＮＡＩＳＲ通用经物对鼠伤寒等８种沙门氏菌进行了ＰＣＲ分析，表明在沙门氏菌属的不同菌株中都存在１个比大肠杆菌的Ｌ－ＩＳＲ长几十年碱基对的Ｌ－ＩＳＲ。进一步测定和分析鼠伤寒，纽波特和田纳西３种沙门氏菌Ｌ－ＩＳＲ的全序列，揭示出不同血清型的沙门氏菌具有相似的ｔＲＮＡ基因的间隔区和特征性核苷酸序列。这些特征序列可以作为沙门氏各的分子标志，用于沙门氏菌的分子检验和系统学鉴定。     

牦牛德尔卑沙门氏菌的分离、鉴定及致病性研究

为调查四川省阿坝州红原县牦牛腹泻病因,本课题组从红原县4所养殖场采集牦牛腹泻粪便16份,并对分离株进行多位点序列分型、血清型鉴定、耐药性试验及小鼠致病性试验.结果表明：16份样品共计分离出16株沙门氏菌,均为德尔卑沙门氏菌ST71型,100%菌株对四环素、氨苄西林、氯霉素和头孢噻呋多重耐药;选取腹泻较严重牦牛粪样沙门氏菌分离株（编号15XLR）进行致病性试验,得出分离株15XLR的半致死剂量为1.2×107 CFU,病理切片结果显示小鼠后脾脏、肠道损伤严重.本研究对红原县牦牛腹泻病因进行了调查研究,并证实德尔卑沙门氏菌除感染猪鸡外,其能够入侵牦牛机体,提示牦牛腹泻疾病的防控应注重沙门氏菌的感染以及在牦牛群体中的传播.     

肠炎沙门氏菌2种rDNA 16s—23s基因间隔区序列分析

采用凝胶分离ＰＣＲ产物的方法，对肠炎沙门氏菌中种ｒＤＮＡ１６ｓ－２３ｓ基因间隔区进行克隆和序列分析。肠为沙门氏菌小ｒＤＮＡ１６ｓ－２３ｓ基因间隔区，全长３５４个碱基对，包含１个谷氨酸ｔＲＮＡ基因。大ｒＤＮＡ１６ｓ－２３ｓ基因间隔区，全长５１８个碱基对，其中包含异亮氨酸和丙氨酸２个ｔＲＮＡ基因。它们分别与大肠杆菌的２个ｒＲＮＡ操纵子ｒｒｎＥ和ｒｒｎＨ有较高的序列相似性。肠炎沙门氏菌大ｒＤＮＡ１６ｓ－     

细菌灭蝗剂对原核生物致突变性的研究

按Ａｍｅｓ法的要求，采用常规点试法，与经和不经代谢活化渗入法以及改良的平板渗入法，检测了不同剂量的细菌灭蝗剂对一组组氨酸缺陷型供试菌株的致突变性。结果表明，所用试验剂量的细菌灭蝗剂对供试菌株均无诱发突变作用，从而推测细菌灭蝗剂对哺乳动物无潜在的致突变性。