野生树鼩可培养细菌和真菌携带情况的调查

目的对树鼩携带的可培养微生物群系进行初步调研,为制定树鼩的微生物学等级标准提供依据。方法采集61只野生树鼩呼吸道分泌物、肠道内容物和体表毛发,接种于多种培养基进行细菌分离培养,并进行生化、药敏和16SrRNA测序鉴定。结果在所采集的样品中共分离和检测到可培养的16个科32个属56种细菌及10个属的11种真菌;以肠杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属和支原体属的携带率最高。其中常见病原菌有甲型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、嗜肺巴斯德杆菌、肺炎链球菌、空肠弯曲菌、弗劳地柠檬酸杆菌、鲍氏志贺菌和支原体等。结论树鼩携带细菌和真菌的属种丰富、复杂,存在着多种人兽共患疫病的病原微生物。     

实验动物支气管鲍特杆菌检测能力验证结果与分析

目的 开展2017年能力验证活动,评价国内实验动物检测实验室对支气管鲍特杆菌的检测能力。方法 依据CNAS相关文件,中国食品药品检定研究院作为能力验证提供者,制备含有支气管鲍特杆菌及产气巴斯德杆菌和大肠杆菌为干扰菌的比对样品,提供给参加实验室,要求在规定时限内反馈检测结果及报告。结果 所制备三种样品的平均含菌量均大于1×108CFU/mL,37 ℃加速稳定性时间不少于20 d,符合比对要求。全国共有18个省市的25个实验动物检测实验室参加,均按时反馈结果和报告,满意率88%。结论 本次能力验证为实验动物呼吸道细菌比对项目的进一步开展奠定了基础。大部分参加实验室具备一致可靠的支气管鲍特杆菌检测能力。     

山东省普通级大、小鼠病原体携带状况的初步调查

目的　通过对山东省大部分单位普通级大、小鼠病原体携带状况的调查 ,了解省内实验动物质量情况 ,以利于新国标的宣传和执行。方法　选取省内不同地区、不同单位的普通级大、小鼠 ,按清洁级标准对其所携带细菌病毒进行检测。结果　小鼠肝炎病毒 (MHV)和小鼠仙台病毒 (SV)血清抗体阳性率分别为 11%和 19%。小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 (LCMV)、汉坦病毒 (HV)和鼠痘病毒 (Ect )血清抗体均为阴性。大鼠HV、SV血清抗体均为阴性。细菌检测结果 ,Wistar大鼠支气管鲍特杆菌阳性率为 8 3% ,其余所检项目均为阴性 (支原体、泰泽氏菌未能检测 )。结论　山东省实验动物质量有了明显提高 ,达到了普通级要求 ;但是 ,MHV和SV的存在以及Wistar大鼠支气管鲍特杆菌的隐性感染 ,说明普及清洁级大小鼠是很有必要的     

普通环境长爪沙鼠肠道菌群的分离鉴定

目的调查普通环境长爪沙鼠肠道菌携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学等级标准提供依据。方法对普通饲养环境的65只长爪沙鼠进行解剖,取回盲部内容物接种于6种不同培养基,分离菌株后同时进行生化分析和PCR测序鉴定,以期准确判断分离菌株所属菌属,并分别计算检出率。结果用6种培养基组合进行肠道菌群的分离大大提高了细菌的检出率。本研究共检出37种细菌,不同细菌感染率相差很大,阳性率在1/65（1.5%）到60/65（92.3%）之间,其中部分细菌为大鼠和小鼠致病菌。结论本研究为长爪沙鼠的微生物学等级标准的制定提供了参考数据。     

一种实验动物屏障环境及设施维持性消毒的新方法

目的探讨实验动物屏障环境及设施维持性消毒的新方法。方法用浓度为0.21 mg/m^3的臭氧和1%的84消毒液或0.1%的新洁尔灭对实验动物屏障环境及设施进行维持性消毒;用血琼脂培养基进行落下菌培养,一周后观察血平皿内落下菌的个数。结果经维持性消毒后,屏障环境空气落下菌检测平均为2.1个/血平皿,符合国标关于环境技术指标中沉降菌最大平均浓度的要求。结论该种消毒方法有利于屏障环境微生物的控制,效果明显、操作简便、安全、利于推广。     

啮齿类实验动物唐菖蒲伯克霍尔德菌荧光定量PCR方法的建立及应用

目的 建立用于检测实验动物小鼠中唐菖蒲伯克霍尔德菌的荧光定量PCR方法。方法 参考团标公布的序列合成唐菖蒲伯克霍尔德氏菌引物、探针和质粒，建立荧光PCR方法，并对方法的线性、灵敏度、重复性和特异性等性能进行验证。同时应用建立的荧光PCR方法和细菌培养法对110份小鼠送检样品进行比对检测。结果 建立的唐菖蒲伯克霍尔德菌荧光PCR方法，相关系数R²可达0.998,线性良好；方法最低可检测至1×10² copies/5μL,灵敏度高；方法检测培养的唐菖蒲伯克霍尔德菌为阳性，检测金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、产酸克雷伯杆菌、绿脓杆菌和嗜肺巴斯德杆菌均为阴性，特异性良好。采集110只安乐死小鼠样品，分别进行细菌培养和荧光PCR检测，结果均为阴性，2种方法结果完全符合。结论 建立的荧光PCR方法性能良好，可用于实验动物小鼠唐菖蒲伯克霍尔德菌的检测。     

不同血清型禽霍乱巴氏杆菌免疫的研究Ⅰ.不同方法制备免疫原的免疫保护试验

应用禽多杀性巴氏杆菌C48- 1菌株 (血清型为A∶1 ) ,分别通过接种人工培养基、含动物血液人工培养基、发育禽胚、感染易感鸡等途径 ,获得相应菌培养物后 ,分别制备成灭活免疫原 ,进行了对鸡免疫接种后的感染保护试验。结果初步表明 ,应用接种发育禽胚及感染鸡制备的相应菌培养物 ,其菌体发育及制备免疫原后免疫接种鸡的感染保护效果 ,均优于人工培养基的相应培养物 ,为免疫原的有效制备提供了技术资料及方法     

SPF 小鼠上呼吸道常见细菌的分离鉴定及携带率分析

摘要:目的 对 SPF 小鼠上呼吸道分离到的细菌进行鉴定及携带状况分析。 方法 按常规检测流程进行细菌分离培养、染色、镜检、生化反应、Vitek 2 compact 全自动细菌鉴定。 结果 SPF 小鼠上呼吸道常见细菌有 8 种,按细菌携带率分四类,第一类:毗邻颗粒链菌,携带率 98. 6% ;第二类:松鼠葡萄球菌和木糖葡萄球菌,携带率 45% ~ 65% ;第三类:阴沟肠杆菌、大肠埃希氏菌、奇异变性杆菌,携带率 25% ~ 45% ;第四类:不动杆菌、肺炎克雷伯菌等,携带率10%以下。 结论 用细菌分离培养方法,经 Vitek 2 compact 全自动细菌鉴定得出 SPF 小鼠上呼吸道常见细菌及其携带率。 为 SPF 小鼠群体的微生物质量评估及相关科研项目选择使用 SPF 小鼠时提供支持。     

痛风舒片微生物限度检查方法有效性验证试验研究

以建立痛风舒片的微生物限度检查方法为目的。采用500 r min-1离心5min低速离心沉淀处理供试液与平皿稀释法联用测定细菌数;用平皿稀释法测定霉菌、酵母菌数;采用常规方法进行控制菌大肠埃希菌、大肠菌群检查。结果:样品对白色念珠菌有一定抑菌活性、对黑曲霉未显示抑菌作用;对细菌有较强抗菌活性;采用500r min-1离心5min低速离心沉淀处理供试液与平皿稀释法联用,金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌活菌计数回收均可达到70%以上,并通过3个批号样品细菌计数有效性验证试验说明该法可有效消除药物对试验菌的抗菌作用。结论:建立的方法可有效的控制药品质量,准确可靠。     

初探奶牛溶血性巴氏杆菌的临床诊断和预防及治疗措施

1.病因1.1巴氏杆菌为无芽孢,不运动,兼性厌氧,菌体两端常染色浓重的革兰氏染色阴性小杆菌。因1880年巴斯德氏首先自病鸡分离到本属中的多杀巴氏杆菌而得名。鼠疫杆菌、假结核杆菌、肠道结肠炎杆菌和土拉杆菌原归本属,现前三者改归耶尔森氏菌属,最后一种改归弗朗西斯氏菌属。本属已确定的种有多杀巴氏杆菌、嗜肺巴氏杆菌、溶血巴氏杆菌、尿巴氏杆菌和鸭疫巴氏杆菌等。     

清洁级小鼠感染嗜肺巴氏杆菌情况的初步调查

从１５只患结膜炎、肺炎的小鼠中分离出嗜肺巴氏杆菌１２株。随后对其群体中１０个品系８５只小鼠进行普查,结果感染率最高为ＣＢＡ及ＡＭＭＳ／１３小鼠,达２５％,ＡＢＬＢ／ｃ及ＡＭＭＳ／１也有检出,应引起生产者足够的重视。     

2014—2016年北京地区实验动物质量抽检结果分析

目的 通过对2014—2016年北京地区实验动物微生物、遗传质量抽检结果的回顾总结,为实验动物的生产、管理和检测提供参考。方法 按照国家和地方现行实验动物检测标准,由北京市实验动物管理办公室组织对北京地区具备资质的实验动物生产单位进行抽样,委托检测机构质检并发布报告。依据检测数据,对3年中不同级别大小鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬、猴、小型猪8个品种的实验动物的质量进行评价分析。结果 3年分别抽检动物120、133、130批次,检出不合格批次为16、17、23批。不合格主要因素为兔、犬、猪免疫不达标（49批）,小鼠遗传变异3批,嗜肺巴斯德杆菌阳性1批,豚鼠沙门菌和呼肠孤病毒III型抗体阳性各1批,犬沙门菌阳性1批。结论 实验动物质量监测是其质量管理的重要手段,为动物生产管理提供了科学依据。     

用生物素标记核酸探针检测鼠金黄色葡萄球菌的研究

利用聚合酶链反应技术从金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出 6 78bp耐热核酸酶nuc基因特异性片段 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验的探针 ,对实验动物的金黄色葡萄球菌及其临床样品进行了检测。结果显示 ,标记探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与链球菌、大肠埃希氏菌和巴氏杆菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交的检测灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 2 4 0份临床样品进行了检测 ,检出率为 2 9% (7 2 4 0 ) ,符合率为 10 0 %。这些试验结果表明 ,研究制备的核酸探针及建立的斑点杂交试验具有较高的特异性和敏感性 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测     

多种沙门氏菌分离培养基效果比较及在实验动物和垫料检测中的应用

摘要: 目的改进实验动物沙门氏菌分离培养方法,建立垫料中沙门氏菌检测方法。方法参考国内外沙门氏菌检测方法,用不同分离培养基对沙门氏菌、大肠杆菌和变形杆菌进行培养。选用最佳筛选效果培养基对动物肠道和垫料样品进行检测。结果BPW 预增菌、MKTTn 选择性增菌转种XLT4 培养基分离沙门氏菌的效果优于其他培养基,在1015 份动物样品中检测出3 份沙门氏菌阳性,能够检测出垫料中1CFU/g 的沙门氏菌。结论改进的沙门氏菌分离培养方法检出率高于现有国标方法,结果准确,可用于实验动物沙门氏菌及垫料的检测。     

2014年春季北京地区啮齿类实验动物健康状况的病理学调查和分析

目的 2014年5月本实验室对北京市14家单位的啮齿类实验动物的健康状况进行病理学调查。方法采集啮齿类实验动物的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠后经10%福尔马林固定,通过石蜡切片H.E.染色、冰冻切片油红O染色、PAS染色于显微镜下观察。结果绝大多数实验用鼠为健康状态,仅部分非健康动物出现不同程度的肝细胞肿胀(32.6%)、轻度肺脏病变(24%)、肾脏蛋白样渗出物和管型(13.2%)。本次抽检结果与前两年抽检结果相比较,肝脏脂肪染色阳性率(6.2%)低于2013年春秋季的17.1%和6.25%,以及2012年春秋季的26.7%和14.8%,有降低的趋势。值得引起注意的是,肾脏病变从2010年春季在小鼠(2%)和2011年春季在大鼠(20%)中偶发,发展至今,已经在小鼠(6%)、大鼠(12%)和豚鼠(20%)中普遍存在,从偶发病变发展成为常发病变,应加强防范。结论本次调查结果表明北京地区啮齿类实验动物基本为健康状态,少数动物出现组织病理学变化可能与饲养环境、饲料营养成分以及运输、处死时的应激有关,宜提高饲养管理水平和避免应激来加以改善。     

2013 年昆明地区实验用小鼠及豚鼠寄生虫及病毒感染情况调查

摘要: 目的 分别调查昆明市三家单位提供的共 90 只实验用 ICR 小鼠和 45 只实验用豚鼠的体内、外寄生虫感染 情况,以及小鼠及豚鼠仙台病毒(SeV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、豚鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎(LCMV) 的感染情况, 为实验动物质量管理提供一定的参考依据。方法 根据现行国家标准所描述的方法及病毒检测试剂盒说明书的 说明,对昆明市三家单位随机提供的共 90 只 ICR 小鼠和 45 只豚鼠样本,分别进行体内、外寄生虫、小鼠 MHV 及小 鼠 SeV、豚鼠 LCMV 及豚鼠 SeV 的检测。结果 昆明地区实验用小鼠及实验用豚鼠均检出体内、外寄生虫;3 只小 鼠检测出体外寄生虫,检出率为 3. 3% ;20 只小鼠检测出体内寄生虫卵,检出率为 22. 2% ; 4 只豚鼠检测出体外寄 生虫,检出率为 8. 9% ;9 只豚鼠检测出体内寄生虫卵,检出率为 20. 0% ;小鼠 MHV 及 SeV 血清学检测无阳性; 豚 鼠 LCMV、SeV 血清学检测无阳性。结论 实验动物质量监测是实验动物质量控制的有效手段,对医学及生命科学 的研究至关重要,昆明地区实验动物的寄生虫质量控制有待加强。     

北京地区2008～2011年实验动物绿脓杆菌检测结果与分析

目的了解SPF级实验动物中绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）感染现状和规律,为防止绿脓杆菌感染提供依据。方法参照国家标准,对SPF级小鼠、大鼠、豚鼠和兔进行检测。结果在2008～2011年中检测的SPF级动物中,PA感染的阳性率为8.9%（267/2988）;不同动物感染率无显著差异;不同时间（不同年份和不同季度）PA阳性检出率无显著差异;其中,免疫缺陷动物的PA阳性检出率为32.5%明显高于免疫功能正常动物的7.6%;PA检出率随着送检单位和动物数量的增加逐年升高;不同动物群体间感染率相当,且保持稳定。结论北京地区SPF级实验动物中PA检出率较高,应加强管理。     

甘薯优良品种试管苗培养系的建立

从田间选取甘薯优良品种12份,采用MS基本培养基进行无菌试管苗培养.结果表明,餐具洗涤剂浸泡15min,75%乙醇浸泡30s,再用含吐温20的01%氯化汞溶液浸泡10min的杀菌效果最好.采用快速转移接种除菌法可使外植体污染率大大降低,平均为5%以下.无菌试管苗离体生长特性研究表明,强光有利于试管苗的生长,不同甘薯基因型在相同培养基和相同培养条件下其生长状况存在较大差异.     

XL-HO_1在人和动物细胞培养中的应用

本文报道了9种细胞,在含有不同浓度的XL-HO_1加小牛血清(NBSC)的RPMI-1640培养基(M2-M4)中的生长率,以及这些细胞在仅含有20%NBSC的RPMI-1640培养基(Ml)和仅含有20%XL-HO_1,的RPMI-1640培养基(M5)中的生长率进行比较。实验结果表明:各种细胞在5种培养基(Ml-M5)中的生长率并无显著差异,证明XL-HO_1,和NBSC的效用相同,可作为NBSC的代用品,或者与NBSC配合,作为人和动物细胞培养基的添加成分。