B7-2基因工程抗体的制备及体内外抗B淋巴瘤作用研究

 构建B7-2人-鼠嵌合抗体基因表达质粒pIRES/ch3C8,经脂质体法转染真核表达细胞株CHO制备B7-2人-鼠嵌合抗体（命名为ch3C8）。该抗体能够识别人恶性B淋巴瘤细胞株Raji表面的B7-2分子并诱导其凋亡。ch3C8结构中来源于人Ig 的Fc段可介导高效的ADCC及CDC效应。经ch3C8结合的Raji细胞接种于BALB/c裸鼠后的致瘤性消失。该抗体在 B7-2相关肿瘤的生物治疗中具有潜在的应用价值。     

抗CD71人-鼠嵌合抗体的制备及其诱导肿瘤细胞凋亡

目的 :研究在液氮中冻存 2年的转染瘤细胞株 (D2C)复苏后其分泌抗CD71人 -鼠嵌合抗体的特异性、分泌量及诱导肿瘤细胞凋亡的效应。方法 :用ELISA方法检测转染瘤细胞培养上清的抗体分泌量。经DEAE SephadexA 5 0离子交换法纯化产生的抗体 ,并采用SDS PAGE电泳鉴定 ;台盼蓝拒染法观察其对K5 6 2细胞生存的影响 ;细胞计数和MTT试验测定嵌合抗体及鼠源性抗体对K5 6 2细胞的作用 ;琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察K5 6 2细胞凋亡。结果 :Balb/c裸鼠腹腔接种转染瘤细胞后 ,每只裸鼠腹水量在 3～ 5mL。抗体经纯化 ,产量约为 1～ 2mg/mL腹水。经SDS PAGE电泳鉴定 ,在分子量 5 5kD和 2 7kD处 ,可见有抗体IgG重链和轻链的染色条带。抗CD71嵌合抗体及鼠源性抗CD71抗体均可抑制K5 6 2细胞的增殖作用 ,且二者抑制作用无显著性差异 (P >0 .0 5 )。经琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察分别可见抗体诱导的K5 6 2细胞DNA梯形条带和细胞凋亡的形态改变。结论 :液氮中冻存 2年的转染瘤细胞体外生长良好 ,抗体分泌稳定 ,特异性高 ,并可诱导K5 6 2人红白血病细胞凋亡     

高致病性禽流感病毒广谱嵌合抗体的构建表达及活性研究

高致病性禽流感病毒高度变异且缺乏有效的治疗药物.在前期研究工作中,本课题组发现一株鼠源广谱中和单抗13D4,在动物实验中显示出对H5N1禽流感病毒具有广谱治疗效果.在本研究中,从分泌13D4单克隆抗体的杂交瘤细胞株中抽提总RNA,经RT-PCR扩增出轻重链可变区DNA序列,并分别与人IgG1的轻重链恒定区基因序列拼接,构建人-鼠嵌合抗体.筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO细胞株,从培养上清中纯化出嵌合抗体.竞争Elisa结果表明,嵌合抗体与鼠源单抗能够识别同一个抗原表位并具有相似的亲和力.血凝抑制反应和中和活性测定结果证明,13D4嵌合抗体保留了对不同亚型H5N1病毒的广谱反应性,并且对两株H5N1病毒具有中和活性.本研究获得的13D4嵌合抗体将具有潜在的治疗价值.     

抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备研究

从影响融合率的2个主要因素探讨骨髓瘤细胞系Sp2/0细胞与黄曲霉毒素B_1免疫的脾细胞融合的最佳条件,使融合率达到100%.经筛选和克隆化,获得3株稳定分泌单克隆抗体的细胞株,分别命名为3B3、3H9、5G9.经过鉴定3株均为IgG_1亚类.其中3B3抗体与其他黄曲霉毒素几乎不发生交叉反应,腹水效价为1∶2×10~5,亲和力常数为3.1×10~7 L/mol,竞争性ELISA测出3B3抗体的最低反应浓度为0.05μg/L标准AFB_1样品的的回收率达96%.另外两株腹水抗体水平低,交叉反应强烈,腹水效价仅在1∶10~4数量级.     

抗沙门氏菌O8因子单克隆抗体的研制及初步应用

制备抗沙门氏菌O8因子单克隆抗体,建立C2、C3亚群沙门氏菌酶联免疫吸附分析检测方法.用加热灭活的纽波特沙门氏菌免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合建立分泌抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA法检测及鉴定单克隆抗体,酶联免疫吸附分析法初步判断抗体应用于检测试剂的可能性.得到4株与沙门氏菌C2、C3亚群菌株发生反应的单克隆抗体细胞株,分别命名为6F2、7A2、8D8和8D9;4株抗体与肠道正常细菌和常见的致病细菌无交叉反应;单克隆抗体免疫球蛋白类型分别为小鼠IgG_1、IgG_3、IgG_(2b)、IgM,轻链均为kappa;用单克隆抗体7A2和8D8研制的酶联免疫吸附分析试剂盒,对沙门氏菌C2亚群的纽波特沙门氏菌、波那雷恩沙门氏菌和C3亚群的肯塔基沙门氏菌的最低检出值均可达到10~5cfu/m L.获得的单克隆抗体具有较高的特异性,有可能应用于生产检测C2和C3亚群沙门氏菌的酶联免疫吸附分析试剂盒.     

抗人前列腺素D合成酶嵌合抗体基因的构建

采用RT-PCR技术，从1株稳定分泌抗人L-PGDS单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞中扩增抗体的可变区基因，得2个Vk和1个VH．序列经Igblast比对分析，其中1个VK为鼠骨髓瘤细胞系内固有的无功能基因；另-Vk和VH具备鼠抗体可变区特征，为抗体功能基因．经双酶切，将抗体可变区功能基因分别与表达载体pAG4622、pAH4604中的人IgG相应恒定区相连，构建成抗人L-PGDS的人-鼠嵌合抗体基因。     

人白血病抑制因子（hLIF）单克隆抗体的制备与鉴定

 为了获得抗人白血病抑制因子（hLIF）单克隆抗体,以重组hLIF蛋白为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的小细胞融合、无限稀释法制备了10株杂交瘤的腹水hLIF抗体,并对腹水进行了纯化.腹水粗品抗体经rProteinA一步亲和层析法纯化和鉴定后,抗体分子量都符合抗体的特性,抗体的纯度都达到了96.6%以上,抗体亲和常数在1.89×10-9~1.51×10-12mol/L,其中1B8a、5C1b、5G4a细胞株制备的抗体属于高亲和力抗体,可以对其的应用进行进一步的研究和探讨.     

建立Raji细胞免疫酶抑制法对血清抗HLA—DR抗体的检测

由于Raji细胞表面具有表达HLA-DR抗原特点,利用被测血清中抗HLA-DR抗体与抗人HLA-DR单克隆抗体竞争和Raji细胞表面HLA-DR抗原结合的特征,建立了Raji细胞免疫酶抑制法检测血清中抗HLA-DR抗体的方法。进行了方法学特异性,重复性和实验条件确定研究,并用此方法检测了72例系统性红斑狼疮患者和113例健康者血清。结果显示:该方法特异性强(中性粒细胞无显色反应);重复性好(抗体阳性血清变异率C.V为4.66％,抗体阴性血清C.V为0％);抗体滴度范围1∶5-1∶40。系统性红斑狼疮患者中抗HLA-DR抗体阳性率为30％;而健康阳性率为1.8％。作者认为:用Raji细胞免疫酶抑制法检测血清中抗HLA-DR抗体是一种特异性强,重复性好,操作简便和假阳性率低的方法,这种方法值得推广应用。     

表儿茶素没食子酸酯对人鼻咽癌C666-1细胞凋亡的影响

该文观察ECG在人鼻咽癌细胞株C666-1增殖与凋亡中的作用,并初步探讨其机制.人鼻咽癌C666-1细胞给予不同浓度ECG(0~100μmol/L)处理48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,使用TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达变化.结果表明,25μmol/L以上浓度的ECG可抑制C666-1细胞增殖,诱导细胞凋亡;并且ECG可浓度依赖性增加Bax/Bcl-2蛋白比值和剪切的Caspase 3蛋白水平.以上结果表明ECG可抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖,并诱导细胞凋亡.ECG的作用与其增加Bax/Bcl-2相对蛋白比值进而激活caspase-3有关.     

XCBL及其在B2B电子商务中的应用

介绍了由CommerceOne提出的电子商务的数据交换标准——XCBL(XML Common Business Library).文中对电子商务数据交换标准的发展及XCBL的发展、基本结构模型及其特点进行了介绍.对以XCBL为标准的电子商务数据交换的具体应用进行了探讨,提供了具体的开发模型和开发方法,对XCBL及其发展提出了自已的观点和看法.     

XCBL及其在B2B电子商务中的应用

介绍了由CommerceOne提出的电子商务的数据交换标准———XCBL(XMLCommonBusinessLibrary) .文中对电子商务数据交换标准的发展及XCBL的发展、基本结构模型及其特点进行了介绍 .对以XCBL为标准的电子商务数据交换的具体应用进行了探讨 ,提供了具体的开发模型和开发方法 ,对XCBL及其发展提出了自已的观点和看法     

B_(13)C_2和B_7C_8低压缩性的第一性原理计算研究

采用基于密度泛函理论的第一性原理计算方法,研究了B13C2(B12CBC)中B12二十面体极地位置的所有B原子被C原子取代后材料的性质变化.通过对比计算研究发现,取代后每个B6C6二十面体中赤道原子同赤道原子间、极地原子同极地原子间的电荷密度减小﹑Mulliken布局数由正值变为负值,说明它们由成键态转变为反键态,相互作用减弱;而极地原子同赤道原子间,以及相邻二十面体极地原子间的电荷密度相对增加﹑化学键长变短﹑sp轨道杂化进一步显著,说明它们的相互作用增强.结果造成材料的体弹模量增大、剪切模量减小;材料由半导体性过渡到金属性;电荷密度由B12二十面体相对均匀分布,转为向两极集中局域,而使主要影响材料理论硬度的最弱化学键等的计算硬度减弱、材料的理论硬度减小.     

B2B电子商务交易与经济增长的相关性研究

应用协整关系检验、恩格尔—葛兰杰检验对B2B电子商务交易额与GDP之间的关系进行研究。结果表明:B2B电子商务交易额和GDP之间不存在长期稳定的协整关系,B2B交易是引起GDP增长的原因,但是GDP却不是引起B2B交易额增加的原因,在一定程度上反映了我国B2B电子商务交易起步发展阶段的现状。     

对我国发展的BtoB的理性思考

随着国际上BtoC电子商务模式的降温和BtoB兴起,国内许多企业在没有考虑中国国情的情况下,抛弃BtoC,盲目照搬国外的BtoB模式。BtoB和BtoC两种电子商务模式并非完全割裂。BtoB的发展依赖于国家和企业内部条件的发展和完善。在我国,随着各类条件的成熟,BtoB模式终将发展成为BtoBtoRtoC模式。     

从B^α到B^0和D空间上的复合算子

设φ是单位圆盘D到自身的解析映射,X是D上解析函数构成的Banach空间,对f∈X,定义复合算子CφCφf=f°φ.研究了Bα到B0和D空间上的复合算子的有界性和紧性.     

对我国发展BtoB的理性思考

随着国际上ＢｔｏＢ电子商务模式的降温和ＢｔｏＢ的兴起,国内许多企业在没有考虑中国国情的情况下,抛弃ＢｔｏＢ,盲目照搬国外的ＢｔｏＢ 模式．ＢｔｏＢ和ＢｔｏＢ 两种电子商务模式并非完全割裂,ＢｔｏＢ的发展依赖于国家和企业内部条件的发展和完善．在我国,随着各类条件的成熟,ＢｔｏＢ模式终将发展成为ＢｔｏＢｔｏＲｔｏＣ 模式．     

NF-κB和IκB在膀胱癌中的表达及意义

膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本54例，正常对照标本13例。采用免疫组化SP法研究NF-κB和IκB的表达，分析NF-κB与膀胱癌分级、分期、复发及转移的关系，以及NF-κB和IκB的关系。结果表明，NF-κBBP65和IκBα在54例膀胱癌中的阳性表达率分别为88．9％、87．0％。NF-κB阳性表达率随膀胱移行细胞癌分级、分期的增高有降低趋势，而随复发及转移的增多而增高。因此推论NF-κB可能在膀胱癌早期起促进作用，且有望作为评价膀胱癌恶性度、肿瘤进展的指标。NF-κB与IκB在膀胱癌中的表达具有正相关性。     

Raman spectroscopic study of DNA photodamage sensitized by hypocrellin B and 5-brominated-hypocrellin B

Hypocrellin B (HB) is a highly effective photosensitizer. One of its derivatives, 5-brominated-hypocrellin B (5-Br-HB) has better photosensitive characterlstics than it. Using Raman spectroscopy, the microcosmic photodamage to DNA sensitized by HB and 5-Br-HB was studied at molecular level. The results showed that when HB and 5-Br-HB were added to the solution of DNA and irradiated, the characteristic Raman frequencies and intensities of DNA changed to various degrees. The photodamage occurred on the whole DNA molecule, including phosphate backbone, deoxyribose and four bases. Not only the conformation but also the configuration of DNA was photodamaged: breakage of some H-bonds, disappearance of B-form conformation, scission of double or single strand and serious damage of four bases. The damage to A-T pairs was stronger than that to C-G pairs and DNA became polynucleotides finally. The 5-Br-HB-photosensitized damage to DNA was stronger than HB, which suggested the better photosensitive characteristics of 5-Br-HB in bioactive environment. The molecular mechanisms of photodamage to DNA sensitized by 5-Br-HB and HB were also elucidated.