苏云金芽孢杆菌的杀虫毒素及其增效方略

苏云金芽孢杆菌由于其杀虫的特异性、低成本和环境可降解性而被广泛应用．其作用机制和毒力的增效已经进行了大量研究．本文简介了苏云金杆菌的杀虫毒素的类型和作用机理．为了提高毒素的效力，很多因素包括物理的、化学的方法已经用于毒素的溶解、降解及与昆虫中肠的作用方面；筛选高毒力的新菌株、使用昆虫取食刺激剂和与其他生物共同作用等都能提高苏云金杆菌的杀虫效果．     

提高苏云金芽孢杆菌制剂杀虫效果的策略

苏云金芽孢杆菌制剂是一种主要的生物杀虫剂 ,本文从培育高效菌株、增加昆虫对 Bt的摄入量、化学杀虫剂促进 Bt的杀虫作用、植物次生物质的增效作用、Bt与其杀虫微生物及其代谢产物的协同作用、简单化合物提高 Bt的毒力以及保护 Bt免受紫外光的损伤等方面提高 Bt制剂的杀虫活性进行了论述。     

苏云金杆菌在温室蔬菜害虫防治中的应用

介绍了苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis Berliner)的杀虫机理、分离纯化方法及其在温室蔬菜害虫生物防治中的应用．近年来，温室蔬菜生产中害虫的发生和危害日益严重，化学农药的大量使用，使害虫天敌被大量杀伤，害虫抗药性增强，环境污染加剧，尤其是蔬菜上残留的化学农药直接威胁着人类的健康．苏云金杆菌作为一种高效微生物杀虫剂，在温室蔬菜害虫的生物防治中占有重要的地位．     

海洋来源的苏云金芽孢杆菌h3菌株和昆虫幼虫来源的Ly30对鳞翅目小菜蛾、双翅目家蝇和淡色库蚊、鞘翅目德国小蠊的毒性（英文）

为发现和验证杀虫剂苏云金杆菌(Bt)菌株对目标种类的害虫的毒性,本文用两株菌种(h3和Ly30)对小菜蛾(鳞翅目)、淡色库蚊和家蝇(双翅目)和德国小蠊(鞘翅目)几种害虫进行了毒力检测.其中,菌株h3来源于连云港海水,具有高盐耐受的优点;菌株Ly30分离自连云港市云台山赤松林区自然死亡的膜翅目昆虫日本弓背蚁幼虫体内.杀虫活性实验显示,菌株h3和Ly30具有高效杀虫活力,对小菜蛾(鳞翅目)、淡色库蚊和家蝇(双翅目) 3 d～5 d致死率可达99%～100%,对德国小蠊(鞘翅目) 5 d致死率仅达30%. Bt菌株h3和Ly30对鳞翅目和双翅目害虫的强力杀虫活性及对鞘翅目害虫的毒力,不仅为其在农业、林业领域及公共卫生等方面的应用提供了理论支持.同时也拓展了Bt菌株毒杀害虫种类的研究.此外,具有高盐耐受优势的菌株h3不仅扩大了Bt生物杀虫剂的应用领域,也有利于增加适用对象,提高杀虫功效.     

双菌株发酵生产苏云金杆菌生物杀虫剂的研究

本文研究了苏云金杆菌双菌发酵生产生物杀虫剂的菌种和配方。大田实验表明，双菌株生物杀 虫剂对棉铃虫的杀虫率高达９２％。     

苏云金杆菌优良菌株的快速选育

以伴孢晶体的形态和大小作为初筛指标。杀虫活性和发酵发酵性能作为复筛指标。选育出杀虫效果好，生产性能稳定的苏云金杆菌SD-5菌株。     

应用Bt控制鞘翅目害虫的研究现状

本文主要针对苏云金杆菌对鞘翅目害虫的研究历史过程和应用方面进展进行阐述 ,提出其增效途径和抗性对策。     

苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白基因的克隆、表达及杀虫活性分析

选择本实验室分离的野生型苏云金芽孢杆菌菌株WY-197为出发菌株，用全长PCR方法从此菌株中克隆了2．3kb大小的vip3A基因,DNA序列比较发现所克隆的基因vip3A-197与已知的营养期杀虫蛋白基因存在很高的同源性．将基因vip3A-197亚克隆至原核表达载体pET33b构建了原核表达质粒pEVip，转化大肠杆菌BL21，转化子经IPTG诱导后可表达88kD大小的蛋白．该蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)棉铃虫(Helicoverpa armigera)的初孵幼虫进行生物测定，结果表明，营养期杀虫蛋白vip3A-197对夜蛾科害虫具有一定的杀虫活性。     

苏云金杆菌晶体蛋白Cyt1A对营养期杀虫蛋白Vip3A杀虫毒力的影响

为检测苏云金杆菌晶体蛋白Cyt1A对Vip3A表达和杀虫活性的影响,将p20和cyt1A基因与vip3A基因连接构建了重组质粒pHVC20,然后电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株CryB中进行了共表达,以单独表达Vip3A蛋白的CryB(pHPT3)作为对照菌株。Westernblot结果显示,Vip3A蛋白在CryB(pHVC20)菌株中的最大表达量约为在CryB(pHPT3)菌株的2倍,这可能是由于前者中的辅助蛋白P20增加了Vip3A表达量的缘故,晶体蛋白Cyt1A的存在对Vip3A的正常表达没有影响。生物测定结果表明,CryB(pHVC20)和CryB(pHPT3)菌株对斜纹夜蛾初孵幼虫的LC50值分别为10.62!g/ml和78!g/ml,前者的毒力比后者提高了6倍,这表明Cyt1A蛋白和Vip3A蛋白对目标昆虫的毒力可能存在着协同增效作用。     

病原芽胞杆菌几丁质酶产生菌的筛选与活性鉴定

通过特异引物PCR方法和水解圈活性法对62株苏云金芽胞杆菌菌株、26株蜡状芽胞杆菌菌株及18株球形芽胞杆菌菌株进行了几丁质酶产生菌的筛选.所测苏云金芽胞杆菌中除4株野生型菌株外均为阳性结果,蜡状芽胞杆菌仅1株为阴性结果,球形芽胞杆菌全为阴性结果,且水解圈法观察结果与PCR检测结果一致.在此基础上,通过DNS比色法对几丁质酶产生菌株的几丁质酶比活力也进行了测定.对这些具有致病性的病原芽胞杆菌几丁质酶的研究对于研究其致病机理及对其进行遗传改良具有重要的理论和实际应用价值.     

苏云金芽孢杆菌cry1基因的PCR-RFLP鉴定分析

利用PCR—RFLP技术对含有已知cry1基因的8株标准菌株和2株遗传工程菌进行了基因分析，证实了该方法的可行性．并在此基础上鉴定了分离保藏的70株B．t菌株的cry1型基因，结合SDS—PAGE分析以及室内生物测定结果，讨论了基因型与蛋白表达及毒力之间的关系．     

几丁质酶在苏云金芽孢杆菌中的分布及抑小麦赤霉菌菌株的筛选

利用几丁质平板法和几丁质酶基因特异引物PCR两种方法,对本室保藏的995株苏云金芽孢杆菌的几丁质酶及其基因进行了检测.结果显示所有被检测的菌株都可以在几丁质为唯一碳源的平板上生长.其中93.0%的菌株PCR检测阳性,54.1%的菌株可产生明显的水解圈.证明苏云金芽孢杆菌中几丁质酶普遍存在.通过研究发现Bt几丁质酶活力高低与其血清型及杀虫晶体蛋白基因的类型无相关性.同时对286个菌株进行了抑小麦赤霉菌实验,筛选出19株抑真菌效果较好的苏云金芽孢杆菌.     

几种植物有效成分的提取及杀虫活性研究

对10种植物的有效成分进行了提取,通过对提取物的抑菌试验和杀虫活性试验,筛选出3种较好的Bt菌混剂候选复配植物,还对其中最具开发价值的植物砂地柏进行了不同有机溶剂提取物杀虫活性的比较试验,并确定了石油醚为最佳提取溶剂。     

Expression of two insect-resistant genes crylA ( b&c )/GNA in transgenic tobacco plants results in added protection against both cotton bollworm and aphids

The synthesized Bacillus thuringiensis insecticidal protein gene crylA(b&c) and the synthesized gene GNA, (the mannose specific lectin from snowdrop ( Galanthus nivalis)), tumefaciens have been inserted into plant expression vector pGW4BAI. Leave stripes of Nico-tiana tabacum var. K326 have been transformed with Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404 harboring the plant expression vector. 28 kanamycin resistant tobacco plants have been obtained. PCR and Southern blot analyses show that the foreign crylA and GNA genes have been inserted into the genome of transformed tobacco plants. Haemagglutination assays show that GNA has a functional activity. Leaf disc bioassays against cotton bollworm ( H. armigera) show that the transgenic tobacco plants have a high insecticidal activity. The inhibition of aphid population in leaf disc bioassays against Myzus persicae shows that the fecundity of aphid on transgenic plants is lower than that on untransformed plants; the aphid population on the transgenic tobacco plants is 25%-70% that on untransformed tobacco plants. ELISA analysis of CrylA protein in tobcco leaves provides similar data to bioassay results. Through the two bioassays against H. armigera and M. persicae, several transgenic tobacco plants showing high insect-resistant activities to both pests have been obtained.     

苏云金杆菌菌体保护剂和增效剂的筛选

生物测定结果表明，Ｂｔ菌液添加苋菜红染料抗紫外线能力最强，蚕蛹粉、苏丹黑染料次之。苋菜红染料的保护作用极显著地强于蚕蛹粉以及苏丹黑。ｗ＝０．０２５％敌百虫对Ｂｔ菌液有明显的增效作用，两者混合后的杀虫率比单剂提高３０％。乙酰甲胺磷对Ｂｔ无增效作用。     

苏云金芽孢杆菌与平沙绿僵菌混配对卷叶虫的防治研究

利用苏云金芽孢杆菌杀虫剂与平沙绿僵菌混配防治园林害虫卷叶虫.结果表明:在温度32℃、相对湿度70%～73%条件下,苏云金芽孢杆菌杀虫剂与平沙绿僵菌液体制剂采用1:1的比例混合,混合液体制剂使用量为0.12ml/g时,试验用虫在第20天死亡率可达86.3%,校正死亡率可达82%.     

双馈电机无速度传感矢量控制调速系统的研究

提出了一种新型的基于转子力矩电流反馈机制的双馈电机无速度传感器矢量控制方案以实现高性能低成本双馈电机调速系统。该方案通过测量转子侧电压和电流,实时计算出电机转子力矩分量,通过与电机给定转子力矩电流分量比较,得出转差频率的补偿值,并用于矢量控制系统。该方案计算工作量较小,且仅需测量转子侧的电压和电流作为反馈量。文中从理论上分析了这种控制方式的工作机理,与传统矢量控制系统的异同点,并提出了具体的实现方式。理论分析和数字仿真试验证明了该方案的可行性。     

苏云金芽孢杆菌资源的收集与鉴定

苏云金芽孢杆菌是一种在芽孢形成的同时能形成杀虫晶体蛋白的细菌。自石渡从家蚕中分离出第一株Bt以后，人们发现它广泛存在于土壤、昆虫、贮藏物、仓库尘埃、植被等昆虫接触物上，并从中分离出大量菌株。本文就Bt资源收集的研究情况进行阐述。     

附子浸渍液对银纹夜蛾杀虫活性的初步研究

利用中药材附子炮制过程产生的大量废液中的生物碱进行害虫防治研究。用酸碱滴定法(药典法)测定附子浸渍液总生物碱含量,平均为0．0680 mg／mL。毒力测定结果表明,附子浸渍液对银纹夜蛾具有较高的毒性,Lc50为原液稀释5．8546倍。室内药效试验证明,附子浸溃液稀释2倍和5倍液对银纹夜蛾具有较高的杀虫活性,药后48 h触杀活性校正虫口减退率分别达到91．51％和88．15％;胃毒杀虫活性校正虫口减退率分别达到72．43％和 68．96％。其触杀活性高于胃毒杀虫活性。可进一步进行田间药效试验。