miR-26b和miR-224在梅山与杜洛克猪卵泡中的差异表达分析

为了探讨miRNAs在猪卵泡和繁殖相关组织中的表达,采用荧光定量RT-PCR法和组织表达谱分析法,对miR-26b和miR-224在梅山和杜洛克猪卵泡及其他繁殖相关组织中的表达进行了研究。组织表达谱分析结果表明:miR-26b和miR-224在下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢、子宫角、黄体组织中均有表达。RT-PCR结果表明:miR-26b在L卵泡中的表达量梅山猪是杜洛克猪的2倍(P0.01);而在S卵泡中的表达量杜洛克是梅山猪的10倍(P0.01);两品种在M1和M2卵泡中的表达量差异不显著。miR-224在S卵泡中的表达量杜洛克是梅山的7.79倍(P0.01);而在M2卵泡中表达量梅山是杜洛克的1.84倍(P0.05);两品种在M1和L卵泡中的表达量差异不显著。在猪种内大卵泡L、中等卵泡M2、中等卵泡M1、小卵泡S的相对表达量也有不同程度的差异。此研究表明,miR-26b和miR-224在梅山和杜洛克猪中表达趋势相似,它们的表达差异可能影响卵泡发育和成熟,为深入了解miR-26b和miR-224在卵泡发育中的作用奠定了基础。     

杜洛克与梅山猪卵泡中Grb14、eIF4E和SNRPE基因的差异表达研究

为了探讨梅山与杜洛克母猪卵泡中差异表达基因对猪排卵与繁殖性状的影响,对在前期试验中通过消减杂交技术得到的EST杜大5、杜大46、杜大35进行了分析。序列分析结果表明,EST杜大5、杜大46、杜大35分别代表了Grb14、SNRPE、eIF4E基因。组织表达谱分析结果表明,这些EST在各个组织中均有不同程度的表达,其中Grb14基因只在肝脏、肾脏和卵巢、输卵管、黄体、垂体等繁殖相关器官高表达。荧光定量分析结果表明,这些基因在杜洛克猪大卵泡中的表达量均高于在梅山猪大卵泡中的表达量,其中SNRPE、eIF4E基因达到显著水平,在两猪种其他各级别卵泡中也有不同程度的表达差异,其中Grb14在杜M2中的表达量达到梅M2的2.13倍,差异显著,eIF4E基因在杜M1的表达量是梅M1的0.46倍,差异极显著。在猪种内大卵泡L、中等卵泡M2、中等卵泡M1、小卵泡S的相对表达量也有不同程度的差异。这些差异表达的基因可能影响卵泡发育和成熟,为深入了解这些基因在卵泡发育中的作用奠定了基础。     

杜洛克与梅山猪大卵泡消减文库的构建

为了鉴定杜洛克猪相对于梅山猪在大卵泡中高表达的基因,本研究应用抑制性消减杂交技术成功构建了以梅山大卵泡c DNA为driver,杜洛克大卵泡c DNA为tester的消减c DNA文库。结果显示:以G3PDH和β-actin为指标检测文库的消减效率为25,从该文库中获取了350个有效的阳性克隆,PCR检测插入片段主要分布在150-750 bp。克隆测序得到74个有效的EST序列,GO分析表明主要与细胞信号、细胞结构、代谢、细胞分化、基因/蛋白质合成、细胞组织防护等功能相关。利用q PCR技术验证了ELTD1、Grb14、SNRPE、CSDE1、ALDH18A1、e IF4E、BMPR-IB等基因在梅山和杜洛克大卵泡中的表达模式。结果发现在两猪种的大卵泡间存在显著性差异。本研究有助于揭示影响猪卵泡发育和生殖数量控制的分子基础。     

山羊ZP3基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究

对高繁金堂黑山羊和低繁藏山羊ZP3基因cDNA进行克隆、序列分析,并采用Real-time PCR技术对其在发情前期母羊卵巢组织的表达进行研究.结果表明:山羊ZP3基因编码区全长为1269bp,共编码422个氨基酸,两品种间有2处碱基差异,但未导致氨基酸的差异.山羊的ZP3基因在卵巢表达量高,与其他组织差异极显著(P＜0.01),但两个品种间差异不显著(P＞0.05).说明ZP3基因主要在卵巢中表达,但可能不是影响山羊多羔性状的主基因.     

莱芜猪和沂蒙黑猪IGF-I基因的多态性及生长性状的关联性分析

采用PCR-SSCP方法对莱芜猪(127头)和沂蒙黑猪(132头)的胰岛素样生长因子-I(IGF-I)基因exon3和exon4分别进行单核苷酸多态性分析.发现exon3上有多态性,且存在3种基因型(AA、AB、BB).统计结果表明,3种基因型在两品种中的分布不一致,差异极显著(P＜0.01).固定效应模型分析结果表明,初生重、断奶重和6月龄重基因型间差异不显著(P＞0.05).最小二乘分析结果表明,BB基因型与其它2种基因型比较有较大的初生重,同AA和AB型比较差异极显著(P＜0.01),3种基因型在初生重的大小排列顺序为AA＜AB＜BB.因此,推测IGF-I基因对个体的初生重存在一定的影响,选择带有B等位基因的个体,有望提高个体的初生重.     

莱芜猪和沂蒙黑猪IGF-Ⅰ基因的多态性及生长性状的关联性分析

采用PCR-SSCP方法对莱芜猪（127头）和沂蒙黑猪（132头）的胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）基因exon3和exon4分别进行单核苷酸多态性分析.发现exon3上有多态性，且存在3种基因型（AA、AB、BB）.统计结果表明，3种基因型在两品种中的分布不一致，差异极显著（P〈0.01）.固定效应模型分析结果表明，初生重、断奶重和6月龄重基因型间差异不显著（P〉0.05）.最小二乘分析结果表明，BB基因型与其它2种基因型比较有较大的初生重，同AA和AB型比较差异极显著（P〈0.01），3种基因型在初生重的大小排列顺序为AA〈AB〈BB．因此，推测IGF—Ⅰ基因对个体的初生重存在一定的影响，选择带有B等位基因的个体，有望提高个体的初生重．     

脂肪型和瘦肉型猪肌肉生长和脂肪沉积相关基因的差异表达分析和调控网络构建

骨骼肌细胞和脂肪细胞在生长发育过程中受到的微效多基因间的互作调控机制是决定猪胴体和肉质等相关数量性状的分子基础．利用包含140个与猪肌肉生长和脂肪沉积密切相关基因的Oligo功能分类芯片检测了脂肪型的太湖猪和瘦肉型的长白猪在初生及生后5月龄间背最长肌中这些基因的动态表达变化,发现长白猪分别有18和22个基因,太湖猪分别有3和7个基因在月龄间的表达差异达极显著（P〈0．01）和显著水平（P〈0．05）．聚类结果显示先降后升、逐渐上升和逐渐下降、逐渐上升分别是长白猪和太湖猪在初生至5月龄间最具代表性的基因表达模式（P〈0．01）,其中正调控肌纤维生长和脂肪酸合成的基因主要表现为逐渐上调,而抑制细胞增殖和正调控脂肪酸口氧化的基因则主要表现为逐渐下降．基于动态Bayes模型构建的基因调控网络从一定程度上揭示了两品种在肌肉生长和脂肪沉积等生理生化活动方面的明显差异,可从中挖掘相关性状潜在的关键特征基因．此外,对5个差异表达基因的荧光定量RT—PCR验证显示两种检测方法所获结果的相关系数平均高达0．876±0．095．以上结果筛选出了对于猪胴体和肉质性状可能具有重要影响和具有深入研究价值的基因,为阐明肌肉生长和脂肪沉积的分子互作机制奠定了基础。     

大鼠卵泡膜中肌成纤维细胞的形成及意义

目的:探讨肌成纤维细胞在卵泡膜中的形成及意义。方法:分别取动情期和非动情期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测肌成纤维细胞的特征性标记(α-SMA)和波形蛋白(vim entin)分别在这两组中各级卵泡卵泡膜细胞上的表达情况,并进行图像分析。结果:1.α-SMA和vim entin表达于卵巢的各级卵泡的卵泡膜细胞(窦前卵泡、小窦状卵泡、大窦状卵泡),在动情期组,两者在大窦状卵泡的卵泡膜细胞表达最强,数量也最多,组内各级卵泡间它们表达的比较均有显著性差异(P<0.05),并且α-SMA和vim entin表达强度均与卵泡直径大小成正相关性(r分别为0.631和0.536);在非动情期组,α-SMA表达在小窦状卵泡的卵泡膜细胞表达最强,大窦状卵泡最弱,各级卵泡间α-SMA表达比较差异有显著性(P<0.05),除了窦前卵泡和小窦状卵泡vim entin表达比较差异无显著性(P>0.05)外,vim entin在其他卵泡间的表达比较差异也有显著性(P<0.05),但是α-SMA和vim entin的表达强度与卵泡直径大小无明显相关性(r分别为-0.087和0.224);α-SMA和vim entin的表达在上述两组各类型卵泡间比较也均有显著性差异(P<0.05)。结论:肌成纤维细胞存在于卵泡膜中,并可能在排卵过程中起重要作用。     

基于数字基因表达谱筛选雌雄鸡胚胎性别分化相关的差异表达基因

目的为探究家禽早期胚胎发育中与性别分化相关基因的表达情况。方法本试验通过数字基因表达谱技术(DGE技术)以发育到72 h的雌性和雄性鸡胚胎为研究对象。结果成功构建了雌性和雄性鸡胚胎文库,通过对比及分析后得出有66个表达差异基因,包括雌性对雄性表现上调的基因为25个、下调的基因为41个。通过对这些差异基因进行GO功能和KEGG Pathway显著性富集分析显示差异基因主要参与生长发育、生殖、细胞的增殖分化相关,筛选出了5个与鸡性别分化相关的基因,分别是HINT1Z、SOX9、RSPO1、DMRT1和LHX9基因。结论经实时荧光定量PCR验证,结果显示HINT1Z基因在雄鸡中比在雌鸡中的表达量较高,在雌雄鸡中表达差异不显著; RSPO1基因表达雌鸡比雄鸡中高; SOX9基因表达量雄鸡高于雌鸡且差异极显著(P0. 01); DMRT1基因在雄鸡中的表达量高于雌鸡且差异极显著(P0. 01); LHX9雄鸡中的表达量较雌鸡中高但差异不显著。     

长链非编码RNA NONHSAT068183在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义

通过研究长链非编码RNA NONHSAT068183(lnc068183)在肾透明细胞癌(ccRCC)患者组织中表达水平的变化,分析其表达水平与ccRCC临床指标间的相关性。实验收集55例ccRCC肿瘤组织及其对应的癌旁正常组织,分别设为ccRCC组和对照组;采用qRT-PCR方法检测lnc068183在ccRCC组及对照组组织中的表达水平,用t检验分析其水平变化与ccRCC患者临床指标间的相关性及意义。与对照组相比,lnc068183在ccRCC组肿瘤组织中的表达水平显著降低(P0.000 1)。在临床诊断指标中,ccRCC肿瘤组织中lnc068183的表达水平与ccRCC患者的TNM分期(P=0.005)及Fuhrman分级(P=0.015)呈负相关;ROC分析显示lnc068183对ccRCC有较明确的辅助诊断意义。作为抑癌基因,lnc068183在ccRCC中表达下调,可能与ccRCC的发生和发展相关,为肾癌诊治及研究提供了潜在的新线索。     

牦牛和不育犏牛睾丸中LGR4和ZNF281基因mRNA水平的分析

LGR4和ZNF281是信号转导通路中的重要分子,参与广泛的生物学过程.研究的目的是比较这两个基因在牦牛及其杂交后代睾丸中的表达.从成年牦牛(n=10)和雄性不育犏牛(n=7)睾丸中提取总RNA,采用实时定量PCR技术检测LGR4和ZNF281基因的mRNA水平.结果显示,这两个基因在睾丸组织中均有较高的表达水平,其中LGR4基因在牦牛和犏牛睾丸中表达量没有显著差异,而ZNF281基因在牦牛睾丸中的表达量极显著高于雄性不育犏牛(P 0. 01),差异达4. 7倍.推测ZNF281在犏牛睾丸中的低表达可能与其雄性不育有关.     

猪IGF2基因启动子区的遗传多态性分析

采用PCR-SSCP方法检测猪胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)基因启动子区的多态性,并分析其对初生重、断奶重、6月龄重和背膘厚的遗传效应.根据猪IGF2基因的DNA序列(AY044828)设计8对引物,结果在Ex6引物对扩增的片段上发现了多态性,并对纯合子进行测序,发现exon6的29位G→C转换,且存在3种基因型(从、AB、BB).统计结果表明,3种基因型在各品种中的分布不一致,外来猪种(长白猪和大白猪)与地方猪种(莱芜猪和沂蒙黑猪)比较差异显著(P＜0.01);长白猪与大白猪、莱芜猪与沂蒙黑猪比较基因型分布差异不显著(P＞0.05).固定效应模型分析结果表明,背膘厚基因型间差异显著(P＜0.05),而初生重、断奶重和6月龄重基因型间差异不显著(P＞0.05).最小二乘分析结果表明,AA基因型个体同AB和BB基因型个体比较有较小的背膘厚,且差异显著(P＜0.05).因此,推测IGF2基因对个体胴体瘦肉率存在一定的影响,将IGF2基因应用于猪育种过程中的标记辅助选择可以加快猪的育种进程.     

热应激对肉牛血清离子、酶活性、抗氧化及免疫指标的影响

为研究热应激对肉牛血清离子、酶类、抗氧化及免疫指标的影响,选择了30头川南山地黄牛杂交牛,分别在春季和夏季采集外周血进行血清生化指标分析.结果表明:重庆地区夏季肉牛舍的温湿指数极显著高于春季(P0.01),肉牛在夏季遭受着较严重的热应激;在热应激状态下,肉牛血清中的Na~+,Cl~-,K~+浓度显著低于非热应激(P0.05),谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、肌酸激酶活性显著或极显著升高(P0.05,P0.01),肉牛在热应激时血清中的T3浓度及谷胱甘肽过氧化物酶活性显著降低(P0.05),总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性及丙二醛浓度发生了极显著变化(P0.01);免疫球蛋白A和甘油三酯的浓度显著升高(P0.05),低密度脂蛋白、葡萄糖浓度在两种状态间差异有统计学意义(P0.01);热应激对肉牛血清中的Ca2+,碱性磷酸酶,甲状腺素,总蛋白,白蛋白,球蛋白,免疫球蛋白G,免疫球蛋白M,高密度脂蛋白,尿素氮,总胆固醇的浓度并无显著影响(P0.05).     

多胎和单胎山羊品种促性腺素基因及其受体基因的克隆、序列分析及组织表达研究

以多胎的金堂黑山羊和单胎的藏山羊为研究对象,通过RT-PCR技术,对金堂黑山羊和藏山羊FSHβ、LHβ、FSHR和LHR基因进行克隆,采用Real-time PCR技术测定FSHR和LHR基因在发情前期母羊卵巢中的表达量,采用酶联免疫法测定血浆中FSH和LH的浓度.结果表明:金堂黑山羊和藏山羊FSHβ、LHβ、FSHR和LHR基因的CDS区长度分别为390bp、426bp、2088bp、2103bp,同源性分别为99.74%、100%、99.95%、99.57%;发情前期两山羊品种之间卵巢FSHR和LHR基因的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),血浆中FSH浓度无显著差异(P>0.05),LH的浓度差异显著(P<0.05).提示FSHβ和LHR基因序列及血浆中LH浓度在两个品种间的差异可能是品种间产羔数性状差异的重要原因.     

不同药物预防仔猪黄、白痢的效果比较

采用不同药物对仔猪黄、白痢进行预防,结果表明:试Ⅱ、试Ⅲ、试Ⅳ3组比试Ⅰ组发病率分别减少40.9、51.9和52.3个百分点,死亡率分别降低8.3、13.99和14.5个百分点,差异极显著(P0.01);试Ⅱ组仔猪平均断奶体重高于试Ⅰ组10.99%,差异显著(P0.05);试Ⅲ、试Ⅳ两组的发病率均极显著地低于试Ⅰ组和试Ⅱ组(P0.01),试Ⅲ组的死亡率比试Ⅰ组和试Ⅱ组分别降低13.99和5.69个百分点,差异极显著(P0.01),试Ⅳ组的死亡率比试Ⅰ组和试Ⅱ组分别降低14.5和6.2个百分点,差异亦极显著(P0.01),试Ⅳ组的死亡率虽比试Ⅲ组降低0.51个百分点,但差异不显著(P0.05);试Ⅲ、试Ⅳ两组仔猪平均断奶体重分别比试Ⅰ组提高20.85%和21.13%,差异极显著(P0.01);比试Ⅱ组分别提高8.88%和9.14%,差异亦显著(P0.05),试Ⅳ组仔猪平均断奶体重比试Ⅲ组提高0.23%,但差异不显著(P0.05).     

免疫相关基因在健康革胡子鲶不同组织的表达分析

应用荧光定量PCR法分析抗菌肽hepcidin、c型溶菌酶和MHCⅠ基因在健康革胡子鲶肝胰脏、脾脏、胃、肠道、肾脏、头肾、心脏、脑、鳃、鳃上器官、背部皮肤、背部肌肉和尾鳍13种组织中的表达.结果显示:3种基因在以上组织中均有表达,Hepcidin基因在脾脏中表达最高,显著高于除肾脏以外的其它组织(P0.05);c型溶菌酶基因在胃中表达量最高,与其余组织的表达差异显著(P0.05);而MHCⅠ基因在脾脏和鳃中表达量相对较高,但13种组织间的表达差异不显著(P0.05).     

褐飞虱在不同水稻品系上繁殖能力及相关解毒酶系基因表达变化分析

采用水稻敏感品系TN1和抗性品系中浙优、IR56饲养褐飞虱,研究褐飞虱产卵量等繁殖情况,测定解毒酶系中酯酶、细胞色素P450和谷胱甘肽转移酶(GST)及卵黄原蛋白(Vg)等基因在mRNA上的表达变化.结果显示褐飞虱在抗性水稻上产卵量减少,Vg2的表达量极显著下降,表明水稻抗性对褐飞虱的产卵量有抑制作用且Vg2调控产卵.酯酶和P450中的部分基因均在取食抗性水稻的褐飞虱体内表达量较高,存在极显著差异.     

绵羊13个微卫星基因座对毛用性状的相关性研究

根据GenBank在绵羊1、4、6号染色体上选取13个微卫星基因座,对被测中国美利奴绵羊群体部分毛用性状的表型数据资料按基因型分组进行方差分析和多重比较。结果表明,标记羊毛细度的BM6506、OARDB6基因座不同基因型间差异达到了极显著水平（P〈0.01）,标记羊毛细度的BM2263、BMS835I、LSTS044、OARAE57、BMS178基因座不同基因型间差异达到了显著水平（P〈0.05）,可对羊毛细度进行标记;标记羊毛长度的BMS835和BM6438基因座不同基因型间差异达到了极显著水平（P〈0.01）,标记羊毛长度的BMS2263、OARDB6、OARCP26、BM143基因座不同基因型间差异达到了显著水平（P〈0.05）,这些基因座可对羊毛长度进行标记。     

不同土壤对心叶烟和三生烟种子萌发率的影响

测定了四种不同土壤的基本理化性质,并分别用其培育心叶烟和三生烟种子,统计两种烟草种子在四种土壤中的萌发率.结果表明:两品种烟草种子萌发率在育烟基质与其他3种土壤间有极显著差异(p<0.01),而在两烟草品种间差异不显著.     

不同抗旱品种胡麻苗中脯氨酸累积的差异

在干旱胁迫下，胡麻旱地品种８１１１５１和水地品种８６Ⅲ２３累积较多的脯氨酸，分别比对照增加６倍和４倍．旱地品种的累积量为水地品种的２倍，达８．０７３ｍｇ·ｇ－１（ＤＷ），二者在干旱胁迫下脯氨酸累积量差异ｔ检验达极显著水平