树鼩PD-1基因的分离、鉴定及表达分析

PD-1(Programmed cell death 1)是一种抑制性的受体,是免疫球蛋白超家族的成员.大量研究证明PD-1能被诱导而在活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞、NKT 细胞和单核细胞上表达,从而在慢性感染的病因学中起着重要作用.树鼩(Tupaia belangeri)做为一个理想的模型可被应用于许多人类感染性疾病如乙型病毒性肝炎.为了充分利用树鼩对于感染性疾病的宿主免疫应答模型,我们分离出树鼩PD-1基因.利用迅速扩增cDNA末端PCR(RACE-PCR)技术,从树鼩脾组织中克隆了PD-1基因的全长cDNA序列.序列分析显示树鼩PD-1 cDNA 的开放阅读框编码一个由242个氨基酸组成的跨膜蛋白,并且和人类、灵长类和啮齿类中的同源基因有高度相似性.组织分布分析表明在所检测的几种组织中PD-1基因只在脾中表达.此外,淋巴细胞刺激实验显示,利用PMA和ionomycin刺激新鲜分离的树鼩外周血单核细胞(PBMCs)能够诱导PD-1 mRNA水平上的表达.我们的结果为将来进一步探讨树鼩的免疫功能提供了良好的基础.     

淋巴细胞白血病患者CD3基因表达模式的变化

目的:了解T细胞受体信号传导分子CD3γδεζ基因在T和B细胞白血病病人中的表达特点.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测32例淋巴细胞肿瘤病人:急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)12例、慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)9例、急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)11例及10例健康人外周血...     

淋巴细胞的发育、分化、激活、凋亡及其调节——中国科学家谈科学

淋巴细胞的发育、活化及凋亡的研究，有助于深化对特异性免疫应答及调节机理的认识。对淋巴细胞生命过程的干预可望为免疫缺陷、自身免疫、感染和肿瘤等疾病的预防及治疗提供新的、更有效的方法。     

转录组分析揭示松乳菇多糖刺激T淋巴细胞增殖的分子机制

以T淋巴细胞为研究材料,采用RNA-Seq测序技术对松乳菇多糖(LDG-A)、脂多糖(LPS)和空白对照作用下的T淋巴细胞进行测序及生物信息学分析,研究松乳菇多糖处理对T淋巴细胞增殖过程中基因表达的影响,并探究该过程中涉及的主要基因和关键通路。结果表明:对照组、松乳菇多糖组和脂多糖组分别获得7.54 G、7.96 G和8.62 G的分析数据,T淋巴细胞在松乳菇多糖组和对照组中有8个极高表达基因,在脂多糖阳性对照组有5个极高表达基因(FPKM2 200)。差异表达基因分析发现,松乳菇多糖组和对照组之间共存在334个差异表达基因,其中有331个基因上调,3个基因下调。KEGG通路富集结果显示,松乳菇多糖影响T淋巴细胞增值的关键基因主要富集在MAPK、Ras等信号通路中,其中Ras-ERK-MAPK信号通路在松乳菇多糖刺激T淋巴细胞增殖的过程中具有重要作用;该通路中的成纤维细胞生长因子1(Fgf1)、成纤维细胞生长因子受体1(Fgfr1)、血小板衍生生长因子亚单位A(Pdgfa)和ets转录因子ELK1(Elk-1)等基因上调表达,表明松乳菇多糖能够通过Ras-ERK-MAPK信号通路促进T淋巴细胞进行基因表达及增殖。     

肿瘤基因治疗的临床应用

基因治疗方法是通过基因转导技术赋于靶细胞一种新的功能或改变靶细胞某些基因的表达状况。目前基因治疗的疾病主要包括遗传性疾病、免疫缺陷病、肿瘤等。1991年12月在复旦大学遗传学研究所进行了国际上首例血友病的基因治疗。两位由于凝血因子Ⅸ缺乏而患有血友病B的患者被重新植入了大量转移有正常Ⅸ因子基因的自身皮肤成纤维细胞,结果病人体内Ⅸ因子含量都成倍上升,取得较好疗效。1990年9月,美国国立卫生研究院(NIH)用基因疗法治疗了一位由于体内腺苷脱氨酶(ADA)缺乏而患者严重联合性免疫缺陷的病人,他们将转移有正常ADA基因的患者自身淋巴细胞体外培养后重新大量输回病人体内,实验结果令人鼓舞。目前基因治疗已应用于很多种疾病。 肿瘤的基因治疗始于九十年代。1990年美国NIH首次对一位晚期恶性黑色素瘤病人进行了基因转导的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)     

卡介苗ERP基因缺失突变株免疫原性的研究

为了探究卡介苗ERP基因缺失突变株对小鼠免疫应答的影响,明确敲除ERP基因后是否影响卡介苗的免疫原性,采用卡介苗ERP基因缺失突变株、卡介苗(BCG)及生理盐水背部皮下免疫小鼠,4周、8周、12周、16周后,分别采用CCK8检测脾脏淋巴细胞增殖转化率,ELISA检测淋巴细胞培养上清液IL-2、IFN-γ的产量。结果表明:卡介苗ERP基因缺失突变株组脾淋巴细胞的增殖能力及培养上清液中IL-2I、FN-γ的分泌量均明显高于生理盐水对照组(P<0.01),但与卡介苗组相比无明显差别(P>0.05)。卡介苗ERP基因缺失突变株可引发一定强度的特异性细胞免疫,而此效果与卡介苗相当。     

RAG2/IL2RG双基因缺陷小鼠杂交群体的建立

目的建立RAG2/IL2RG双基因缺陷的CRG小鼠杂交群体。方法将RAG2基因缺陷小鼠与IL2RG基因缺陷小鼠分别进行繁殖,选取RAG2基因缺陷雄鼠RAG2(-/-)与IL2RG基因缺陷雌鼠IL2RG(-/-)进行配对,培育杂交后代,通过PCR扩增基因组RAG2和IL2RG基因进行鉴定;应用流式细胞仪分析检测RAG2/IL2RG双基因缺陷小鼠外周血T细胞(CD3+)、B细胞(CD19+)和NK细胞(CD49b+)含量;并测定8—12周龄RAG2/IL2RG双基因缺陷小鼠血液生理生化及主要脏器重量指标。结果成功繁育RAG2基因缺陷小鼠和IL2RG基因缺陷小鼠,筛选获得稳定的RAG2/IL2RG双基因缺陷小鼠并成功保种和扩群;该双基因缺陷小鼠外周血淋巴细胞中T细胞、B细胞,NK细胞比例显著降低(P0.05);与相同周龄野生型C57BL/6相比9项血清生化指标无明显变化(P0.05);18项血液生理指标中红细胞(RBC)和血红蛋白(HGB)含量显著降低(P0.05);白细胞(WBC)、淋巴细胞数(LYMPH)、淋巴细胞比率(LYM)、单核细胞、中性细胞数(NEUT)降低极显著(P0.01);脾脏重量显著均低于野生型C57BL/6小鼠(P0.05);人肝肿瘤传代细胞移植于RAG2/IL2RG双基因缺陷小鼠后,肿瘤移植成功率和生长速率均明显高于亲本单基因缺陷小鼠(P0.05),成功获得了临床肝癌病人肿瘤组织的异种移植模型。结论成功构建筛选出RAG2/IL2RG双基因缺陷小鼠杂交群体。     

ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠杂交群体的建立

摘要: 目的建立ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷的CＲG 小鼠杂交群体。方法将ＲAG2 基因缺陷小鼠与IL2ＲG 基因缺陷小鼠分别进行繁殖,选取ＲAG2 基因缺陷雄鼠ＲAG2( － / － ) 与IL2ＲG 基因缺陷雌鼠IL2ＲG( － / － ) 进行配对,培育杂交后代,通过PCＲ 扩增基因组ＲAG2 和IL2ＲG 基因进行鉴定; 应用流式细胞仪分析检测ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠外周血T 细胞( CD3 + ) 、B 细胞( CD19 + ) 和NK 细胞( CD49b + ) 含量; 并测定8—12 周龄ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠血液生理生化及主要脏器重量指标。结果成功繁育ＲAG2 基因缺陷小鼠和IL2ＲG 基因缺陷小鼠,筛选获得稳定的ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠并成功保种和扩群; 该双基因缺陷小鼠外周血淋巴细胞中T 细胞、B 细胞,NK 细胞比例显著降低( P ＜ 0. 05) ; 与相同周龄野生型C57BL/6 相比9 项血清生化指标无明显变化( P ＞ 0. 05) ; 18 项血液生理指标中红细胞( ＲBC) 和血红蛋白( HGB) 含量显著降低( P ＜ 0. 05) ; 白细胞( WBC) 、淋巴细胞数( LYMPH) 、淋巴细胞比率( LYM) 、单核细胞、中性细胞数( NEUT) 降低极显著( P ＜ 0. 01) ; 脾脏重量显著均低于野生型C57BL/6 小鼠( P ＜ 0. 05) ; 人肝肿瘤传代细胞移植于ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠后,肿瘤移植成功率和生长速率均明显高于亲本单基因缺陷小鼠( P ＜ 0. 05) ,成功获得了临床肝癌病人肿瘤组织的异种移植模型。结论 成功构建筛选出ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠杂交群体。     

无毛突变基因对无毛小鼠免疫器官结构及功能的影响

摘要: 目的探讨无毛突变基因的作用,对无毛小鼠、有毛小鼠的免疫器官结构及功能进行了对比研究。方法比 较无毛小鼠和有毛小鼠主要免疫器官组织学变化,以及血清白介素－ 2 受体、淋巴细胞亚群、淋巴细胞增殖等方面 的差别。结果发现无毛小鼠和有毛小鼠免疫器官结构及功能均有一定的差异。结论研究结果提示无毛突变 基因不仅影响被毛结构,对免疫器官及功能也有一定的影响。该基因在杂合状态时也有一定的作用,表明该突变 基因具有一定的共显性。     

微囊化转CEA基因细胞诱导小鼠抗肿瘤免疫的研究

为发展癌胚抗原(CEA)阳性肿瘤的治疗性疫苗,应用基因工程和静电液滴技术制备出微囊化转CEA基因细胞,经腹腔免疫实验小鼠,再分别应用CEA基因转染的H 2 2 细胞小鼠皮下及腹腔接种,观察微囊化转CEA基因细胞对小鼠肿瘤的抑制作用及其诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤CEA 阳性肿瘤细胞的能力,并用流式细胞术检测了小鼠肿瘤细胞的生长周期和各实验组脾脏T淋巴细胞亚群的分布情况. 结果显示,微囊化转CEA 基因细胞可以有效抑制CEA阳性肿瘤的生长,诱导小鼠CTL对CEA阳性肿瘤细胞的特异性杀伤 ,并能改善荷瘤小鼠的免疫功能,延长腹水瘤小鼠的生存期.     

套式PCR检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)方法应用

目的检测目前小鼠和地鼠中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的感染情况。方法采用套式PCR方法对小鼠和地鼠脑及小鼠脏器进行扩增,检测LCMV基因;同时对血清进行ELISA试验,将两种方法的结果进行比较。结果从小鼠的脾脏和肾脏中检测到NP基因的存在,检出率2/148;ELISA检出率5/148。结论PCR与ELISA检测方法相结合,准确率高,证明目前小鼠中存在LCMV的感染。     

铀矿冶低剂量γ射线辐照对淋巴细胞凋亡的影响

淋巴细胞凋亡在其发育中起着重要的作用,淋巴细胞凋亡率升高可能会引起免疫缺陷,抑制淋巴细胞凋亡率可能会促进淋巴瘤的发展。铀矿冶低剂量γ射线辐照会诱导淋巴细胞的凋亡,流式细胞术检测结果表明,淋巴细胞在接受剂量率为14 μGy/h的低剂量率γ射线辐照的21 d内凋亡率逐渐增高,并基本呈线性增加趋势。全转录组测序结果表明,低剂量γ射线辐照后,淋巴细胞内共有1 677个表达差异显著(任意两组间p值<0.05)的基因,主要与细胞对压力的反应、细胞周期、DNA构象变化、DNA修复、细胞蛋白分解代谢过程、病毒致癌机理、染色体分离、p53的转录调控相关。低剂量γ辐射会激活肿瘤抑制蛋白p53,最终使细胞凋亡率升高。     

家养动物的遗传工程:来自鼠遗传模型报告

本文对从转基因鼠所得到的大量观察进行了报道,以便检验将基因直接导入家养动物的可行性。外源基因的组织特异的或一般的表达已经实现,并且有证据表明它可与内源基因相配合进行活动,这些结果表明参与某些有动物技术价值的特征行为(如食物消化,泌乳,免疫反应)的器官(如肝、乳腺)或组织(如外分泌腺、B淋巴细胞)的活动,通过基因转移得到适当的促进。目前,偶而也能观察到外源基因的异常表达或传递;有时转基因动物的生殖力会严重下降。这些失控行为及至今尚在使用的将基因导人生殖系的低效率方法,对于基因工程在家养动物中的应用仍是一个主要的障碍。     

OX40L在小鼠B16黑素瘤细胞中表达及对活化淋巴细胞凋亡影响

目的:构建OX40L的真核表达载体,分析其在B16细胞中的表达,研究OX40L对活化T淋巴细胞凋亡的影响.方法:以小鼠C57BL/6脾脏的cDNA为模板,PER扩增小鼠OX40L基因,构建真核表达载体pVAX1-OX40L,转染B16细胞后,荧光染色检测OX40L的表达;利用AnnexinV-PE凋亡试剂盒,检测B16黑素瘤细胞-淋巴细胞体外混合培养中对活化淋巴细胞凋亡的影响.结果:成功构建OX40L的真核表达载体,并转染B16细胞中,流式细胞术和激光共聚焦显微术均可检测到OX40L表达于B16细胞表面.淋巴细胞体外混合培养显示,表达OX40L的B16细胞组活化淋巴细胞的凋亡率为6.57%,而空质粒转染组为17.24%.结论:OX40L能表达于B16细胞表面,并能显著抑制活化淋巴细胞凋亡.     

Plenti/V5-myc-KyoT2-IRES2-EGFP慢病毒载体的构建与鉴定

构建含有myc-KyoT2融合基因片段的病毒载体,并在真核细胞中表达鉴定.方法:由科室保存质粒分别酶切得到Plenti/V5、IRES2-EGFP和myc-KyoT2基因片段,分别将myc-KyoT2基因片段插入质粒pIRES2-EGFP得到myc-KyoT2-IRES2-EGFP,然后将myc-KyoT2-IRES2-EGFP基因片段插入质粒Plenti/V5-GFP,构建病毒载体Plenti/V5-myc-KyoT2-IRES2-EGFP,应用免疫印记和荧光显微镜检测融合蛋白与绿色荧光蛋白的表达.获得了质粒myc-KyoT2-IRES2-EGFP和Plenti/V5-myc-KyoT2-IRES2-EGFP,myc-KyoT2融合蛋白和绿色荧光蛋白均正确表达.说明成功构建了含有myc-KyoT2-IRES2-EGFP融合基因的病毒载体,并在真核细胞中正确表达,为进一步研究急性T淋巴细胞白血病与Notch信号转导通路之间的关系奠定了基础.     

患包涵体肝炎鸡血淋巴细胞凋亡、坏死的研究

运用流式细胞仪技术研究了鸡包涵体肝炎(inclusion body hepatitis,IBH)发病过程中血液淋巴细胞的凋亡、坏死变化情况.结果表明,攻毒组在攻毒后3~5d,淋巴细胞早期凋亡显著下降(P<0.05),7d明显升高(P<0.05),12d时淋巴细胞早期凋亡下降显著(P<0.05).攻毒组在攻毒后3~5d时,淋巴细胞坏死与对照组差异不显著(P>0.05),7~12d时显著低于对照(P<0.05),在25d时显著高于对照组(P<0.05).     

穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响

目的:研究穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A(Con A)的刺激下,穿心莲内酯对T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达的影响;用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色分析穿心莲内酯对T淋巴细胞增殖的影响;用碘化丙锭染色分析细胞周期的分布.结果:终浓度为10、20、30、40 μmol/L的穿心莲内酯对Con A刺激的早期活化抗原CD69的表达具有明显的抑制作用(P<0.01);对Con A刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01);并明显阻止T淋巴细胞进入S期,且呈剂量依赖性.结论:穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,并抑制T淋巴细胞进入分裂周期.     

Eμ—myc转基因小鼠:一种高发生率的自发性淋巴瘤和早期B细胞白血病模型

<正> 肿瘤基因的转建对自然环境中的细胞的影响可利用转基因小鼠来评定。转基因小鼠是将一个基因插入小鼠基因组,随后通过正常繁殖而延续。作者将命名为Eμ-myc的DNA序列导入小鼠,该序列是从小鼠浆细胞瘤中分离出来的,瘤细胞中正常myc基因已连接到Ig重链强化基因上。在这种转基因小鼠中,Eμ—myc转基因仅在B淋巴细胞中表达,使B淋巴细胞较正常增殖快;小鼠出生前,前B细胞群即扩增到约正常的5倍,而B细胞却略减少。因此,由Eμ—myc基因引起的B细胞增殖是有限制的和良性的,但是,这些小鼠亦发生B细胞性淋巴瘤。为了建立Eμ—mye小鼠作为淋巴瘤发生     

AK078438基因原核表达载体构建、多克隆抗体制备

AK078438基因是一个功能未知的新基因.通过RT-PCR方法扩增出AK078438基因的全长开放阅读框,构建了AK078438基因的原核表达载体.经诱导表达,亲和层析纯化该基因的融合蛋白并制备多克隆抗体.ELISA和Western blot结果表明我们成功的制备了AK078438基因的抗体,为后续该基因功能的研究做好了准备.     

基因检测与运动表现的研究内容、策略及挑战

采用文献资料法等研究方法对国内外有关基因与运动表现的主要研究内容、研究策略与方法以及面临的困难与挑战进行综述.研究认为,基因对运动表现的影响主要针对有氧耐力、力量/速度素质的研究,以及基因对训练适应和运动损伤的研究;研究策略与方法主要包括关联性分析、全基因组分析、单基因与多基因分析以及同类型运动员的比较等4种;面临的困难与挑战主要有大样本高水平运动员的获取、基因间的作用机理以及罕见基因的识别3个方面.基因筛查是一把双刃剑,优点是能了解更多运动员信息,优化训练计划和强度,提高训练的针对性和效率;缺点是可能会被急功近利的教练员所利用,增加运动损伤的风险等.