斜卧青霉纤维素酶的研究 Ⅱ.JU1菌株的生理特征和酶合成调控问题的初探

研究了各种培养基成分对斜卧青霉抗降解物阻遏突变株JU_1和野生菌株114—2生长和产酶的影响。初步确认了斜卧青霉的纤维素酶及其它几种糖苷酶均为部分组成型酶,不需要专门的诱导物。“诱导”只是增加酶的产量。降解物阻遏是菌株控制其产酶量的主要调节机制。抗降解物阻遏突变可能同产能代谢部分受阻有关。     

斜卧青霉纤维素酶的研究——Ⅰ.JU_1菌株的产酶及酶作用条件

目前国内外对纤维素酶的研究多集中于木霉。但木霉毒性嫌疑大,在食品发酵工业中的应用受到限制。我们通过筛选和诱变选育,得到了一株斜卧青霉的纤维素酶抗降解物阻遏高产突变株—JU1,产酶能力近似于国内外的一些优良木霉菌株。对它的产酶条件及酶作用条件做了进一步研究。材料和方法     

光敏试剂诱变选育纤溶酶高产菌株

采用光敏试剂与紫外相结合对分离到的纤溶酶生产菌株根霉Rh23#的原生质体进行诱变处理,选育出了比亲本菌株高出73%的高产突变株Rh0524#。取突变株的沙土管孢子接种斜面连续5次传代发酵试验表明,该菌株高产性能遗传特性稳定。     

复合诱变及发酵优化选育染料木素转化菌株的研究

本研究通过对两株β-葡萄糖苷酶高产菌株黄丝曲霉JS-Q和黑曲霉XK-L进行复合诱变,诱变混合菌株直接进行产酶培养,利用"复杂系统定向调控技术",以酶活为指标对培养条件进行连续的定向调控,在产酶培养条件优化过程中富集正突变株并逐步提高酶活,在挑选出正突变株的同时优化出适合高酶活正突变株的培养条件.最终从优化产酶培养基中挑选到菌株F17和F27,产酶能力比出发前菌株XK-L提高了64.9%和49.4%.用这两株菌分别发酵槐角苷,经测定其转化率分别为76%和78%,比出发菌株XK-L提高31.0%和34.5%.     

华北地区圈养大熊猫粪便中产纤维素酶芽孢杆菌菌株的分离与鉴定

为分离筛选大熊猫肠道中具有纤维素降解能力的芽孢杆菌菌株,首先对8份大熊猫粪便进行高温水浴处理,利用刚果红平板法进行初筛和复筛,DNS法测定酶活力.结果分离出126株菌株,其中8株菌株纤维素降解能力较强.结合形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析,鉴定8个菌株均属于芽孢杆菌属,其中1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),1株阿萨尔基芽孢杆菌(B.axarquienis),2株西姆芽孢杆菌(B.siamensis),4株甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus).实验表明大熊猫肠道中存在多种降解纤维素的芽孢杆菌,其中新发现的有大熊猫源的阿萨尔基芽孢杆菌和西姆芽孢杆菌,丰富了大熊猫肠道菌群的研究,并为高效生产纤维素酶提供新的菌种来源.探究了大熊猫消化道内高效的纤维素降解菌,有利于实现高纤维类饲料资源化利用.     

奶牛粪便纤维素降解菌的筛选

针对奶牛粪便中的纤维素,进行了高酶活纤维素降解菌的筛选,从奶牛场排水口处土壤、林地和菜园土壤中共分离得到19株纤维素降解菌,经过滤纸条复筛和奶牛粪便纤维素降解率的测定,选出3株降解率相对较高的菌株,分别为F2,F3和F9.对其进行诱变选育,F3.1.6和F9.1.8酶活提高较大,其CMC酶活和滤纸酶活分别提高了47.69%,47.51%和53.41%,50.17%.继代培养后比较可得,F9.1.8传代稳定性较好,其CMC酶活和滤纸酶活较原始菌株F9分别提高了13.47%和22.11%,可作为后续发酵产酶的生产菌株.     

纳木错牦牛粪便中纤维素降解菌的鉴定及产酶特征

通过富集、纯化从西藏纳木错的牦牛粪便中筛选得到2株高效纤维素降解菌株，采用滤纸条崩解试验测定不同培养温度、培养时间和初始pH值条件下纤维素降解菌株的产酶特征，并初步分析了目标菌株的遗传地位.结果表明，菌株X1和X2具有显著降解纤维素优势，两菌株在培养温度9℃、培养时间6 d、初始pH值4的条件下，产出的纤维素降解酶具有较强的相对酶活性.系统发育分析显示，X1和X2可能为Cronobacter属菌株.     

高活性秸秆降解菌群的构建及产酶条件优化

纤维素的开发与利用在当今资源紧缺的社会下是当务之急,秸秆含有大量的纤维素,木质素.它从一个农业废弃物逐渐变为了再生资源开发的焦点.为了将秸秆资源充分利用起来,我们以牛粪,羊粪及含腐烂树叶土壤的混合物为材料,利用限制性培养技术,对其中能够降解纤维素的微生物进行驯化培养,并得到一组高效降解纤维素的菌群.利用CMC糖化力法和滤纸酶法测定该菌群的纤维素降解能力.对菌群进行菌种的分离,并进行生理生化试验分析各个菌株的特性.通过正交试验对该菌群的最佳产酶条件进行优化.得到的菌群CMCase酶活的高达80U/mL,滤纸酶活高达152U/mL.得到的最佳产酶条件为蛋白胨纤维素培养基以滤纸为碳源,pH 5.0条件下35℃静置培养.筛选性能稳定的高产秸秆降解菌群,为充分利用秸秆等农业废弃物提供了新的方向.     

小熊猫粪便中纤维素降解菌株的筛选、基因改造及生物合成聚羟基丁酸酯条件的优化

为了发掘能够利用纤维素生产聚羟基丁酸酯(PHB)的菌种并获得最佳的发酵条件,用刚果红染色法从小熊猫粪便中筛选出具有纤维素降解能力的菌株,利用基因工程技术,将其改造为PHB生产菌株,利用响应面法,确定菌株发酵合成PHB的最优条件.经过透明圈检测和纤维素酶活力测定,分离获得1株可高效降解纤维素的细菌,结合形态学观察、生理生...     

纤维素降解菌的筛选与诱变育种

采用羧甲基纤维素（CMC）平板初筛和50℃培养, 筛选到一株纤维素酶活力较高的耐高温霉菌MY菌株, 其CMC培养基最适pH为6.0, 培养温度为40℃, 最佳产酶时间为5d. 以MY菌株为出发菌株, 分别采用紫外线和硫酸二乙酯诱变, 以透明圈直径与菌落直径的比值（HC值）提高30%以上或菌落形态发生明显变异为筛选指标, 共筛选到97株突变株; 通过测定粗酶液CMC酶活力, 从中筛选出29株CMC酶活力提高30%以上的菌株; 结合突变菌株的传代稳定性实验, 最后筛选得到1株性能优良的霉菌MY004突变株, 其CMC酶活力比原始菌株MY提高了80.6%.     

载体孔径尺寸与酶分子尺寸的关系

以不同孔径的聚苯乙烯小球作载体研究固定化酶,使酶的分子尺寸与载体孔径尺寸匹配.     

纤维素酶在棉织物生物抛光中的应用

阐述纤维素酶的作用机理,并简述纤维素酶对棉织物的抛光整理工艺;分析影响纤维素酶抛光效果的各种因素,包括酶用量、温度、pH值、处理时间等对织物失重率、起毛气球外观的影响;指出纤维素酶在绿色染整工艺中的重要性。     

THE DEINKING OF NON-IMPACT PRINTED PAPER BY COMBINING ENZYME WITH MECHANICAL ACTION

We studied an enzymatic deinking process of non-impact printed paper which was carried out in batch equipment, similar to Valley beater. The equipment can provide suitable forces to cause toner separation from fiber rather than fiber damage. The factors that influenced the deinking efficiency included beating time, pressure between rotating bars and bottom bars, enzyme properties such as dosage,cellulase activity, temperature, pH, etc. Beating time and enzyme type and enzyme dosage was investigated in detail. The deinked pulp was brighter and cleaner. The drainage property also can be controlled by adjusting enzyme dosage and mechanical action strength. Combining enzyme with mechanical action provides the best deinking effects,not enzyme alone. In the meantime, mechanism of enzymatic deinking was discussed depending on the deinked pulp properties.     

Copper ions inactivate S-adenosylhomocysteine hydrolase

S-adenosylhomocysteine (AdoHcy) hydrolase isan enzyme that regulates biomethylation and some otherphysiological processes. Recombinant AdoHcy hydrolase wasoverexpressed in E. coli JM109 and purified with ion ex-change and gel filtration chromatographies. The effects ofcopper ions (Cu2+) on the activity of AdoHcy hydrolase wereinvestigated and the results showed that Cu2+ inhibited theenzyme's activity by a concentration and time-dependentprocess. The inhibition constant (Ki) and the apparent rateconstant (kapp) were calculated to be (14 + 4) nmol @ L-1 and(1.08 + 0.15) min-1, respectively. The existence of the naturalsubstrate Ado could to some extent prevent Cu2+ from inac-tivating the enzyme, suggesting that copper ions possiblycould compete with the natural substrate on enzyme's sub-strate binding site. Further studies on the mechanism of in-hibition are being carried out.     

Non-viral gene delivery carrier of probe type host molecule ——Interactions between DNA and β-cyclodextrin derivative complexes (I)

GENE THERAPY IS A COMMON PROCESS TO DELIVER EXTRIN- SIC GENES INTO TARGET CELLS FOR FURTHER GENE EXPRESSION, FOR THE PURPOSE OF TREATING DISEASES. A WELL DESIGNED GENE DELIVERY CARRIER CAN EFFICIENTLY PACKAGE AND PRO- TECT NUCLEIC ACID FROM BEING DIGESTED BY A VARIETY OF ENZYMES IN VIVO AND SHOULD BE ABLE TO SPECIFICALLY LO- CATE EXTRINSIC GENES INTO THE TARGET ORGANISMS. S…     

偶联酶法检验L-天冬酰胺酶的动力学分析

根据McClure偶联酶反应理论,通过实验对偶联酶法检验L-天冬酰胺酶活力的反应条件进行了动力学分析,确定了合理的附加酶用量,建立了偶联酶法检验此酶活力程序。用该程序测定的底物K_m值和产物的抑制常数K_1值与文献值相符。     

微生物酶法生产L-半胱氨酸的产酶条件优化

以假单胞菌（Pseudomonas sp．）TS1138为供试菌株，对微生物酶法生产L-半胱氨酸的条件进行了初步研究。通过对产酶培养基中的碳氮源进行研究，得到了TS1138菌株产酶的最佳碳氮源分别为葡萄糖和尿素，DL—ATC的最适添加量为5g／L；通过对产酶培养基的产酶条件进行研究，得出了最适的种子接种量为10％，产酶培养基的最适初始pH为8．0，500mL三角瓶的最适装液量为40mL。     

低噪声变截面弹性连杆机构的优化设计

以减小噪声辐射为目的,对变截面弹性连杆机构的优化设计进行了研究.构造了变截面梁单元的位移模式,采用有限元法建立其运动微分方程.以机构杆件截面参数为设计变量,以机构的声辐射功率和机构杆件质量的加权和作为目标函数,利用改进的约束变尺度法进行优化分析,最后通过算例验证了所述方法的有效性.     

蛋白质酶促水解反应机理与动力学模型

研究蛋白质酶促水解制备生物活性多肽的反应机理与动力学行为，并建模表征不同反应机制的酶解曲线。基于对不同实验条件下反应时程特性的分析，以经典的米氏方程为理论基础，提出了同时考虑蛋白质单底物水解、蛋白酶失活以及底物或产物抑制因素的机理模型，并构建了指数形式动力学方程dh／dt=aexp（-bh），其中参数（a和b对于不同反应机理具有不同的表达形式和确定的数值结果，对于牛血清白蛋白（BSA）-胰蛋白酶（trypsin）模型体系，经实验拟合平均相对误差为4．73％，并求得该体系相应热力学和动力学常数：Km=0．0748g/L，Ks=7．961g/L，Kd=9．358min^-1，K2=38．439min^-1，Ea=64．826kJ／mol，Ed=80．031kJ／mol。所建整套模型可用于蛋白质酶解反应过程的模拟、热动力学常数的计算和生物反应器的优化设计。     

酶解核桃仁制备低分子肽

以核桃仁为原料, 采用酶解技术, 经蛋白质提取、 酶解、 分离等工序制备高质 量低分子肽制品. 蛋白酶水解核桃仁的最佳条件为： 温度40 ℃、 pH 9、 底物浓度40 mg/ mL、 酶量150 U/g, 反应时间2 h, 在此条件下核桃蛋白质的水解度约为20%.