木聚糖酶高产突变株酶学特性研究

野生株木聚糖酶最适pH为5.4,在7.0-10.0范围内稳定;而突变株最适pH为6.0,在6.0-10.0范围内稳定。最适温度均为52℃,在20-50℃间比较稳定。在40℃保温24h,野生株剩余活力为57%,突变株为86%;电泳表明,突变株酶液中蛋白质种类与野生株差别较大;木聚糖酶谱检测也发现,突变株粗酶液中有两种类型木聚糖酶,而野生株中只有一种。     

纤维素降解菌的筛选与诱变育种

采用羧甲基纤维素（CMC）平板初筛和50℃培养, 筛选到一株纤维素酶活力较高的耐高温霉菌MY菌株, 其CMC培养基最适pH为6.0, 培养温度为40℃, 最佳产酶时间为5d. 以MY菌株为出发菌株, 分别采用紫外线和硫酸二乙酯诱变, 以透明圈直径与菌落直径的比值（HC值）提高30%以上或菌落形态发生明显变异为筛选指标, 共筛选到97株突变株; 通过测定粗酶液CMC酶活力, 从中筛选出29株CMC酶活力提高30%以上的菌株; 结合突变菌株的传代稳定性实验, 最后筛选得到1株性能优良的霉菌MY004突变株, 其CMC酶活力比原始菌株MY提高了80.6%.     

纤维素降解菌的筛选与诱变育种

采用羧甲基纤维素(CMC)平板初筛和50℃培养,筛选到一株纤维素酶活力较高的耐高温霉菌MY菌株,其CMC培养基最适pH为6.0,培养温度为40℃,最佳产酶时间为5d.以MY菌株为出发菌株,分别采用紫外线和硫酸二乙酯诱变,以透明圈直径与菌落直径的比值(HC值)提高30%以上或菌落形态发生明显变异为筛选指标,共筛选到97株突变株;通过测定粗酶液CMC酶活力,从中筛选出29株CMC酶活力提高30%以上的菌株;结合突变菌株的传代稳定性实验,最后筛选得到1株性能优良的霉菌MY004突变株,其CMC酶活力比原始菌株MY提高了80.6%.     

赖氨酸对果胶酶产生菌Asp.3.396白孢子突变株生长及产酶的影响

果胶酶产生菌Asp,3.396经辐射诱变,筛选出一株白色孢子突变株,该突变株孢子为白色,酶液的色泽较浅,此种突变株性状有利于果品加工工艺,可提高果汁果酒等产品质量,但该突变株生长周期较长,产酶性能不稳定,当培养基内加入赖氨酸后,此突变株生长发育好,产酶期提前,产酶性能稳定,其酶液加入到苹果等五种果实后,显著提高了出汁率,并对草莓和柑桔果实的果汁澄清度也有所提高。     

米曲霉(Aspergillus oryzae)沪酿3.042内切型纤维素酶的分离纯化与鉴定

为了解米曲霉纤维素酶在物料分解过程中的作用,从米曲霉沪酿3.042成曲中提取粗酶液,利用DNS法分析了粗酶液中外切酶、内切酶及β-葡萄糖苷酶的活力.用刚果红染色法确定了沪酿3.042成曲粗酶液中含有4种内切型纤维素酶,分别称为Cx酶Ⅰ,Cx酶Ⅱ,Cx酶Ⅲ和Cx酶Ⅳ.经DEAE-Cellulose-52离子交换层析,0.15,0.20,0.25,0.30mol/L NaCl洗脱峰均测得内切型纤维素酶活性,制备电泳纯化得到4个内切型纤维素酶组分,SDS-PAGE结果显示,Cx酶Ⅰ,Cx酶Ⅱ,Cx酶Ⅲ为单体酶,分子质量分别为31 800,34 000,26 000u,Cx酶Ⅳ含有4个亚基,分子质量分别为14 000,23 600,26 000,33 500u.粗酶液中内切型纤维素酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为4.0.     

脂肪酶菌株筛选、产酶条件优化及粗酶性质研究

从西藏传统食品中分离出一株生产胞外脂肪酶的菌株,通过分子鉴定和形态观察,确定其为黑曲霉AN0512.本文优化了AN0512的产酶条件,并研究了粗酶性质.结果表明,采用植物油1%(v/v)、酵母提取物1%(w/w)、KH2PO40.2%(w/w)、MgSO40.05%(w/w)、KCl0.05%(w/w)等组成的培养基,接种量为1.5%(v/v)时,在28℃、180r/min下培养96h后,发酵液中脂肪酶活性最大达到30IU/mL.在30℃、pH7.0的酶反应条件下粗酶的脂肪酶活性达到最大;在60℃时粗酶仍保留60%以上的脂肪酶活性,显示其较好的耐热性;Ca2+、Fe2+、Co2+、Mg2+、Mn2+能促进粗酶的活性,其中Fe2+的促进作用最大.粗酶液中应含有活性较高的、耐热的低温金属脂肪酶.     

长蛸胃肠道产蛋白酶菌的筛选及粗酶性质研究

通过透明圈法从长蛸胃肠道内筛选出4株产蛋白酶的菌株, L 1、L 2、L 3、L 5, 采用偶氮酪蛋白法测定粗酶液蛋白酶活力, 采用SDS PEAG活性电泳测定粗酶液中具有蛋白水解活性的蛋白酶的种类及分子量. 菌株L 2产蛋白酶比酶活最高, 达到4.80U/μg, 菌株L 1比酶活最低为3.31 U/μg. 菌株L 2粗酶液中含有4种酶活较高的蛋白酶, 分子量分别为105.2、86.9、69.3、37.8kD, 其他3株菌株的粗酶液中各蛋白酶分子量相近. 菌株L 1和L 2蛋白酶最佳反应温度为40℃, 最佳反应pH为8.0; L 3产蛋白酶的最佳反应温度为50℃, 最佳pH为7.0; 菌株L 5产蛋白酶在温度为60℃, pH为8.5时有最大酶活力.     

黑曲霉糖化酶的纯化及特性鉴定

采用硫酸铵高饱和度一步沉淀,Sephadex G-25脱盐,DEAE—Toyopearl离子交换层析,Sepharose S—100 HR凝胶过滤法,从黑曲霉糖化酶粗酶液中纯化出电泳均一的糖化酶。其分子量为73～75Kd,等电点为pH3.3,最适pH为4.2,最适反应温度为60℃,对可溶性淀粉的K_m值为7.56。该糖化酶的含糖量为17.9％,此外还测定了其氨基酸组成及含量。     

地热田碱性蛋白酶菌株的选育与酶性质的研究

从温泉附近土样中成功分离到一株高温碱性蛋白酶产生菌株H-1,经初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus).菌株H-1最佳产酶的发酵时间为67.5h,该酶在30～70℃酶活性随温度升高而增强,70℃酶活性达到最高,在pH7.0～11.0范围内较稳定,从菌株H-1液体发酵液中提取粗酶液,经CMC-I阳离子交换层析和SepHadex G-75凝胶层析,得到单一组分;通过Native-PAGE、SDS-PAGE电泳鉴定,粗酶至少含有3种碱性蛋白酶同工酶;单组分碱性蛋白酶的比活力为3875U,相对分子量约为31KDa.     

用PEG／（NH4）2SO4双水相体系萃取糖化酶

用ＰＥＧ（聚乙二醇）／（ＮＨ４）２ＳＯ４双水相体系从黑曲霉粗酶液中萃取糖化酶，探讨了对糖化酶分配系数，总蛋白分配系数及糖化酶回收率的影响因素，确定萃取糖化酶的最佳操作条件。     

两水相系统萃取糖化酶的相平衡

含有聚乙二醇(PEG)和硫酸铵(NH_4)_2SO_4的两水相系统,能有效地用于从发酵液中提取糖化酶。研究表明:随着PEG平均分子量降低、成相组分浓度的适当增加以及加入较高浓度的无机盐,均能提高酶的分配系数。PEG浓度增大,(NH_4)_2SO_4浓度的减小有利于相比的增大。在同一条系线上,相比的确定应从提取收率和酶的浓缩两方面综合考虑。已发现,在含有26%PEG400-16%(NH_4)_2SO_4,pH4.4的系统中(相比1.2),糖化酶的分配系数为47,收率为96%。     

一株高温蛋白酶高产菌株产酶条件的优化

对一株高温蛋白酶高产菌株枯草芽孢杆菌BY25的发酵培养基组成与产酶条件进行了优化。正交试验结果显示培养基中各因子对产酶影响从高到低为:豆饼粉、葡萄糖、硫酸镁、麸皮、磷酸氢二钠、氯化钙。在此基础上进行培养基组成优化,将豆饼粉、麸皮混合氮源改为以豆饼粉为单一氮源进行蛋白酶发酵。单因素试验发现,在单一氮源培养条件下,培养基中各因子对产酶影响从高到低依次为:豆饼粉、葡萄糖、氯化钙、磷酸氢二钠。除微量氯化钙外,金属盐,尤其是金属硫酸盐的添加对产酶有显著抑制作用。此外,培养初始pH和培养时间对产酶有显著影响,接种量也有一定影响。通过绘制120 h产酶曲线发现,BY25产酶曲线为双峰,产酶曲线顶峰出现在发酵后72 h,优化后BY25发酵培养基各组分添加量为豆饼粉60 g/L、葡萄糖60 g/L、氯化钙 0.5 g/L、磷酸氢二钠 4 g/L,接种量为4.5%～5%,初始培养pH为8.0。优化产酶培养基和产酶条件后,发酵液酶活力可达到101.1 μmol/(min·mL)。     

底物扩散对分子筛固定化葡萄糖淀粉酶性能的影响

对分子筛固定化葡萄糖淀粉酶在固定床反应器中淀粉液化液的扩散和对固定化酶酶促反应的影响进行了研究;并与反应动力学模型相关联,较系统地探窿了底物溶液流速、底物溶液浓度、载体粒度、载体再造孔等因素对固定化葡萄糖淀粉酶活力的影响;提高了通过再造孔成型能够有效减小外扩散和内扩散的影响,显著提高固定酶的活性。     

7，8-二甲基-10-（D-1-核糖醇基）-异咯嗪粗产品的HPLC-MS分析

报道了利用HPLC—MS方法分离分析半合成工艺生产的7，8-二甲基-10-（D-1-核糖醇基）-异咯嗪粗产品的方法．该方法以C18柱为色谱柱，甲醇／水为流动相，通过优化色谱条件，使产品中各杂质组分都得到了很好的基线分离．并对产品中各组分分别做了定性指派和定量分析．     

双子表面活性剂与原油组分相互作用研究

针对五里湾油田长6油藏地层水和脱水原油特征,双子表面活性剂A2可以实现超低界面张力。为了探索双子表面活性剂与原油组分间的构效关系,采用原油柱色谱分离方法对原油各组分进行了分离,获知了原油的基本组成;并对双子表面活性剂A2与原油各组分之间的界面张力进行了测定。结果表明,该表活剂在0.5~0.02%的浓度范围内均具有高的界面活性,可以令原油实现超低界面张力,证实了原油中非烃组分对超低界面张力的产生具有至关重要的作用;即双子表活剂与非烃组分之间存在协同效应。     

麸曲糖化酶活力测定方法探讨

糖化酶活力是制曲过程中的一个重要指标。建立了3,5-二硝基水杨酸(DNS)结合连续流动化学分析仪(API)检测麸曲糖化酶活力的方法。结果表明:通过t检验,次碘酸盐法、DNS法和DNS优化法测定糖化酶活力均无显著性系统误差,DNS优化法的误差值最低为13.1 U/g,RSD值为1.97%。通过F-检验双样本方差分析,DNS优化法较快速滴定法、DNS法测定麸曲糖化酶活力的精密度均有显著性提高,且具有简便、快捷的特点。     

原油中阴离子表面活性剂的分离方法

建立一种快速简便地将驱油用阴离子表面活性剂从原油中分离出来的方法 .即在极性硅胶柱上用不同极性的溶剂淋洗分离 ,将阴离子表面活性剂富集在淋洗液中 .用指示剂法及红外光谱法对分离情况进行检测 .对表面活性剂的定量测定表明 ,回收率可达 99%± 2 %     

枯草芽孢杆菌麦芽糖诱导型启动子Pglv-M1的改造

通过定点突变对麦芽糖诱导型启动子Pglv-M1进行改造,提高启动子启动能力。分析Pglv-M1的Sextama-35区与Pri-bmow-10区,通过对这些区域模拟随机突变,软件打分后获得最高分的新片段。将新启动子与载体p HCMC04-sva连接,并在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 1A857中诱导表达,每12 h取粗酶液进行酶活测定。研究结果表明:除突变启动子Pglv-35以外,其余突变体启动效果均有所下降,有突变体构成的表达载体Pglv-35-pHCMC04-sva诱导表达后,得到的单位粗酶活力最高点出现在36 h处,较突变前提高1.31倍。PglvM1作为诱导型启动子Pglv的改造产物,其各个区域的相互影响较为紧密。通过对启动子关键区域单独或同时突变,仅获得一组启动能力有所提高的启动子Pglv-35,这为今后针对启动子的思考、研究方向提供参考。     

稻瘟病菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织诱导的影响及抗性筛选

利用稻瘟病不同生理小种菌株的液体培养提取的粗毒素对水稻成熟胚进行处理,粗毒素液对水稻胚芽的生长和胚的诱导有严重的抑制作用,与对照相比差异性极显著;不同浓度的粗毒素提取液其作用效果不同,随着毒素浓度的增大或是作用时间性的延长,水稻诱导受到的抑制作用越强。水稻成熟胚组织培养中进行抗稻瘟病菌突变体筛选的毒素浓度在30%较好;浸泡水稻成熟胚以处理72h愈伤诱导和分化效果较好;在进行抗稻瘟病突变体筛选中,以用含毒素的培养基进行诱导愈伤的处理的筛选取效果较好。