枯草芽孢杆菌BS-6液体发酵条件的研究

通过单因素实验和正交实验,研究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS-6的液体发酵培养基和工艺条件,确定最佳的培养基为:蔗糖3%,蛋白胨1%,酵母膏0.5%,KH2PO4 0.45%,(NH4)2SO40.25%,碳酸钙0.2%;最适发酵条件为:温度30℃,pH值7.0,装量20ml/250ml锥形瓶,转速200r/min。     

苦蘵组织培养技术初探

为建立药用植物苦蘵稳定高效的组织培养体系,以苦蘵的子叶为外植体进行离体培养,对培养条件进行探索和优化.结果表明:苦蘵种子在1/2 MS培养基中萌发可培养出适于后续试验的健康子叶;诱导愈伤组织和不定芽的最佳培养基为含6-BA(3 mg/L)和NAA(0.05 mg/L)的MS培养基,其愈伤组织诱导率达100%,从愈伤组织诱导不定芽率最高达78%;将生长良好的2~3cm的不定芽接种到1/2 MS生根培养基中,两周左右可形成较好的根系,生根率可达100%.     

利用Minitab优化耐高温淀粉酶发酵培养条件

利用Minitab软件中的Plackett-Burman实验设计和响应面分析法,对耐高温α-淀粉酶产生菌Bacillus subtilis C1的发酵培养条件进行优化。在单次单因子法得出的适宜条件基础上,综合考虑所有影响因素,对培养条件进行统计分析,得到Bacillus subtilis C1产耐高温α-淀粉酶的最佳培养条件。研究结果表明:优化培养基的组成(200 mL)为麸皮2.16 g,棉粕粉1.98 g,酵母粉0.40 g,NaCl 1.00 g,CaCl2 0.40 g,淀粉0.10 g。培养基优化后的酶活为2 329 U/mL,约是培养基优化前酶活的12.55倍,酶活得到显著提高。     

鲍肠道益生菌芽孢杆菌A3440菌株培养基及发酵条件优化

对一株来自于杂色鲍(Haliotis diversicolor)肠道并经证实具有显著促进其生长及免疫活性的同温层芽孢杆菌(Bacillus stratosphericus)A3440菌株进行培养基及发酵条件的优化研究,为该益生菌应用于鲍及其他水产动物的健康养殖奠定基础.以细菌芽孢率和蛋白酶活力为检测指标,采用单因素试验和正交设计试验优化发酵培养基组分及发酵条件.结果显示,该菌最佳发酵配方为:蛋白胨7g/L,酵母膏7g/L,NaCl 20g/L,CaCl20.20g/L;最佳发酵条件为:初始pH 9.0,培养温度30℃,种子液接种量8%,装液量30 mL(250 mL锥形瓶),培养时间24h.优化后芽孢率为94.3%,较基础培养基提高8.77%;蛋白酶活力为294.44U/mL,较基础培养基提高76.67%.     

降胆固醇干酪乳杆菌HC12的培养条件优化

干酪乳杆菌HC12具有降低培养基中胆固醇的能力,通过单因子、正交试验对其培养条件和培养基进行了优化.在MRS培养基的基础上,培养基最佳配比为酵母粉2.0%,葡萄糖2.5%,胰蛋白胨1.5%,牛肉膏1.0%;最适的起始pH值为6.0,最适温度为28℃.优化后的培养基、培养条件使干酪乳杆菌HC12的生长量(OD值)达到了1.502,去除胆固醇的量达到54.3 ug/mL.     

γ-聚谷氨酸高产菌株的选育及发酵条件优化

以聚谷氨酸(γ-PGA)产生菌Bacillus subtilisHD-23为出发菌株,采用紫外线-硫酸二乙酯-亚硝基胍三因素的多组复合诱变,获得菌株Bacillus subtilisHD-F9,γ-PGA产率达到10.72 g/L,提高了56.3%,且传代稳定.对菌株Bacillus subtilisHD-F9的发酵培养基配比进行正交设计优化,并对其摇瓶培养条件进行优化,得到最佳发酵条件为:葡萄糖50 g/L,酵母膏8 g/L,谷氨酸钠40 g/L,250 mL三角瓶装液40 mL,初始pH 7.5,37℃,200 r/min,振荡培养48 h,γ-PGA产量可达14.88 g/L,提高38.8%.     

一株产低温碱性淀粉酶蕈状芽孢杆菌的分离筛选和发酵优化

本研究的目的是从生态环境独特而复杂的西藏林芝地区的土壤样品中挖掘所蕴藏的特殊淀粉酶微生物资源.采用淀粉酶功能筛选的方法获得一株低温碱性淀粉酶生产菌株,编号为3F1.其酶活最适条件为10℃、pH 10.2.通过16S rDNA序列分析法鉴定该菌株为蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides),并将其命名为Bm3F1.通过发酵条件的逐步优化,最终确定其最佳发酵条件为：发酵培养基中添加1.5%可溶性淀粉,培养基初始pH 7.2,装液量10 mL/250 mL,菌体接种量9.0%,发酵温度30℃,发酵时间18 h,经优化后可将菌株的酶活提升至13.58 U/mL.表明从西藏林芝地区分离的Bm3F1具有在低温和碱性条件下产较高酶活淀粉酶的特性.     

一株地衣芽孢杆菌脲酶生产的发酵优化和酶学性质

对中国南海海绵Halichondria regosa中分离得到脲酶产生菌Bacillus licheniformis B81进行脲酶生产的发酵条件优化;并对其脲酶特性进行测试。通过对基础培养基筛选后,对选定基础培养基进行了Plachett-Bunman重要因素筛选,最终选定的重要因素通过单因素实验得到了最终的培养基配方为:葡萄糖25 g/L,蛋白胨12.5 g/L,牛肉膏5 g/L,酵母粉6.5 g/L,KH2PO42 g/L,NaCl 1 g/L,尿素0.625%(W/V),Ni(NO3)20.006 25%(W/V),H2O 1 L。优化后,使得脲酶的产量提高到了原培养基的170%。菌株所产生的脲酶的最适反应pH为7.0,最适温度为40℃,Pb2+、Cu2+对脲酶活性具有抑制作用。     

一株菲降解菌的分离、鉴定及最佳培养条件的优化

从石油污染场地分离到一株可降解菲的菌株SP 3,经生理生化鉴定和16S rDNA序列对比分析,初步鉴定该菌株为分枝杆菌（Mycobacterium sp.）,该菌能够以菲为唯一碳源,在菲浓度为100 μg/mL的无机盐培养基中,28 ℃摇床培养7 d降解率达到了99%以上。对该菌进行了最佳发酵培养基及培养条件的优化研究,其最佳培养基配方为淀粉1%、牛肉膏1%、Na2HPO4 0.2%、NaH2PO4 0.2%,并通过单因素实验法确定了最佳培养条件为温度30 ℃,初始pH =7.5,培养时间12 h。     

苏云金芽孢杆菌HD—1发酵工艺研究

在直径100 mm,体积4.7 L的环隙气升式内环流反应器内,考察了不同通气量及培养基含固量对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)HD-1发酵水平的影响.实验表明,在该反应器中,Bt-HD-1发酵的最佳通气量为1.75 L/min,最佳培养基含固量为3.5%.此外,通过研究通气量和培养基含固量对终止DO及终止pH的影响发现,在环隙气升式内环流反应器中,Bt-HD-1发酵的正常指标为,终止pH＞7.0,终止DO＞60%.     

B.licheniformis NG521-1发酵培养基优化的研究

碳源、氮源、各种维生素和金属离子对微生物培养有重要影响.先采用单因素,后采用复合因素的方式,确定碳源和氮源,然后采用中心复合设计分析法对地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)NG521-1的培养基主要成分进行分析和优化,根据预测最优发酵水平的配比,调整培养基,使发酵液中菌体生长量大大提高,由原来0.35×108个/mL提高到1.2×108个/mL.     

细脚拟青霉产胞外抗氧化活性成分培养基的优化

采用液体摇瓶培养的方法,以DPPH自由基清除率为指标,对一株细脚拟青霉产胞外抗氧化活性成分培养基进行了优化.确定了其产抗氧化活性物质的最佳培养基.结果表明最佳培养基为:碳源为蔗糖和麦芽糖组成的复合碳源;氮源为酵母浸出粉;微量元素及生长因子为KH2PO4、柠檬酸铵和VB;正交实验结果表明最佳培养基配方为蔗糖2%、麦芽糖1%、酵母浸出粉1.5%、KH2PO4 0.5%、柠檬酸铵0.04%、VB 0.03%.培养基优化后,该菌株发酵液中代谢产物的扰氧化活性可达73.47%.     

响应面法优化Bacillus subtilis HD-F9产γ-聚谷氨酸发酵培养基

采用响应面法对Bacillus subtilis HD-F9发酵产γ-聚谷氨酸(γ-PGA)的培养基成分进行优化.首先通过Plackett-Burman设计对培养基中影响产量的7个因素进行评价,筛选出具有显著效应的影响因素葡萄糖、酵母膏和谷氨酸钠.然后进行最陡爬坡实验逼近最大产γ-PGA区域,最后通过Box-Behnken设计及响应面分析确定了葡萄糖、酵母膏和谷氨酸钠的最佳浓度分别为60.03 g/L、8.1 g/L、41.7 g/L.优化后,γ-PGA的产量达到14.56 g/L,比优化前的9.5 g/L提高了53.26%.     

秦巴山区及毗邻地区野生金钗石斛组织培养与快速繁殖

为建立金钗石斛快速繁殖体系,以金钗石斛茎段为试验材料,对诱导培养基、增殖培养基、生根培养基、炼苗基质等组培苗生产的关键环节因素进行了优化.结果表明：腋芽诱导培养基1/2MS＋6-BA (0.9 mg/L)＋NAA(0.2 mg/L)为最佳;丛芽诱导培养基1/2MS＋6-BA(0.5 mg/L)＋60%香蕉汁(100 mL/L)为最佳;生根培养基1/2MS＋IBA(0.6 mg/L)为最佳;移栽基质为锯末∶树皮∶刨花为2∶4∶4可使幼苗成活率高达90%.     

响应面法优化萎缩芽孢杆菌BsR05发酵培养基

为了提高萎缩芽孢杆菌Bacillus atrophaeus BsR05发酵液的芽孢产量,采用响应面法对BsR05发酵培养基的最佳工艺条件进行了优化。通过Plackett-Burman实验,筛选出玉米粉、(NH_4)_2SO_4和MgSO_4·7H_2O为影响产孢的主要因子。采用最陡爬坡路径法确定3个因素的响应中心点及最适浓度范围,最后,通过Box-Behnken设计建立主要培养基成分与芽孢产量之间的回归关系,并确定发酵培养基最佳配方为葡萄糖5 g/L、玉米粉15.9 g/L、豆粕40.0 g/L、K_2HPO_4 3.0 g/L、KH_2PO_4 1.0 g/L、(NH_4)_2SO_4 2.1 g/L、MgSO_4·7H_2O 0.40 g/L、MnSO_4 0.02 g/L。经重复实验验证,平均芽孢含量与预测芽孢含量基本一致,发酵液中BsR05的芽孢产量从优化前的4.73×10~9 CFU/m L提高到6.02×10~9 CFU/m L。     

阿魏酸酯酶产生菌的培养条件优化

通过均匀设计法和二次多项式逐步回归,对产阿魏酸酯酶的培养基配方进行优化,得出优化的培养基配方(质量分数):0.30%KH2PO4,0.60%Na2HPO4.7H2O,0.01%NaCl,0.80%酵母粉,1.33%麦糟.在此基础上,用单因素法考察发酵条件对产酶的影响,确定最佳条件:初始pH值为6.0,培养温度为28℃,摇床转速为210 r.min-1,发酵时间为68 h,装液量为75 mL,接种量为5%,麦糟粒径为0.054 mm.采用优化的培养基组分进行最优发酵培养,优化后的阿魏酸酯酶酶活达到119.36μkat.L-1,比优化前提高了32倍.     

碱性木聚糖酶产生菌的筛选及培养基成分的优化

通过集富培养、水解圈鉴定、酶活检测,从不同地点采集富含木聚糖的土样中初筛出10株木聚糖酶产生菌,选取酶活最高的Bacillus sp.No X-18菌株,进行单因素、双因素和培养基成分的综合优化试验.结果显示最佳培养基是:15%蔗糖、1%阿拉伯糖、0.37% NH4Cl、0.37%酵母膏、0.5% K2HPO4、0.02%MgSO4·7H2O,pH 80,其木聚糖酶活力可达74.21 IU/mL.     

花生再生和转化体系的初步研究

以4d龄的泉花10号花生小叶伤为外植体，从25种培养基中筛选出MS＋AgNO3(1.0) 6-BA5.0 NAA2.5培养基为最佳长芽点培养基，MS＋AgNO3(1.0) 6-BA5.0 NAA1.0培养基为最佳长愈伤组织培养基；以4d龄小叶，子叶，胚轴，及子叶与胚轴相连处为外植体在MS＋AgNO3(1.0) 6-BA5.0 NAA2.5培养基上培养，结果小叶是诱导长芽的最佳外植体；研究还发现儿茶酚对农杆菌侵染力有较大的影响。     

降解苯酚细菌的分离及其生理特性研究

从工业废水中分离到两株可以降解苯酚的细菌，初步确定为假单胞菌属(Pseudomonas)和芽孢杆菌属(Bacillus),分别命名为C1和C2，菌株C1和C2都能在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基中生长，并且确立了它们的最适培养条件。在苯酚浓度适宜的条件下，不同氮源对于苯酚的降解效率有一定的影响．     

一株对氯甲苯降解菌株种子扩大培养基的优化

以细胞浓度为菌体生长指标,探索并优化对氯甲苯降解菌株Bacillus licheniformis ycsd01 种子培养基中碳源、氮源、主要无机盐等培养基组分及其用量,最终获得菌株适宜的培养基配方.结果表明：对氯甲苯降解菌株的最佳种子培养基配方为2.0g·L^-1对氯甲苯,8.0g ·L^-1葡萄糖,2.5 g·L^-1 NH4Cl,4.5 g·L^-1 K2HPO4,2.0 g·L^-1 KH2PO4,0.2 g·L^-1 MgSO4,0.05 g·L^-1MnSO4,0.01 g·L^-1 FeSO4· 7H2O和0.03 g·L^-1 CaCl2·2H2O.菌株在优化后较优化前的生长曲线延滞期缩短,指数期和稳定期变长,更晚地步入衰亡期,各生长时期的细胞数量均显著增加,有望用于大规模生产.