hNIS转基因介导131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到pcDNA3.1(+)-FLAG载体,获得重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG.采用脂质体转染的方法,将pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG质粒导入到鼻咽癌细胞株CNE2,G418筛选得到稳定表达hNIS鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS,体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取和外流情况.CCK8试剂盒检测131碘对鼻咽癌细胞增殖的作用,AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)检测131碘作用后鼻咽癌细胞凋亡情况.结果:成功克隆hNIS基因,并建立能稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS.CNE2-hNIS对125碘的吸收量比CNE2高约15倍,但在无碘的环境中,细胞内滞留的碘外流迅速,有效半衰期约8 min.131碘在72 h后对CNE2-hNIS的增殖产生抑制作用,细胞早期凋亡率增加,并随着131碘浓度的增加,作用逐渐增强(P<0.01).结论:从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染鼻咽癌细胞后,能使鼻咽癌细胞发挥高水平吸碘功能,131碘能够抑制转染hNIS的鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

河套蜜瓜ACC氧化酶基因cDNA部分片段的克隆和序列分析

以河套蜜瓜(Cucumis melo L．ev Hetao)成熟果实为材料，用硫氰酸胍法提取总RNA，以oligo(dT)15为引物，反转录合成cDNA，利用一对甜瓜ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-1-earboxylate oxidase，ACO)基因cDNA的特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增。获得了预期大小的cDNA片段．将此片段克隆于pUCl9质粒中，进行DNA序列分析．序列分析结果表明该片段为545bp，编码甜瓜ACO的第126至第306个氨基酸．该河套蜜瓜ACO基因cDNA序列与Andes甜瓜、Cantaloup charentais甜瓜和哈密瓜的相应序列进行比较，其核苷酸序列与Andes甜瓜的同源性为99．4％；与Cantaloup charentais甜瓜和哈密瓜的同源性均为99．6％。与其对应的氨基酸序列的同源性均为99．4％．     

青岛文昌鱼DAD1样蛋白基因的克隆和同源性分析

dud1基因为一种内源性细胞凋亡抑制子基因，在发育中可能执行着重要功能．我们通过对青岛文昌鱼18小时神经胚cDNA文库进行测序，获得文昌鱼dud1样基因的2个cDNA片断，经拼接首次得到含有完整读框的文昌鱼dud1样基因的cDNA序列，其演绎的氨基酸序列与人、鼠、鸡、非洲爪蟾、果蝇、线虫、扁豆、番茄的DAD1蛋白的同源性分别为73．5％、73．5％、67．5％、70．9％、67．5％、55．5％、41．9％、41．8％．结果证实青岛文昌鱼dud1样基因在进化上具有高度的保守性，并且在进化上更接近于脊椎动物．     

两株NIH-3T3细胞间的基因表达差异研究

通过与细胞膜表面的受体TNFRI结合．肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可诱导凋亡或坏死．有两株NIH-3T3细胞在TNF刺激下分别存在两种死亡情况：NIH-3T3(R)为caspase依赖的凋亡；而NIH-3T3(S)的死亡则不依赖caspase．为了深入研究两株细胞在TNF-α诱导下选择不同死亡方式的机理，本研究利用cDNA表达谱芯片对这两株细胞的基因表达差异性进行研究，筛选出差异表达的基因，利用逆转录PCR验证，从而鉴定出两个可能与细胞死亡相关的基因：calpain6和RIP3．     

人补体调节蛋白基因MCP和DAF的克隆及其在E. coli中的表达

人膜辅基蛋白MCP(membrane cofactor protein)和降解加速因子DAF(decay-accelerating factor)是免疫排斥反应中补体系统活性调节的重要蛋白．以PCR的方法分别从成人肝cDNA文库和胎儿骨髓cDNA文库中扩增得到MCP和DAF基因，克隆入载体pUC19，再以所构建质粒为模板，以PCR的方式在二基因间加入编码柔性连接肽的DNA序列，构建融合基因MCP-DAF，并克隆入pUCl9质粒．将MCP、DAF及MCP-DAF亚克隆至大肠杆菌表达载体pET-32a( )或pET-32b( )，构建表达载体MCP-pET32a，DAF-pET32b及MCP-DAF-pET32a，分别导入E．coli BL21菌株中表达，得到预期分子质量大小的蛋白．     

阿糖胞苷与肿瘤坏死因子的联合应用对HL-60细胞凋亡的影响

目的观察不同浓度的肿瘤坏死因子(Tumor recrosis factor,TNF-α)、阿糖胞苷(Arabinosylcytosine,Ara-c)联合应用对HL-60细胞凋亡的影响.方法通过荧光染色观察及基因分析检测不同浓度的肿瘤坏死因子、阿糖胞苷联合应用对HL-60细胞凋亡的影响.结果浓度为1 500 U/mL的肿瘤坏死因子、阿糖胞苷联合应用比其他浓度药物应用细胞凋亡的百分率更高,Bcl-2基因表达下调.结论联合应用浓度为1 500 U/mL的肿瘤坏死因子、阿糖胞苷诱导白血病细胞凋亡效果明显.     

骆驼蓬总碱对裸鼠移植性肿瘤生长的影响

骆驼蓬总碱是从骆驼蓬(Peganum harmala L)种子中提取的总生物碱,研究证明它对小鼠多种移植性肿瘤有抑制作用,体外对胃癌MGC-803、肝癌BEL-7402、鼻咽癌CNE_2细胞株均有杀伤作用。本实验用裸鼠移植人胃癌MGC-803、肝癌BEL-7402、鼻咽癌CNE_2,观察骆驼蓬总碱对人胃癌,肝癌和鼻咽癌在体内的疗效。采用腹腔注射给药,结果表明对胃癌MGC-803每周给药二次,共给9次,在60mg/kg·次剂量下抑瘤率为48.4％;对肝癌BEL-7402每周给药二次,共给9次,在60mg/kg·次剂量下抑瘤率为60％,40mg/kg·次剂量下抑瘤率为30.9％,DDP(0.8mg/kg)抑瘤率为23％,而骆驼蓬总碱(40mg/kg)+DDP(0.8mg/kg),抑瘤率达54.7％;对鼻咽癌CNE_2每天给药一次,连给10天,在60mg/kg·天剂量下,抑瘤率为60％,在40mg/kg·天剂量下,抑瘤率为45％、42.8％。骆驼蓬总碱已用于临床治疗消化道肿瘤病人,有一定疗效并能改善病人的症状。本实验结果提示骆驼蓬总碱用于治疗肝癌和鼻咽癌的可能牲。     

甜瓜多聚半乳糖醛酸酶基因cDNA的克隆和序列分析

以甜瓜品种河套蜜瓜成熟果实mRNA为模板，经反转录合成和PCR扩增得到编码多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase，PG)基因全长cDNA，将其克隆于pUC19质粒中获得重组质粒pCMPG．此cDNA长1183bp，包括一个393个氨基酸残基组成的开放阅读框架，与已报道的甜瓜PG基因cDNA核苷酸序列比较同源性为99．3％，相应的氨基酸的同源性为98．5％．     

骨髓增生异常综合征的细胞凋亡分子机制(综述)

骨髓增生异常综合征的基本病理特征是骨髓的无效造血。骨髓造血细胞的凋亡增加是导致无效造血的主要原因之一。目前认为 ,骨髓基质细胞分泌的细胞因子如肿瘤坏死因子 (TNF -α)、转化生长因子 β(TGF - β) ,Fas受体 /配体的高表达 ,凋亡调节基因的异常 ,如促凋亡基因 (Bax、Bad)与抗凋亡基因 (Bcl- 2、Bcl-X)的比值增高 ,及半胱氨酸 /天冬氨酸特异的蛋白酶 (caspases)的过度激活等 ,与病人的骨髓造血细胞凋亡增加有关。     

苜蓿花叶病毒复制酶基因全长cDNA植物表达载体的构建和对烟草的转化

将苜蓿花叶病毒中国分离株(Alfalfa mosaic virus Chinese isolate，A1MV-Ch)的复制酶P2亚基(90 kD蛋白)基因的全长cDNA构建到植物表达载体pROKⅡ中，得到重组植物表达载体pAIMV-FL．用三亲融合法导入农杆菌LBA4404，并转化烟草，经PCR检测，获得了含全长cDNA的转基因烟草植抹．     

诸葛菜EPSPS基因5’端的克隆和序列分析

烯醇式丙酮基莽草酸—3—磷酸合成酶(5—enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase,EPSPS)是植物和微生物莽草酸途径中的一个必需合成酶，植物中该基因的超量表达或该基因中某些氨基酸突变可以产生对除草剂草甘膦(g1yphosate)的耐性．采用5’—RACE技术从诸葛菜(0rychophragmus violaceus)叶中克隆出一条长743bp的cDNA片段．序列分析结果表明：该cDNA与其它植物的EPSPS基因具有相当高的核苷酸序列同源性。其所编码的氨基酸序列与欧洲油菜(Brassica napus)同源性最高为90％，与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、玉米(Zeamays)、西红柿(Lycopersicon esculentum)、烟草(Nicotiana tabacum)和水稻(Oryza sativa)的同源性分别为88％，81％，64％，62％和71％．     

人肝癌细胞移植瘤QGY-9204中细胞调亡和坏死并存现象的初步分析

关于细胞调亡和坏死的判别标准及其相互关系已逐渐成为研讨的热点．研究表明,p53基因的表达导致细胞周亡,抑制肿瘤形成．在将Ad／p53导人人肝癌细胞移植瘤QGY－9204的研究中发现,实验组与对照组的移植瘤中均出现凋亡特征指标（DNA梯型条带、凋亡小体等）．而离体培养的肝癌细胞QGY－7703并未检出细胞凋亡现象．那么,实体瘤的DNA梯型条带与调亡和坏死有何关系？研究表明,瘤体内细胞阔亡和坏死并存,与对照组相比,实验组的瘤体积较小,坏死面积小,凋亡比例较高．对移植瘤QGY－9204中细胞调亡和坏死的特征及其并存现象的可能原因进行了初步分析,推断：在该移植瘤内,凋亡和坏死并非是细胞死亡的两种相互排斥的选择,它们可能相继发生和互为影响．     

芸苔EPSPs基因cDNA的克隆和表达载体的构建

作者从芸苔(Brassica campestris)中用RT-PCR方法获得了EPSPs基因的cDNA．与其他物种中的EPSPs基因进行了比对和分析发现：芸苔EPSPs基因的cDNA与欧洲油菜的同源性最高,为93％,与水稻同源性最低,仅为64％．将芸苔EPSPs的ORF片段插入到GTK融合表达载体中,为EPSPs的原核表达奠定了基础。     

细胞凋亡与肿瘤治疗

细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种生理机制,是由基因编码的控制细胞主动参与“自杀”的过程.细胞凋亡与肿瘤密切相关,已成为肿瘤治疗研究的新思路.本文主要阐述细胞凋亡及生理生化特征和肿瘤的形成与肿瘤的治疗.     

砷剂抗肿瘤作用分子机制研究进展

近年来，国内外对砷剂与肿瘤的研究发展很快．研究发现砷剂抗肿瘤作用的分子机制可能包括：(1)诱导细胞分化；(2)细胞周期阻滞；(3)直接损伤DNA；(4)诱导细胞凋亡．其中主要是通过诱导凋亡实现抗肿瘤作用。     

草鱼生长激素基因的克隆及原核表达研究

应用RT-PCR技术从草鱼脑垂体总RNA中克隆草鱼生长激素cDNA(cGH)，全长669bp，含开放阅读框633bp，编码210个氨基酸，分子量为23．6kDa，等电点为6．28；与已报道的草鱼GH有12个碱基、3个氨基酸残基的差异，同源性为98％．将草鱼cDNA定向插入原核表达载体pGEX-4T-1，构建了重组草鱼GH基因质粒pGEX-GcGH，经IPTG诱导，pGEX-GcGH在大肠杆菌中可表达49．6kDa的融合蛋白．     

人丝氨酸蛋白酶抑制剂B3基因的生物信息学分析

人丝氨酸蛋白酶抑制剂B3 SERPINB3能抑制半胱氨酸蛋白酶,具有抗细胞调亡、促进细胞增殖和迁移作用,且与许多肿瘤的发生与发展密切相关.通过基因电子克隆(in silico cloning)获得SERPINB3基因全长cDNA序列(1779 bp),编码由390个氨基酸组成的蛋白质.核酸序列分析表明:SERPINB3基因位于人体18号染色体长臂(18q21.33),基因组跨越80373285 bp,含有个16外显子,15个内含子,其cDNA序列上总共有45个酶切位点.SERPINB基因核酸序列同源性分析显示,人类与黑猩猩的亲缘关系较近,与白眉猴和猕猴的亲缘关系是最远.SERPINB3蛋白序列同源性分析显示,人类和黑猩猩亲缘关系较近,和苍疣猴亲缘关系较远.SERPINB3相互作用蛋白的生物信息学分析表明:与SERPINB3相互作用的蛋白中,以丝氨酸蛋白酶家族成员居多,且大多在调节炎症反应、细胞增殖分化以及凋亡等方面起着关键作用.本论文通过对SERPINB3基因的生物信息学分析,为SERPINB3的功能和分子进化研究提供更多的生物信息学参考.     

甘蓝磷酯酶D HKD2功能区基因片段的克隆与反义表达载体的构建

以甘蓝(Brassiaca oleracea)为材料，取幼叶分离mRNA，反转录合成cDNA，以cDNA第一链为模板，通过PCR扩增，获得甘蓝磷酯酶D(Phosphorate　Lipid　Dehydrolase，PLD)HKD2功能区的基因片段．对其进行Blast分析，结果表明，分离的目的片段核苷酸序列与Genbank中报道的甘蓝PLD基因相比同源率为99．7％，只有2个碱基发生改变．将得到的PLD基因片段插入植物表达载体pAT940，构建了PLD基因反义表达载体pATC—rPLD，为下一步进行抗逆转基因作物选育打下基础．     

文昌鱼eIF5A基因的克隆和进化学分析

对文昌鱼神经胚cDNA文库进行测序和系统分析，首次从青岛文昌鱼(Brachiostoma belcheri tsingtauense)中成功得到1个eIFSA基因的cDNA序列，分析其推导的氨基酸序列揭示该基因产物具有eIF-5A家族蛋白质共有的保守区．对其二级结构进行预测，序列同源性分析表明eIF-5A家族基因在所有的真核生物中都高度保守．进化生物学的分析显示文昌鱼的eIF5A基因与脊椎动物的同源性较高，