基于~1H NMR代谢组学技术探究GRP78蛋白对巨噬细胞极化的干预效应

巨噬细胞是肿瘤组织中一类十分重要的免疫细胞,它的M2型极化与肿瘤的恶化密切相关。GRP78蛋白作为肿瘤晚期的生物标志物,可以通过影响肿瘤微环境来促进肿瘤恶化,但GRP78对肿瘤组织中巨噬细胞的分化是否具有干预作用依然未知。本研究利用体外纯化的GRP78蛋白来模拟肿瘤细胞分泌的GRP78,用其处理鼠源巨噬细胞RAW264.7,然后通过~1 H NMR技术的代谢组学方法发现经GRP78处理后细胞中有18种代谢产物,培养基中有14种代谢产物的含量发生了明显变化。通过进一步的代谢通路分析,发现在GRP78蛋白处理后,RAW264.7细胞的糖酵解代谢明显减弱,而脂肪酸和氨基酸代谢加强,这与M2型巨噬细胞的代谢类型一致,表明经GRP78处理后,RAW264.7巨噬细胞向M2型分化。这一发现表明肿瘤微环境中GRP78的存在是肿瘤相关巨噬细胞以M2型为主的重要原因,这也为靶向GRP78的肿瘤治疗提供了坚实的理论依据。     

黄连素通过诱导肿瘤细胞内GRP78膜转位而促其凋亡

通过MTT实验发现,黄连素对结肠癌细胞HCT-116和乳腺癌细胞MCF-7的增殖有明显的抑制作用。Western blotting和实时定量PCR结果显示,经黄连素处理后,肿瘤细胞中凋亡相关蛋白Caspase12和CHOP在转录和翻译水平均明显上调。进一步研究发现,黄连素处理使得内置网分子伴侣蛋白GRP78在表达量不变的情况下,发生了明显的细胞膜转位。利用相应抗体封堵细胞膜上GRP78后,黄连素诱导的细胞凋亡明显缓解,表明肿瘤细胞表面GRP78介导了黄连素诱导的肿瘤细胞凋亡。     

乳腺癌来源外泌体的研究进展

乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤,严重影响女性健康.外泌体作为一种分泌囊泡,由于携带蛋白质、核酸等生物分子,能够介导细胞间通讯,从而参与各种生理病理过程.研究发现,乳腺癌细胞来源外泌体与近端的肿瘤微环境和远端的组织器官相互作用,这些携带肿瘤生物活性分子的外泌体参与调控乳腺癌发生发展的全过程.就近年来乳腺癌来源外泌体在参与构建肿瘤微环境、免疫应答、药物抵抗、诊断和治疗等方面的研究进展进行综述.     

莱菔硫烷对HepG-2细胞Bp/GRP78、caspase-12蛋白影响

研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对内质网相关蛋白Bip/GRP78和caspase - 12蛋白表达的影响,探讨其诱导人肝癌HepG -2细胞的凋亡机制,采用Western Blot方法检测人肝癌HepG -2细胞内Bip/GRP78蛋白的表达,以及采用流式细胞仪检测caspase - 12蛋白的表达....     

葡萄糖调节蛋白GRP78研究进展

葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated p rotein78 kD,GRP78)又称免疫球蛋白重链结合蛋白(immunoglobulin heavy chain binding protein,Bip),是位于内质网上重要的分子伴侣,属热休克蛋白70家族的一员.GRP78分子及其DNA分子序列结构在许多生物物种中高度保守.GRP78在内质网中参与阻止内质网新生肽聚集、调节内质网钙稳态、抗内质网相关性细胞凋亡,以及启动未折叠蛋白反应等细胞生命过程.GRP78生物学功能的研究已经引起生物学家的广泛重视.     

柴胡皂甙促大鼠胰腺腺泡酶分泌作用的特征及胞外Ca2+对其的影响

利用检测胰腺腺泡蛋白分泌量表征胰酶分泌 ,研究柴胡总皂甙及柴胡皂甙单体 促胰腺腺泡酶分泌的量效特征和时效特征 ,并探讨胞外 Ca2 浓度的影响 .结果表明柴胡总皂甙及柴胡皂甙单体 促酶分泌作用随浓度增加而增强 ,且趋向饱和 .柴胡总皂甙促泌作用动力学呈现早期的高促分泌相和随后的低促分泌相 ;而 1 0 - 5 mol/L柴胡皂甙单体 的促泌动力学则出现了前期的低促分泌相 .胞外 Ca2 浓度为零 ,降低了柴胡总皂甙低促泌相的作用 ,并致使腺泡分泌趋向停止 .     

原小檗碱类多靶点抗老年性痴呆症药理作用

 原小檗碱是一类异喹啉生物碱,具有相同的药效基团。本研究检测了以小檗碱和四氢黄藤素为代表的原小檗碱多靶点抗AD效应及分子作用机制。以人神经母细胞瘤SH SY5Y为研究对象,利用Western blot检测药物对细胞全长APP和BACE1蛋白水平的影响;ELISA技术检测细胞外可溶性淀粉样前体蛋白α (sAPPα) 的分泌;酶活性检测试剂盒检测乙酰胆碱酯酶 (AChE) 的活性。结果显示,药物处理细胞24 h后,二者均能显著地抑制BACE1蛋白的表达,并可使sAPPα的分泌显著增加,但未见细胞APP蛋白含量明显变化,同时对该细胞的AchE的活性具有显著的抑制作用。以上结果证明：原小檗碱生物碱药理活性涉及预防和减少Aβ沉积和增强乙酰胆碱对脑胆碱受体的作用,并通过细胞自身的代谢增加具有神经营养作用的sAPPα的分泌。提示此类化合物具有多靶点抗老年痴呆的潜能,通过结构优化改造,将有望获得副作用小的新一代抗AD有效药物。     

柴胡皂甙促大鼠胰腺腺泡酶分泌作用的特征及胞外Ca^2＋ …

利用检测胰腺腺泡蛋白分泌量表征胰酶泌,研究柴胡总皂甙单体Ⅰ促胰腺腺泡酶分泌的量效特征和时效特征,并探讨胞外Ｃａ＾＋浓度的影响。结果表明有总皂甙单体Ⅰ促酶分泌作用随浓度增加而增强,且趋向饱和。柴胡总皂甙促泌作用动力学呈现早期的高促分泌相和随后的低促分泌相;而１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ柴胡皂甙本Ⅰ的促泌动力学则出现了前期的低促分泌相。胞外Ｃａ＾２＋浓度为零,降低了柴胡总皂甙低促泌相的作用,并致使腺泡分泌趋向     

ERK_(1,2)抑制剂联合5-FU对B16细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察ERK_(1,2)抑制剂联合5-Fu对B16细胞增殖和凋亡的影响,并探讨作用机制.方法:用MTT法观察ERK_(1,2)抑制剂、5-FU和联合用药对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率,用RT-PCR观察ERK_(1,2)抑制剂、5-Fu和联合用药对bcl-2和caspase-9的表达的影响.结果:ERK_(1,2)抑制剂联合5-Fu组在抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,均较对照组、单独用药组作用增强,并且下调bcl-2和上调easpase-9的表达.结论:ERK_(1,2)抑制剂联合5-Fu有协同抑制B16细胞增殖,促进凋亡的作用,其机制可能与诱导细胞凋亡,下调bcl-2和上调caspase-9的表达有关.     

胞外ATP影响ZnCl_2诱导烟草悬浮细胞活性和呼吸速率的降低

以烟草悬浮细胞BY-2为材料,探讨细胞外ATP对ZnCl_2诱导的细胞活性降低和呼吸抑制的调节作用.结果表明,随着ZnCl_2浓度逐渐增加,细胞活性、胞外ATP浓度和细胞呼吸速率均随之降低.在400 mmol/L ZnCl_2胁迫细胞的条件下,研究了细胞外ATP对ZnCl_2诱导的细胞活性降低和呼吸抑制的调节作用.结果发现,与400 mmol/L ZnCl_2胁迫下的细胞相比,加入20μmol/L外源ATP到ZnCl2胁迫下的细胞中,会使细胞的活性、胞外ATP浓度和细胞呼吸速率均有显著升高.胞外ATP浓度的变化可能是造成ZnCl_2胁迫下细胞活性受抑制的原因之一,同时胞外ATP对ZnCl_2胁迫下细胞的活性具有一定的调节作用.     

运动损伤修复中外泌体的功能与价值研究

外泌体是通过细胞旁分泌作用释放的具有磷脂双分子层膜结构的纳米级小囊泡体,其内含物中主要包括蛋白质、脂质、微小RNA(microRNA,miRNA)和mRNA等物质.外泌体能够通过特定信号分子的转移实现细胞间的信息交流,促进细胞生成和血管新生.外泌体对运动性心脏损伤、骨骼肌损伤和神经系统损伤的修复再生具有重要研究价值,已经成为运动人体科学领域最新的研究方向.文章就外泌体的研究背景,外泌体对运动型心脏损伤、骨骼肌损伤和神经系统损伤的修复再生功能进行综述,以期了解其损伤修复的机理机制,为运动损伤修复和延长运动寿命提供理论支持.     

外泌体中的microRNAs在神经胶质瘤中的研究进展

外泌体(exosomes)是一种体内多种细胞可以分泌的细胞外囊泡,由膜蛋白组成的脂质双分子层包绕蛋白质和核酸形成,其直径大小为30～100 nm不等.其内含有microRNAs(miRNAs)和mRNAs等遗传物质,在细胞之间具有物质交换及信息传递等功能,在体内很多生理与病理过程中有着不可忽视的作用.近年来,外泌体中的miRNAs逐渐引起国内外学者的重视,研究发现它们可以参与肿瘤的发生、发展、肿瘤血管生成等相关作用.为了更好地了解外泌体中的miRNAs在神经胶质瘤中的作用,本文综述了外泌体中的miRNAs与胶质瘤的发生、发展、肿瘤血管生成、肿瘤代谢的关系,并探讨了其在胶质瘤诊断和治疗方面的研究进展.     

杨树根特异性表达β-果糖苷酶抑制子的功能性验证

【目的】植物细胞壁转化酶(CWI)和液泡转化酶(VI)是分配碳水化合物、维持库器官强度和环境胁迫应答的重要因子。大量证据表明CWI和VI由β-果糖苷酶蛋白抑制子的翻译后调控机制介导。然而,关于C/VIFs家族的分子和遗传学基础以及生化特性研究目前还不清楚。【方法】应用生物信息学分析基因结构特征和系统进化关系,并利用实时荧光定量PCR研究转录本在组织中的丰富度。同时,结合烟草叶片瞬时和拟南芥遗传转化法的荧光表达,以及重组蛋白系统分别对PtC/VIF1亚细胞定位特征和体外抑制活性进行深入鉴定。【结果】共39个PtC/VIF候选编码基因家族被筛选出来。PtC/VIF1在根中具有高转录水平;共聚焦显微镜观察证实PtC/VIF1是分泌到细胞外空间。重组蛋白活性检测表明其对CWI蛋白具有特异的亲和抑制活性,说明PtC/VIF1是定位于质外体的β-果糖苷酶抑制子。【结论】对C/VIF编码基因家族生物信息学分析和PtC/VIF1在杨树中的功能性鉴定属于首次报道,可为后期进一步深入探索该基因的生理学作用和参与抗病防御路径以及环境胁迫响应的潜在功能提供理论基础和研究依据。     

PD-L1表达抑制剂的筛选及其抗肿瘤活性

为了筛选PD-L1启动子活性抑制剂,研究其抑制肿瘤细胞中PD-L1蛋白表达对机体抗肿瘤免疫活性的调节作用.利用荧光素报告基因检测系统对小分子化合物库中的311种化合物进行筛选,发现硫酸长春新碱(vincristine sulfate,VCR)以浓度依赖性抑制PD-L1基因启动子活性.RT-PCR、免疫印迹实验(Westernblot)等生物学评价实验显示:VCR抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞中PD-L1表达以及B16细胞PD-L1蛋白表达和成瘤;VCR增强Jurkat细胞对MDA-MB-231细胞的杀伤活性,并促进C57BL/6小鼠细胞因子IL-2和γ-IFN的分泌,增强抗肿瘤活性.研究结果表明,VCR通过抑制PD-L1启动子活性下调肿瘤细胞中PD-L1蛋白表达,从而解除PD-1/PD-L1信号通路介导的免疫抑制,增强机体对肿瘤细胞的免疫应答和杀伤作用.     

SIRPα工程化外泌体阻断CD47/SIRPα信号轴研究

目的 制备分离表达SIRPα受体的外泌体,探讨SIRPα外泌体的结构特性、细胞相容性、细胞内分布及对CD47/SIRPα信号轴的阻断作用.方法 通过差异超速离心法从稳定表达SIRPα的HEK293T细胞中分离外泌体;通过动态光散射法(DLS)和透射电子显微镜(TEM)技术分析外泌体的尺寸和形貌特征;Western blotting检测外泌体中SIRPα-GFP融合蛋白的表达;通过MTT法检测外泌体与NIH3T3细胞的相容性;应用荧光成像技术研究外泌体的肿瘤细胞内吞;通过肿瘤细胞与巨噬细胞共孵育实验研究外泌体阻断CD47/SIRPα信号轴带来的肿瘤吞噬效果.结果 利用差异超速离心法分离得到尺寸约80 nm的SIRPα外泌体,透射电子显微镜下呈现为尺寸均一的圆球形结构;免疫印迹证实了外泌体上SIRPα的表达;MTT法结果显示SIRPα外泌体具有良好的生物相容性;荧光成像结果显示SIRPα外泌体被B16F10细胞内吞后分散在细胞质中;共孵育实验表明SIRPα外泌体与CD47单抗均能促进骨髓来源巨噬细胞吞噬黑色素瘤细胞.结论 成功分离了表面表达SIRPα受体的外泌体;SIRPα外泌体具有良好的细胞相容性;SIRPα外泌体可以成功阻断CD47/SIRPα信号通路,激活了巨噬细胞对肿瘤的吞噬功能.     

花生种子活力、ATPase及H~ 分泌初探

线粒体结合ATPase及质膜和液泡膜结合ATPase活性随花生种子吸胀的起始逐渐增加,酶活性与种子活力有正相关性。以萌发一周的花生下胚轴为实验材料,线粒体ATPase,质膜ATPase和液泡膜ATPase的反应最适pH均为9.在pH 6～10范围内随pH的升高H~ 分泌增多。膜ATP酶为二环已烷亚胺抑制,而为KCl激活;NaN_3特异地抑制线粒体ATP酶,而NaVO_3专一地抑制质膜ATP酶,但两者对液泡膜ATP酶均无效。Mg~( )、K~ 激活ATPase,也刺激H~ 分泌。质膜ATPase抑制剂NaVO_3对H~ 9分泌作用不大,而线粒体ATPase抑制剂NaN_3及解偶联剂DNP均显著抑制H~ 分泌。CoⅠ刺激H~ 分泌而C_oⅡ抑制H~ 分泌。似乎线粒体ATP产量对H~ 分泌更重要。     

内质网应激在趋化素诱导成骨细胞代谢过程中的作用机制

观察趋化素诱导成骨细胞代谢过程中的影响,探讨内质网应激反应在此过程中的机制。将成骨细胞随机分组,给予不同浓度的趋化素(Chemerin)进行诱导,观察成骨细胞活力变化;ELISA法测定细胞趋化蛋白1(MCP-1)、E选择素(E-selection)变化;Western blot法检测成骨细胞黏附分子1(ICAM-1)、需肌醇跨膜激酶/核酸内切酶1(inositol-requiring transmembrane kinase/endonuclease 1,IRE1)、葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein 78,GRP78)的表达情况。通过研究发现Chemerin对成骨细胞活力未见明显影响;与正常对照组相比,Chemerin呈浓度依赖性上调MCP-1、E-selection、ICAM-1等炎症因子的表达(P0.05),上调内质网应激反应相关指标IRE1、GRP78的表达(P0.05);其中,1×10-5mol/L组Chemerin作用最为显著。研究结果表明趋化素可诱导成骨细胞的凋亡过程,在成骨细胞的代谢中发挥重要作用,此过程可能和内质网应激反应相关。     

外泌体在肿瘤精准诊断与治疗中的研究进展

外泌体是一种细胞分泌的具有双层脂质膜结构的纳米级小囊泡,几乎所有类型的细胞均可分泌外泌体.外泌体携带核酸和蛋白质等多种具有生物活性的内容物,不但在细胞间信息交流和信号转导的过程中起着重要作用,而且参与了人体内各种病理生理过程.肿瘤来源的外泌体参与调控肿瘤的生长发展和侵袭转移等过程.外泌体在肿瘤的早期诊断、预后判断以及作为治疗工具方面的探索已经成为研究热点.对外泌体在肿瘤的发生发展、转移侵袭以及在肿瘤精准诊断与个体化治疗方面的进展作一综述.     

鲫葡萄糖调节蛋白78基因部分序列的克隆、鉴定及功能预测

【目的】分析和预测鲫(Carassius auratus)葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein 78,GRP78)的功能,为研究GRP78在鱼类受细胞外刺激过程中的作用机制奠定基础。【方法】通过分子克隆技术获得鲫GRP78基因的部分序列,并利用生物信息学方法分析了该基因片段编码的蛋白质序列的二级结构、亲水性、可塑性、表面可及性和抗原表位。【结果】获得了长度为617bp的鲫GRP78基因片段序列,共编码113个氨基酸。这些氨基酸所构成序列的相对分子质量约为1.3kDa,等电点为5.82,无信号肽;可塑性区域位于第7～10位、第18～21位、第28～42位、第51～62位、第68～78位和第94～109位氨基酸残基;表面可及性区域位于第29～30位、第38～43位、第50～65位、第68～79位、第82～86位、第97～99位、第102～104位和第106～111位氨基酸残基;有1个B细胞抗原表位区域,位于第28～45位氨基酸残基。【结论】所获的鲫GRP78序列中含有ATPase保守结构域区段,该区段定位于内质网,具有较强亲水性。