致病疫霉诱导放线菌Sy11菌株的抑菌作用

在筛选致病疫霉拮抗菌过程中,发现放线菌Sy11菌株对致病疫霉的抑制作用是由于致病疫霉对Sy11的诱导作用.为了进一步明确致病疫霉对Sy11的诱导方式和条件,采用平板对峙共培养法探讨了致病疫霉诱导Sy11的适宜培养基、培养温度、培养时间以及诱导后Sy11菌株抑菌作用的持续时间等.结果显示,只有活体致病疫霉才能诱导Sy11的抑菌作用,死亡的致病疫霉菌体没有诱导作用;用黑麦培养基20℃黑暗对峙培养7d,从Sy11菌落向外12mm处的无菌体琼脂块的抑菌作用最强,抑菌率达到79.38%,与Sy11菌株完整菌落的抑菌率86.47%相近;而且发现致病疫霉诱导1次后,Sy11的抑菌能力即可连续传递13代,且抑菌率保持在65%以上.这些结果表明,Sy11是在受到活体致病疫霉诱导之后才对致病疫霉有抑制作用,且抑菌作用具有遗传性.     

对放线菌Sy11有诱导作用的致病疫霉信号分子研究

致病疫霉(Phytophthora infestans)能产生一种信号分子,诱导放线菌Sy11菌株产生抑菌物质从而抑制致病疫霉.为明确在哪种培养方式下致病疫霉更易产生这种信号分子以及信号分子的物质类别,本文采用生长速率法对致病疫霉单独培养(单独固体培养和单独液体培养)以及与Sy11共培养(对峙培养和混合培养)产生的信号分子诱导Sy11抑菌作用的活性进行了比较,并以不同有机溶剂对信号分子的物质类别进行了初步分析.结果显示,致病疫霉无论单独培养还是与Sy11共培养,均可产生诱导Sy11抑菌作用的信号分子,其中以在固体黑麦培养基上与Sy11对峙培养产生的信号分子的诱导活性最强,菌落直径为24.79 mm,但与其他3种培养方式所产生的信号分子的诱导活性并无显著性差异;对致病疫霉单独液体培养后无菌体发酵液的分析表明,其中脂类粗提物的诱导活性(菌落直径32.8 mm)远高于糖类(菌落直径61.5 mm)和蛋白质类(菌落直径60 mm)粗提物,进一步对其中脂类物质的萃取显示,乙酸乙酯的萃取效果明显优于乙醇和石油醚.乙酸乙酯萃取物诱导Sy11后对致病疫霉菌丝生长有显著的抑制作用(菌落直径为35 mm)与乙醇萃取液的处理达到显著性差异.以上结果表明,致病疫霉生长过程中无论单独培养还是与Sy11共培养均可产生能诱导Sy11抑菌作用的信号分子,该信号分子以脂类物质为主,可用乙酸乙酯萃取得到.     

拮抗菌HT-6引起致病疫霉菌体的生理变化

为了解核桃内生细菌HT-6对致病疫霉的抑制作用机理,采用对峙培养和传统培养相结合的方法检测了受拮抗菌HT-6抑制不同阶段后致病疫霉菌丝体内部分活性物质、抗性相关酶活、电导率以及溶氧量的变化.结果显示,随对峙培养时间延长,受抑制组与对照组中致病疫霉菌丝体内可溶性糖和淀粉含量虽然均呈增加趋势,蛋白质含量均呈下降趋势,但受抑制组可溶性糖、淀粉及蛋白质含量均远低于对照组,且均在对峙培养第15天时差异最大(P<0.01);受抑制组和对照组菌丝体内苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和过氧化物酶3种酶活的变化趋势与上述3种物质的变化趋势相似,但均在培养的第12天达到最高,且受抑制组菌体内3种酶活均远高于对照组,与对照达到极显著差异(P<0.01).此外,受拮抗菌HT-6抑制后致病疫霉菌丝体内的电导率(162.77 μS/cm)显著高于对照组(60.03 μS/cm),而溶氧量(47.13%)显著低于对照组(56.1%).这些结果表明:HT-6菌株可通过抑制或大量消耗致病疫霉菌丝体内部分活性物质,同时增加细胞膜透性、降低呼吸作用实现对致病疫霉菌丝体生长的抑制作用.     

致病疫霉产孢子囊培养基及诱导方法的筛选

致病疫霉(Phytophthora infestans)A2交配型菌株P7723不易产生孢子囊。为了获得大量的孢子囊,试验研究比较了5种不同培养基及7种不同诱导方法对致病疫霉孢子囊产量的影响。研究结果表明:5种培养基中只有燕麦培养基(OMA)和大豆培养基(BA)能产生孢子囊,分别为(106±6.29)、(273±6.86)个/cm~2,其余培养基均未产生孢子囊。在7种诱导孢子囊产生的方法中,40℃处理、菌丝丛水培处理(10%V8)、皮氏溶液处理和土壤浸出液处理4种方法能诱导原本不产生孢子囊的3种培养基产生孢子囊;其中,40℃处理的诱导效果最好。此外,40℃处理也使原本产生孢子囊的OMA、BA培养基上的孢子囊量显著增加。在所有培养基的不同处理中,40℃处理的CA培养基上菌株产生的孢子囊量最多,可达到(767±7.98)个/cm~2。试验为研究致病疫霉菌生长发育过程中的基因表达分析及遗传转化奠定了基础。     

臭蒿水乳剂抗烟草黑胫病的作用

采用菌丝生长速率法,测定臭蒿水乳剂对烟草疫霉菌丝生长的毒力及其药效稳定性;采用菌丝块诱导孢子囊产生法测定臭蒿水乳剂对烟草疫霉孢子囊抑制的毒力;最后对盆栽防效结果进行探讨.结果表明,低浓度臭蒿水乳剂对烟草疫霉菌丝生长和孢子囊的产生均有明显抑制作用,对烟草疫霉菌丝生长抑制的EC50和EC90值分别为5.93g·L-1、52.56g·L-1,其对烟草疫霉菌丝生长的抑制作用具有良好的pH值稳定性、光稳定性、热稳定性以及贮藏稳定性;对烟草疫霉孢子囊产生抑制的EC50、EC90值分别为6.56g·L-1,65.22g·L-1.盆栽防效及对烟草幼苗生长影响实验表明,22d其对烟草黑胫病的防效为56.2%,且对烟草幼苗生长几乎没有影响.     

放线菌BJLSH9菌株兼抗线虫及烟草疫霉菌的生防活性及其杀线虫代谢产物鉴定

 从采自北京柳树的根际土中分离到对线虫和病害真菌具有较好生防活性的放线菌菌株BJLSH9.该菌株对烟草疫霉菌丝生长抑菌率达50.05%,48 h的杀线虫活性高达98.05%.在40 L发酵罐用38号培养基培养BJLSH9菌株,根据其生物活性及菌体生物量确定适宜的发酵时间为72 h.经16S rRNA基因分析,将BJLSH9菌株鉴定为黄抗霉素链霉菌(Streptomyces flavofungini).从BJLSH9菌株的次生代谢产物中鉴定出一种杀线虫化合物tryptophandehydrobutyrine diketopiperazine (TDD),该化合物对线虫48 h的致死率为40%.黄抗霉素链霉菌及其产生的TDD化合物的杀线虫活性为首次报道.     

致病疫霉菌株交配型的检测及其检测方法的比较

致病疫霉(Phytophthora infestans)是马铃薯晚疫病的病原体,可导致马铃薯大面积减产。致病疫霉的有性生殖可以产生卵孢子,由于其抗逆性较强,利于致病疫霉渡过不利的生存环境,给马铃薯晚疫病的有效防治带来巨大的困难。致病疫霉的有性生殖属于异宗配合,即A1、A2交配型同时培养时才会产生卵孢子。因此,快速而有效地检测致病疫霉菌株的交配型将为致病疫霉有性生殖分子机理的研究及致病疫霉的防治奠定基础。通过直接配对法、纸盘法和分子标记法三种方法,对5株来源不同的致病疫霉菌株进行了交配型检测。三种方法的检测结果均表明,菌株HQK8-3、2PO-D、USA1的交配型与ATCC标准菌株64093的交配型一致,为A1交配型,而菌株2PO82001、P7723的交配型与ATCC标准菌株32835的交配型一致,为A2交配型。说明三种方法均可有效鉴定致病疫霉交配型,但三种方法各有优缺点,应根据实验条件,采取合适的方法进行菌株交配型测定。     

基于嗜铁素介导的吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007促生作用机制研究

【目的】分析吡咯伯克霍尔德菌 JK-SH007基于产嗜铁素的促生作用机制。【方法】通过萃取、过柱等操作,分离纯化,获得吡咯伯克霍尔德菌 JK-SH007所产嗜铁素(简称JK-SH007-嗜铁素)的纯品,通过HPLC和LC-MS对其结构进行鉴定,通过与病原菌共培养,测菌丝干质量的方法,分析其对3种杨树溃疡病病原真菌(金黄壳囊孢、拟茎点霉和七叶树壳梭孢)的抑制作用,以商品嗜铁素磺酸去铁胺(DFOB)作为对照,比较JK-SH007-细菌重悬液、1.4 mg/mL JK-SH007-嗜铁素溶液对番茄、黄瓜种子的萌发作用,并继续观察对黄瓜幼苗的促生作用和番茄挂果果品改善效果,评估JK-SH007-嗜铁素的直接与间接的促生作用。【结果】与对照相比,JK-SH007-嗜铁素显示出比DFOB更有效的抑制真菌生长的活性,3种病原真菌抑菌率分别为(89±0.9)%,(76±0.6)%和(90±0.7)%。同时,与JK-SH007-菌悬液相比,JK-SH007-嗜铁素溶液对番茄、黄瓜种子和幼苗活力的提高表现更好,而对于黄瓜幼苗的生长促进作用和番茄挂果的改善作用,其效果与菌悬液相近。【结论】嗜铁素为促生菌吡咯伯克霍尔德氏菌 JK-SH007的主要促生生防因子之一。     

致病疫霉拮抗菌LH-03的抗菌物质分析及其防病作用

为了明确对致病疫霉(Phytophthora infestans)菌丝生长有显著抑制作用的梨黑斑病菌(Al-ternaria alternata)LH-03发酵液中的抗菌物质,通过硫酸铵和乙醇的交互沉淀、蛋白酶K和酚-氯仿变性处理以及SDS-PAGE电泳分析抗菌物质的基本性质,并在马铃薯块茎切片上测试防病效果.结果显示,抗菌物质为蛋白质类物质,其分子质量大小约为40ku,粗蛋白与发酵液原液相比,抑菌活性略有下降,其最适抑菌质量浓度为3.5mg/mL,抑菌率为72%,在马铃薯块茎切片上对致病疫霉侵染的保护率可达95%以上.表明LH-03产生的蛋白类抗菌物质对马铃薯晚疫病具有较大的防病潜力.     

3株致病疫霉拮抗放线菌复合发酵及其抑制机理

为提高拮抗放线菌控制马铃薯晚疫病的稳定性,采用涂布法和显微观察法对从土壤中筛选到的活体状态能显著抑制致病疫霉菌丝生长的3株放线菌进行了复合发酵方式及发酵条件的初步优化及抑菌机理的研究.结果表明:3株放线菌之间无明显拮抗作用;以培养种子液3 d、先接入NB8培养2 d后再接入NB11和NB12为最佳发酵方式,抑菌率最高可达97.7%,明显优于NB8(87.4%),NB11(20.0%)和NB12(28.2%)单独发酵液的抑制作用;当初始pH为自然值、28℃时,3株菌复合发酵后抑菌活性最高.复合发酵液对病原菌菌丝生长产生明显抑制作用,致使菌丝变形或孢子囊发生异常破裂.     

辣椒疫霉菌拮抗细菌的筛选、鉴定及防效测定

从天津、河北、山东、山西、福建、河南及江苏等地蔬菜根际土壤中分离细菌1万余株,从中筛选出对辣椒疫霉菌Phytophthora capsici有明显拮抗作用的细菌802株,进一步用立枯丝核菌Rhizoctonia solani、番茄灰霉菌Botrytis cinerea及瓜果腐霉菌Pythium aphanidermatum为靶标筛选出对以上病原真菌有较好拮抗作用的菌株62株。对辣椒疫病防效温室盆栽实验结果表明,6个菌株防效在70%以上,其中菌株TB1340防效最高,达到82%。菌株TB1340生物学特性测定结果表明其具有较强的产生几丁质酶、纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶活性。经16S rRNA基因序列分子鉴定结合形态学观察,菌株TB1340被初步鉴定为芽孢杆菌Bacillus sp.。     

Production of β-1,3-glucanase and chitinase of two biocontrol agents and their possible modes of action

Pichia membranefaciens Hansen and Candida guilliermondii (Cast) Langeronet Guerra are two antagonists of R. stolonifer on harvested nectarine and peach fruits. In this study, β-1,3-glucanase and chitinase activities of the antagonists were induced in vitro and in vivo. The highest β-1, 3-glucanase activity was detected in Lilly-Barnett minimal salt medium supplemented with glucose in combination with CWP of R. stolonifer as a carbon source. The β-1,3-glucanase activity of P. membranefaciens reached the maximum level, being 114.0 SU (specific activity unit), and that of C. guilliermondii reached 103.2 SU. The lowest β-1,3-glucanase activity was observed in the medium containing glucose as sole carbon source. P. membranefaciens was able to produce significantly higher levels of chitinase (exochitinase and endochitinase) in vitro than C. guilliermondii grown in Czapeck minimal medium. An increase in β-1,3-glucanase and chitinase activity was also triggered by wounding, adding of carbon sources and yeast cells. The results showed that both β-1,3-glucanase and chitinase from P. membranefaciens and C. guilliermondii exhibited some effects on controlling R. stolonifer, and might have a synergistic activity against R. stolonifer.     

木霉对棉花枯萎病菌和黄萎病菌的作用机理

木霉对棉花枯萎病菌(Fumrium oxysporum f.sp.Vasinfectum)的幼菌丝具有强烈的寄生能力，对于老熟菌丝的寄生能力较弱。木霉能够产生琼脂扩散性和挥发性抑菌物质。绿色木霉LTR-2产生的挥发性抑菌物质能强烈抑制棉花枯萎病菌的菌丝生长。木霉生物防治作用的另外一种方式是与病原菌竞争营养物质，研究发现葡萄糖是竞争对象之一。木霉具有很强的β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性。培养液中添加几丁质、木霉菌或者棉花枯萎病菌菌丝干粉后培养木霉，培养液上清能够破坏枯萎病菌的菌丝尖端并导致原生质体的泄露，该现象主要与木霉的几丁质酶活性有关。木霉对棉花黄萎病菌具有相同的作用方式。     

碱性纤维素酶高产菌株Bacillus sp.CY1-3的诱变选育

以一株产单组分羧甲基纤维素酶芽孢杆菌Bacillus sp.CY1-3为出发菌,经紫外线和亚硝基胍复合诱变处理后,其纤维素酶产量达到了53.86 U/mL,是出发菌株的4倍.研究发现最优的紫外辐射时间和亚硝基胍浓度分别是4min和0.06%.     

饲用葡聚糖酶高产菌株的选育及发酵条件研究

对实验室保藏的12株黑曲霉菌株进行了筛选,经紫外、硫酸二乙酯DES诱变最终获得一突变株An08-752.通过培养基优选和发酵条件优化后,其产β-葡聚糖酶酶活力较出发菌株提高了213%,酶活力达到了1.23×105 U/g.     

降解秸秆的纤维素酶高产菌的选育

研究了可以用于降解农作物秸秆的纤维素酶高产菌的筛选方法,通过利用刚果红纤维素粉琼脂培养基以及滤纸条培养基进行初筛,然后以玉米秸秆为发酵培养基进行复筛,筛选到纤维素酶活力较高的1株真菌b3.通过进行紫外诱变得到诱变菌株,其纤维素分解能力进一步提高.     

葡萄霜霉病拮抗细菌BMJBN02的筛选及其抑菌效果研究

采用平板观察法,获得到6株对葡萄霜霉病具有抑制作用的菌株,对其代谢产物进行检测,发现菌株BMJBN02在纤维素平板、几丁质平板和β 1,3 葡聚糖平板上产生的水解圈半径最大。通过对菌株BMJBN02的形态、生长特性、生理生化反应、16S rDNA 序列测定和系统发育分析,鉴定该菌株为巨大芽孢杆菌（Bacillus. megaterium spp.）。叶盘法检测发现,经菌株BMJBN02粗提液处理的叶片,霉层的面积明显减少,叶片发病率从100%降低到42.3%,病情指数从65.3降为18.6,抑菌效果显著。     

磁化水对双孢蘑菇的生物学效应

将双孢蘑菇 176、2 796、82 11菌株分别培养在用普通水配制的马铃薯培养基 (PDA)和用磁化水配制的马铃薯培养基 (MPDA)上 .结果表明 ,在MPDA上培养的 3个菌株其菌丝体的生长速度分别提高了 39.31%、16 .16 %和 2 5.2 6 % .176菌株通过MPDA培养后的核酸含量、总蛋白含量、可溶性蛋白含量比在PDA上培养的分别提高了 4 1.18%、2 1.92 %和 35.0 4 % ;2 796菌株分别提高了 2 6 .88%、33.91%和 4 1.50 % ;82 11菌株也分别提高了 33.33%、35.6 9%和 51.39% .通过酯酶同工酶 (EST)电泳分析表明 ,用MPDA培养对双孢蘑菇 3个菌株菌丝体的EST影响是不同的 .     

石榴枯萎病菌生物学特性研究

石榴枯萎病（Pomegranate wilt）为甘薯长喙壳（Ceratocystis fimbriata Ellis＆Halsted）引起的一种真菌病害,是四川省攀西地区石榴上的一种新病害。对甘薯长喙壳菌的生物学特性研究结果表明：病原菌在供试甘薯葡萄糖琼脂（SPDA）、马铃薯甘薯葡萄糖琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）、玉米琼脂、石榴叶煎汁琼脂5种培养基中均能良好生长,而在查氏（Czapek）固体培养基和2%水琼脂培养基上不生长。能利用多种碳源,其中葡萄糖为最佳碳源。不同温度和pH对菌丝生长影响较大。菌丝在10-35℃范围内均能生长,最适温度为26℃,致死温度为50℃处理10min;菌丝生长的pH范围为3-6,最适pH为5。黑暗条件有利于病原菌菌丝的生长。