邻苯三酚自氧化法在SOD活性测定中的应用

为了验证邻苯三酚自氧化法的准确性和实用性,对邻苯三酚在Tris-HCl和磷酸盐2种不同反应体系(缓冲液)中的自氧化产物进行UV-Vis吸收光谱扫描,确定其最适吸收峰;同时研究了tcv Cu,ZnSOD(简称tcvSOD)和Bovine Cu,Zn-SOD(简称Bovine SOD)分别在2种缓冲液中对邻苯三酚自氧化反应的抑制模式.波长扫描显示,终浓度为0.225mmol/L的邻苯三酚在50mmol/L Tris-HCl pH 8.2缓冲液中于320nm处30s出现明显吸收峰,30min吸收峰达到最高值;30min后440nm附近出现吸收峰;A320处的自氧化速率为0.139/min.同样浓度邻苯三酚在0.2 mol/L pH8.0磷酸缓冲液中除了A320的自氧化速率稍高(A3200.152/min)外,其他性质与50mmol/L Tris-HCl相同.tcvSOD和Bovine SOD在Tris-HCl缓冲液中对邻苯三酚自氧化反应的抑制作用较磷酸盐缓冲液为强.研究结果确认320nm可作为检测邻苯三酚自氧化、SOD对其产生抑制及SOD活性间接测定的特定波长.     

银杏叶超氧化物歧化酶(SOD)活性研究

对超氧化物歧化酶邻苯三酚测活法的影响因素,如缓冲溶液组成和浓度、pH值、EDTA用量等因素进行了系统研究,通过比较邻苯三酚自氧化反应速率、线性回归方程的线性相关性和线性区间筛选出最佳条件,并根据优化的实验条件对银杏叶SOD提取液进行了活性研究.     

应用极谱氧电极检测SOD活性研究

本文建立 SOD 活性测定的极谱氧电极法,同时比较了邻苯三酚和肾上腺素自氧化系统的工作条件和优缺点,结果提示,肾上腺素自氧化系统的最适条件为:30℃,0.1mol/LpH10.3碳酸缓冲液4.0ml,0.05mol/L 肾上腺素30μl,SOD 在0-0.8μg 间与产氧量成线性关系;邻苯三酚系统的工作条件与文献报道一致.实验发现肾上腺素系统灵敏度较高,但线性范围小,重复性与邻苯三酚系统一致.本文还应用极谱氧电极法筛选抗氧化天然活性物质,在若干动物、植物及酵母中进行了SOD 活性测定,证明该法简便、快速、灵敏。     

邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性的研究

目前超氧化物歧化酶(SOD)活性测定结果混乱,为提高测定结果的可比性,对邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的方法进行了研究,就该活力测定体系中缓冲溶液的介质组成、浓度、pH及所含的EDTA量等因素对测定结果的影响进行了探讨,根据实验结果,提出了新的改良方法.     

保健食品中SOD活性测定改良Marklund法及检测条件的研究

目的：建立保健食品SOD活性检测的标准。方法：利用改良Marklund方法测定保健食品（花粉、茶等）中SOD活性。结果：研究pH、温度、邻苯三酚和操作程序等对SOD活性的影响，选择检测条件，其回收率、变异系数（花粉和茶）分别为104％、97％和2．7％、5％。结论：方法简便、稳定、准确，仪器试剂价廉，易于推广。     

邻苯三酚自氧化法适于测定SOD活性吗?

用邻苯三酚自氧化法测定了Cu-ZnSOD(Superoxide dismutase，SOD）及根据天然超氧化物歧化酶活性部位结构设计、合成的一些模型化合物（the models of SOD，MSOD）活性。测试结果表明：Cu-ZnSOD和含Cu（Ⅱ）、Fe(Ⅲ)、Mn(Ⅱ、Ⅲ的SOD模型化合物随浓度升高，有的对邻苯三酚氧化表现为负抑制（即促进邻苯三酚氧化）；另一部分化合物在较低浓度表现为抑制，较高浓度表现为负抑制的交替变化；或抑制率的无规则变化。本文对出现负抑制的内在根源进行了探讨，鉴于邻苯三酚自氧化的复杂反应机理；含Cu(Ⅱ)、Fe(Ⅲ)、Mn（Ⅱ、Ⅲ）SOD模型化合物的多酚氧化酶活性和Fenton反应催化活性，及MSOD中金属离子的Lewis酸性，不宜采用邻苯三酚自氧化法测定SOD活性。     

超氧化物歧化酶活性的测定

主要采用光谱法研究测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及不同实验条件对其活性的影响,找出最优的测活条件,为实际工作提供一些有意义的指导,并且为下一步的酶促反应动力学研究提供实验和理论依据.实验结果表明,测定SOD活性的最优条件为:实验温度为25℃,0.1mol.L-1 Tris-HCl缓冲溶液,pH值为8.20,内含2.0mmol.L-1 EDTA,邻苯三酚浓度为2.5mmol.L-1,控制酶的加入量为0.30mL.     

酒精中毒小鼠全血SOD酶活测定

介绍了一种能方便、准确测定酒精中毒小鼠血液中ＳＯＤ酶活的方法,采用二硫苏糖醇（ＤＴＴ）为终止剂的邻苯三酚自氧化法反应体系条件ｐＨ＝８２０±００１,反应温度３０±０１℃,邻苯三酚浓度００９８ｍｍｏｌ／Ｌ,ＤＴＴ浓度２７３μｍｏｌ／Ｌ,红细胞ＳＯＤ粗提液加样量０１２５ｍＬ,测试波长４２０ｎｍ本法重复性好,ＣＶ＝２８２％（ｎ＝６）应用本法测得鼠血中ＳＯＤ酶活变化趋势与鼠血中乙醇浓度和翻正反射消失情况有相关性,表明本法可用于酒精中毒的防治研究     

响应面法优化薤白多糖的羧甲基化修饰工艺及抗氧化活性研究

采用氯乙酸法对醇沉法得到的薤白多糖(PAM)和柱层析纯化的3种分级薤白多糖进行羧甲基化修饰,以氯乙酸浓度、反应时间和反应温度为自变量,修饰产物的羧甲基取代度(DS)为响应值,应用响应面设计法确定羧甲基化修饰的最佳条件,用H2O2/Fe2+体系法和邻苯三酚自氧化法测定修饰产物的抗氧化活性.结果表明:薤白多糖氯乙酸法修饰的最佳条件为氯乙酸浓度1.3 mol/L、反应温度63℃、反应时间3.2 h.此条件下羧甲基取代度为0.882.羧甲基化修饰能提高薤白多糖的体外抗氧化活性.     

四种邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性方法的比较

邻苯三酚自氧化法(420nm法)与邻苯三酚/DTT终止法测定SOD酶活力,结果基本一致,其转换系数(CC)为1.03;改进的邻苯三酚自氧化法(325nm法)、微量邻苯三酚/Vc终止法测定SOD酶活力与420nm法差别较大,其转换系数分别为2.51、5.51.在测定SOD酶活力时,可根据不同的测定方法采用转换系数进行校正;实验表明:终止剂维生素C(Vc)和二硫苏糖醇(DTT)对SOD酶活力的测定无影响;325nm法与Vc法灵敏度较高,可用于SOD活力较低的样品.     

甜地丁总黄酮提取工艺及体外抗氧化活性研究

为研究甜地丁总黄酮提取工艺及体外抗氧化活性,本文利用L9（34）正交试验,探讨了提取条件对总黄酮提取量的影响,并采用Fenton体系和邻苯三酚自氧化法评价了该提取物的体外抗氧化能力,采用多元线性回归对总黄酮与抗氧化活性相关性进行了分析。结果显示最佳提取条件为20倍量75%乙醇,提取4次,提取时间为30 min,此条件下的黄酮得率为3.423%;甜地丁总黄酮对·OH和O2-·清除能力与浓度呈较明显的量效关系,且抗氧化作用与总黄酮量之间正相关。甜地丁总黄酮具有较强的抗氧化能力,是一种天然有效的抗氧化剂。     

荧光动力学分析新方法测定超氧自由基抑制剂的抗氧活性

研究了荧光动力学分析法检测超氧自由基抑制剂抗氧活性的新方法．在Tris-HCI缓冲溶液中(pH=8．20),邻苯三酚自氧化产生超氧自由基和有荧光效率的自氧化产物．在433．0nm激发波长和494．5nm发射波长条件下,该自氧化产物时间扫描曲线的斜率与超氧自由基抑制剂的浓度有相关性．利用抗坏血酸、槲皮素、芦丁3种常见抗氧化剂对新方法进行了验证并将新方法与单扫描极谱法(SSP)、紫外分光光度法(UV)作了比较．结果表明新方法测活灵敏度优于UV法,而与SSP法相当．但比SSP法操作简单、准确度好．     

缓冲液对SOD-邻苯三酚自氧化的影响

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,简称SOD)由于能消除对细胞极毒的O_i~-,在医学上颇受重视,正成为极有价值的临床指标和治疗酶。有关此酶的测定方法也得到不断改进。我们在测定某些药物对小白鼠器官SOD水平影响的实验中,比较了几种方法,认为邻苯三酚自氧化法较为适用,该法的关键是缓冲液的选择。选用了1/(15)M,pH7.0～8.2的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液(简称Na~+-K~+型PBS),获得了较宽的线性范围,重现性好。     

MTT比色法测定超氧阴离子自由基

利用隣苯三酚(py)在碱性环境下可自氧化产生O2^.-,MTT可接受O2^.-而生成兰紫色的formazan的原理，建立一种新的O2^.-检测方法。标准反应体系是MTT10μ,PY10μl，样品适量，反应15min后加酸性SDS0．5ml，反应最适pH值为8．2，终止反应pH值为4．9，测定波长为570nm，观察了维生素E和广枣总黄酮清除O2^.-的作用。该法简单、易行、稳定性好，适合检测中蒙药抗氧化作用。     

果蔬组织中超氧化物歧化酶活力的测定

研究了不同浓度VC对邻苯三酚自氧化的影响,因VC分子量为176,而SOD分子量在30000～50000,故采用透析法排除VC的干扰,以测定果蔬组织中超氧化物歧化酶活力.     

余甘子果超氧化物歧化酶提取工艺优化及抗氧化性研究

采用超声波法,以余甘子果为原料、SOD酶比活力为指标,考查液料比、磷酸缓冲液pH、超声时间、提取温度对余甘子SOD提取率的影响,并根据单因素试验结果及响应面Box-Behnken中心拟合原理,以SOD酶比活力为响应值,进行4因素3水平试验设计,建立响应面优化超声波法提取余甘子SOD工艺的多元回归方程;同时采用DPPH自由基和羟基自由基清除法对提取出的余甘子SOD粗酶液进行了抗氧化性研究.实验结果表明：响应面优化超声波法提取余甘子SOD最佳工艺为液料比5∶1 (mL/g)、磷酸缓冲液pH值7.8、超声时间19 min、温度50℃,在此工艺下进行3次平行验证得到SOD酶比活值为(557.22±9.36)U/g(FW)·h,与模型预测值573.36 U/g(FW)·h误差为2.90%,误差值小于5%说明模型可靠性高;余甘子的SOD粗酶液对DPPH自由基清除率最高为97.41%,羟基自由基的清除率最高也可达到93.36%,且抗氧化性优于同等浓度的VC;优化后的余甘子中SOD的提取工艺稳定可靠,且SOD粗酶液具有良好的抗氧化活性.     

白芷愈伤组织中总香豆素的提取与测定

建立了白芷愈伤组织中总香豆素质量分数的测定方法,同时优选利用超声提取白芷愈伤组织中总香豆素的最佳工艺.采用L9(34)正交实验对乙醇体积分数、超声时间、超声温度以及溶液pH等因素进行研究,确定超声提取的最适条件.以欧前胡素为指标性成分,检测波长为300 nm,利用紫外-可见分光光度法检测白芷愈伤组织中总香豆素的质量分数.结果表明,利用超声提取白芷愈伤组织中总香豆素的最适奈件为:乙醇体积分数为60％,pH为9,超声温度70℃,超声时间30 min.欧前胡素的质量浓度在3.0～30.0μg/mL (R=0.999)内与吸光度呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.03％,RSD=2.4％(n=3).该方法操作简单,结果准确,可用于白芷愈伤组织中总香豆素的质量分数测定.利用该方法对白芷愈伤组织和白芷药材进行同时提取测定,结果表明白芷愈伤组织中总香豆素的质量分数是白芷药材中的9.7倍.     

盐地碱蓬超氧化物歧化酶的提取及抗氧化活性的研究

以盐地碱蓬为原料提取超氧化物歧化酶(SOD),采用邻苯三酚自氧化法对其酶活进行测定。实验结果表明:10g盐地碱蓬中提取的SOD,经硫酸铵分级沉淀、氯仿/乙醇沉淀、丙酮沉淀及热处理后,酶活分别为427.035U/mg、648.6736U/mg和1181.856U/mg。     

Se（Ⅳ）-溴邻苯三酚红-KBrO3体系阻抑动力学光度法测定痕量硒

本文研究了在HCl介质中,溴邻苯三酚红(BPB)与KBrO3之间的氧化褪色反应,该反应在常温下即可发生,且为快反应,Se(Ⅳ)能明显阻抑溴邻苯三酚红与KBrO3之间的氧化褪色反应,且Se(Ⅳ)的浓度与两体系吸光度之差△A(△A=A(阻抑体系吸光度值)-A0(非阻抑体系吸光度值))成线性关系,且△A在30分钟内几乎没有变化,体系稳定,反应允许在一定时间内测定其吸光度值,从而建立其动力学光度法测定硒的新方法。本方法简单、选择性好、可用于大蒜、黑木耳中硒的测定。     

Se（Ⅳ）-溴邻苯三酚红-KBrO3体系阻抑动力学光度法测定痕量晒

本文研究了在HCl介质中,溴邻苯三酚红（BPB）与KBrO3之间的氧化褪色反应,该反应在常温下即可发生,且为快反应,Se（Ⅳ）能明显阻抑溴邻苯三酚红与KBrO3之间的氧化褪色反应,且Se（Ⅳ）的浓度与两体系吸光度之差△A（△A=A（阻抑体系吸光度值）-Ao（非阻抑体系吸光度值））成线性关系,且△A在30分钟内几乎没有变化,体系稳定,反应允许在一定时间内测定其吸光度值,从而建立其动力学光度法测定硒的新方法。本方法简单、选择性好、可用于大蒜、黑木耳中硒的测定。