利用妊娠奶牛血液快速鉴定不同发育阶段的胚胎性别

采集妊娠奶牛静脉血液，从血浆中提取胎儿DNA，利用牛Y染色体上性别决定基因（sex-determining region Ylinked gene, SRY gene）的特异性序列设计引物，应用巢式PCR扩增SRY基因特异性片段，同时以牛肌动蛋白（β-Actin）特异性片段的扩增产物作为内参照，对32头妊娠奶牛早期胚胎性别进行鉴定。结果表明：从不同妊娠期奶牛血浆中提取胎儿游离DNA进行胚胎性别鉴定的总准确率为80％，其中1～2月龄、2～3月龄、4～8月龄胚胎性别鉴定的准确率分别为60％、85．7％、92．3％。     

奶牛胎儿细胞多位点基因打靶的研究

利用奶牛rDNA基因间的ITS重复序列作为靶位点,对奶牛胎儿成纤维细胞进行多位点基因打靶,建立以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术,并为克隆定点转基因奶牛提供核供体。首先分离培养出奶牛胎儿成纤维细胞,并进行性别鉴定和核型分析。采用MTT比色法确定了G418和GCV正负筛选的最低有效浓度。然后通过多位点基因打靶载体转染、正负筛选获得7个表达绿色荧光的克隆细胞系,经PCR,RT-PCR和测序证实其中1个细胞系为定点整合的克隆细胞系,且GFP基因表达。     

青鳉DMY基因的克隆及其在性别鉴定中的应用

提取雄性青鳉成鱼基因组DNA为模板,利用特异性引物,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增获得1 908 bp的特异性条带.经测序证明为DMY基因片段,其核苷酸序列由3个外显子和2个内含子组成,可连续编码150个氨基酸.建立准确而有效的鉴定任意发育阶段青鳉个体雌雄性别基因型的方法,即利用管家基因——肌动蛋白基因PCR扩增条带的有无验证DNA样本提取和PCR扩增的有效性,同时利用雄性DMY基因的PCR扩增条带的有无鉴定青鳉个体的雌雄性别.对随机选取的成鱼和新生鱼卵样本,应用该方法可成功地鉴定出青鳉个体的雌雄性别.     

两种观赏鸟性别的快速鉴定研究

虽然CHD基因的保守性和性特异性引物已被广泛应用于性别鉴定领域,但羽毛样以及PCR体系等的选择却会产生不同的鉴定效果,因此如何对这些影响单性态观赏性鸟类性别鉴定的多重因素进行最优化处理以达到快速鉴定的目的,就成了人工繁育过程中最亟待解决的问题.本文用固定影响因素(PCR体系除外)的方法,对PCR体系进行优化处理,羽毛提取DNA,然后CHD基因的相关引物进行性别鉴定.结果表明:所有雌性鸟类得到CHD-Z和CHD-W的两条带,雄性1条CHD-Z带的高效鉴定.因此,确立了此类鸟的快速鉴定体系,即画眉鸟性别鉴定体系,用于鉴定换羽季的画眉鸟的性别;以及红嘴相思鸟性别鉴定体系,用于鉴定红嘴相思鸟的性别;同时可为多种体型相似的鸟类的快速鉴定提供参考.     

两重巢式PCR检测母体外周血中胎儿游离DNA

使用两重巢式PCR技术检测母体外周血中胎儿游离DNA,为非损伤性产前鉴定胎儿性别和诊断单基因疾病奠定基础.采用改良的chelex100方法提取60例孕龄为16~36周孕妇的外周血浆中游离胎儿DNA,依据NCBIX染色体长臂ATL1位点,Y染色体上DYS14位点序列,设计并合成引物,用巢式PCR同时扩增2个基因片段,以鉴定胎儿性别.结果表明:有ATL1位点和DYS14位点的扩增产物261bp和198bp鉴定为男性胎儿,而仅有261bp扩增产物鉴定为女性胎儿.均以真实出生性别进行确认后发现,此方法能有效提高检测特异性.两重巢式PCR能够简便并准确地鉴定胎儿性别,对单基因疾病特别是X-连锁遗传病的诊断有积极意义.     

鸟类性别鉴定方法及性别决定分子机制研究进展

性别鉴定对鸟类特别是珍稀濒危鸟类的人工饲养、繁育和进化研究等方面都有非常重要的意义.鸟类的性别决定是一个多基因级联调控的复杂过程,受Z染色体连锁的DMRT1基因、W染色体连锁的PKC1W和其他多种因子共同调控.PCR鉴定法尤其是CHD1基因扩增法是迄今为止最为简单快捷、安全准确的鸟类性别鉴定的方法.     

扩增性别基因片段的鹭类性别鉴定方法的研究

以鹳形目5种鹭科鸟类和1种鹮科鸟类的组织为实验材料，采用PCR方法扩增其性别基因相关片段，探讨鹭科鸟类性别的分子鉴定方法．通过测定3对已知性别的白鹭（Egretta garzetta）、岩鹭（Egretta sacra）和黄嘴白鹭（Egretta eulophotes）以及12只未知性别的夜鹭（Nycticorax nycticorax）、池鹭（Ardeola bacchus）、白鹭、牛背鹭（Bubulcus ibis）黑脸琵鹭（Platalea minor）的性别基因CHD或EE0．6上的基因相关片段并进行比较．结果表明，通过扩增EE0．6或CHD基因片段的性别鉴定分子方法都能够适用于鹭科鸟类的性别鉴定，由此能够解决鹭科鸟类雌雄外形同色而难以从外貌上区分其性别的问题．     

扩增性别基因片段的鹭类性别鉴定方法的研究

以鹳形目5种鹭科鸟类和1种鹮科鸟类的组织为实验材料,采用PCR方法扩增其性别基因相关片段,探讨鹭科鸟类性别的分子鉴定方法.通过测定3对已知性别的白鹭(Egretta garzetta)、岩鹭(Egretta sacra)和黄嘴白鹭(Egretta eulophotes)以及12只未知性别的夜鹭(Nycticorax nycticorax)、池鹭(Ardeola bacchus)、白鹭、牛背鹭(Bubulcus ibis) 黑脸琵鹭(Platalea minor)的性别基因CHD或EE0.6上的基因相关片段并进行比较.结果表明,通过扩增EE0.6或CHD基因片段的性别鉴定分子方法都能够适用于鹭科鸟类的性别鉴定,由此能够解决鹭科鸟类雌雄外形同色而难以从外貌上区分其性别的问题.     

与银杏性别相关的RAPD标记

应用Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD)技术,筛选与银杏性别相关的分子标记,应用150个10bp随机单引物及110对随机引物组合,检测了雌雄银杏的基因组DNA,获得1个与雄性相关的RAPD标记,该标记的获得,可望进一步转化为Sequence Characterized Amplification Region(SCAR)标记或PCR标记,用于银杏早期的性别鉴定,同时该标记的获得为进一步克隆与其性别相关的基因奠定了基础。     

鸟类性别鉴定的方法及性比研究的进展

了解鸟类种群的性比状况,就要找到一种适合该种群的快捷方便、采样量少、鉴定精度高的性别鉴定方法,并利用此方法统计该种群性比现状.总结了并比较了鸟类性别鉴定的各种方法,并指出针对性染色体特异基因序列(CHD基因)的聚合酶链式反应(PCR)方法,是迄今发现适用范围最广、最为简单快捷、准确可靠的、常见的鸟类性别鉴定的方法.介绍了利用该方法对鸟类性比研究的进展.     

Excel规划求解在奶牛生产中的应用

借助Excel2 0 0 0“线性规划求解”功能 ,结合饲料配方设计要求 ,以线性规划求解建立数学模型 ,根据奶牛的饲养标准 ,能快速、简单地求解奶牛饲料配方 ,在最低成本下实现对原料和营养成分的有效调控 .为计算机在奶牛生产中的应用提供了一定的参考价值 .     

PCR用于孕牛外周血中胎儿SRY序列检测和奶牛早期胚胎性别鉴定

根据文献报道的人，鼠，兔ＳＲＹ同源序列设计引物，从牛基因组中扩增出一段牛特异的ＳＲＹ序列，对该序列进行克隆测序后设计出一对雄牛特异的ＰＣＲ引物，利用此引物对奶牛早期胚胎细胞和妊娠晚期母牛外周血ＤＮＡ样品进行ＰＣＲ扩增，经分娩牛犊性别验证，本引物能够准确鉴别孕牛外周血中雄性胎儿的ＳＲＹ序列，并且对早期胚胎性别签定的准确率为８０％．     

对成都地区乳牛经济饲养期的技术分析

通过对成都地区乳牛业的调查，并采用投入－产出的技术经济分析方法，确定了成都地区乳牛业最经济的饲养期，为增加乳牛业的经济效益提供了依据。     

牦牛SRY和TRO基因部分序列克隆与测序分析

对牦牛SRY和TRO的部分基因克隆和序列分析,以期为牦牛X精子和Y精子鉴定、性染色体的基因定位以及分子标记辅助选择研究提供理论依据.从牦牛和西门塔尔牛冷冻精液中提取DNA,用特定引物对SRY、TRO基因部分序列进行扩增并进行TA克隆和测序.结果表明,这两个基因区域在牛种中有极高的保守性,牦牛与普通牛SRY和TRO基因这两个区域的核酸同源性分别高达99.08%和99.39%.     

促孕散治疗奶牛卵巢疾病引起不孕症的研究

本研究用促孕散对奶牛持久黄体和卵巢静止进行分组治疗，并与激素治疗作对比。结果表明，促孕散治疗持久黄体试验牛发情有效率为97．62％，配种受胎率为90．24％；促孕散治疗卵巢静止试验牛发情有效率为92．59％，配种受胎率为92．0％；经氯前列烯醇治疗持久黄体试验牛的配种受胎率为71．11％，经绒毛膜促性腺激素治疗卵巢静止试验牛的配种受胎率为58．33％。由此说明，促孕散在治疗奶牛持久黄体和卵巢静止性不孕症中效果显著。     

奶牛复合预混料饲养效果试验

试验选择处于产奶高峰期的奶牛20头，随机分成两组，每组10头，试验组奶牛饲喂我们自己研制的奶牛复合预混料．试验结果表明，试验组奶牛产奶量提高11．2％(p＜0．05)，单位产奶成本降低6．7％。     

牛亚科3个主要家养牛种MyoG基因多态性及其遗传分化

对普通牛(鲁西牛、渤海黑牛)、天祝牦牛和中国广西水牛的MyoG基因部分核苷酸序列变异进行了分析,旨在揭示不同牛种群的DNA多态性及其遗传分化.采用PCR和DNA直接测序技术获得4个牛群体的MyoG基因exon 1和5’侧翼部分序列,与GenBanK公布的牛亚科动物同源序列作比对分析.结果显示,在渤海黑牛和牦牛未发现多态位点;鲁西牛存在1个多态位点,定义了2个单倍型;水牛有6个突变位点,但群内只发现1个多态位点.核苷核苷酸多样性(Pi)在0.000 00～0.001 35之间,说明群体内遗传多态性程度较低。核苷酸歧义度(Dxy)以水牛与鲁西牛之间比较最高,为0.013 97,表明水牛遗传分化明显.种系进化树分析表明,牦牛与普通牛亲缘关系很近,二者与水牛关系较远,支持将牦牛归为牛属(Bos)的一个亚属或一个种的观点.     

家猪BMP-2、BMP-3基因克隆及其组织表达探究

本研究以长白猪(Landrace)肺cDNA为模板,扩增获得猪骨形态发生蛋白BMP-2和BMP-3基因的cDNA全长.BMP-2基因cDNA全长为1742bp,编码395个氨基酸的前体蛋白,与人、牛、绵羊、大鼠、小鼠等的BMP-2基因的氨基酸序列一致性分别94.18%,95.4%,95.2%,90.3%,90.60%;BMP-3基因cDNA全长为1639bp,编码475个氨基酸的前体蛋白,猪与人、牛、绵羊、大鼠、小鼠等的BMP-3氨基酸序列的一致性分别是84.7%、87.7%、82.3%、80.4%、79.5%.采用RT-PCR方法,对BMP-2、3基因在家猪主要组织的表达进行探究.结果显示:BMP-2在所有组织中均有表达;而BMP-3在脑、肺、小肠中表达量较高,其他组织中表达量弱.     

黑斑蛙Dmrt4基因的克隆测序

Dmrt基因家族是新近发现的一个与性别决定相关的基因家族.该家族成员都含有一个新的具有DNA结合能力的保守基序--DM结构域,它们在性别决定和分化发育的调控中担负重要的功能.本文采用简并PCR技术,扩增并克隆了黑斑蛙基因组中的DM结构域,经序列分析,获得了Dmrt家族的一个成员rnDmrt4.通过对不同进化地位的物种进行Dmrt4基因的氨基酸序列聚类,发现了Dmrt4基因在系统进化中具有高度保守性,提示该基因在性别分化和功能维持上可能具有重要作用.     

Individual Dairy Cattle Recognition Based on Deep Convolutional Neural Network

Image based individual dairy cattle recognition has gained much attention recently. In order to further improve the accuracy of individual dairy cattle recognition, an algorithm based on deep convolutional neural network( DCNN) is proposed in this paper,which enables automatic feature extraction and classification that outperforms traditional hand craft features. Through making multigroup comparison experiments including different network layers,different sizes of convolution kernel and different feature dimensions in full connection layer,we demonstrate that the proposed method is suitable for dairy cattle classification. The experimental results show that the accuracy is significantly higher compared to two traditional image processing algorithms: scale invariant feature transform( SIFT) algorithm and bag of feature( BOF) model.