油菜饼蛋白提取物对饲料中霉菌抑制作用的研究

通过硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶柱层析和HPLC分离等方法,从油菜饼的水溶性成分中分离得到蛋白质(肽)提取物.采用抑菌圈法测定该蛋白(肽)提取物的抑菌活性,结果表明对受试真菌有明显的抑制作用.对该蛋白(肽)提取物的稳定性测定表明,加热到90℃未丧失活性,对酸碱的适应范围也较大,在pH 7～8的时候抑菌效果最为明显,对蛋白酶K和胰蛋白酶敏感.通过与几种防腐剂对饲料中霉菌抑制作用的比较发现,油菜饼蛋白(肽)提取物的防霉性能优于恩拉鼎(Enramycin)预混剂、富马酸,仅次于复合型防霉剂霉必克,可以开发成为一种高效的植物源性饲料防腐剂.     

黑腹果蝇抗真菌肽基因Drs的真核可溶性表达

将黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）抗真菌肽基因Drosomycin（Drs）克隆到pPICZα-A载体中,构建分泌型表达载体pPICZα-A-Drs,转化宿主菌Pichia pastoris X-33.在 AOX1（醇氧化酶）启动子调控下,抗真菌肽DRS成功表达,其分子量约为5 kD.抑菌试验显示,DRS对供试真菌有明显的抑菌活性.采用考马斯亮蓝法测定抗真菌肽的具体表达量,并优化了诱导条件.     

宣威火腿中抗菌肽的分离、纯化及鉴定

为探究干腌火腿中生物活性多肽的抗菌活性及其组成,选取产自中国云南省曲靖地区的宣威火腿为材料,通过缓冲液浸提的方法提取火腿中的多肽成分。以粗提多肽对单增李斯特菌和O157型大肠杆菌的生长抑制情况为指标进行抗菌性评价,同时结合离子交换色谱、尺寸排阻色谱等技术对宣威火腿粗多肽进行分离与纯化,并选取其中抑菌活性较强的组分进行氨基酸序列测定。抑菌实验发现宣威火腿粗多肽具有显著抑制单增李斯特菌和O157型大肠杆菌生长的效果；经过逐级分离纯化得到的各组分具有不同的抑菌活性。其中组分7活性最强,对大肠杆菌和李斯特菌的抑菌率分别为98%和56%。通过Nano-LC-ESI-MS/MS肽序列鉴定,最终得到抑菌活性较强的多肽序列,分别为QYYNGEEHVRFDSDVGEYR、LRNLPNLEVLDLGTNFI、FASFEAQGALANIAVDK。将鉴定得到的3条多肽化学合成后进行抑菌实验发现,合成多肽均具有较好的抑菌效果,对O157型大肠杆菌的生长抑制效果均显著高于单增李斯特菌。研究结果表明宣威火腿中含有抑菌效果的肽类成分,从而为阐释宣威火腿多肽的功能特征提供理论依据。     

桂花果皮醇提物的抑菌活性和抗氧化活性的研究

研究桂花果皮乙醇提取物的功能,测定其抑菌活性、抗氧化活性.抑菌活性的测定采用滤纸片扩散法、比浊法和二倍稀释法,以抑菌圈、MIC为指标,评价桂花果皮乙醇提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果.抗氧化活性的检测采用DPPH·清除法和ABTS·清除法.结果表明,桂花果皮乙醇提取物具有显著的抑菌活性,同时也有明显的抗氧化活性,因此,可在功能性食品或化妆品中发挥作用.     

大鲵蜕皮中小分子肽的鉴定及抗菌活性

为了研究大鲵蜕皮中具有抗菌活性的小分子肽,采用SDS-PAGE电泳和SephadexG-75凝胶层析分离分析大鲵蜕皮中的成分,并采用氯化三苯四氮唑微量稀释法检测了抑菌活性。结果表明:大鲵蜕皮含有一种分子量约为15 000的小分子肽,该物质对5种试验菌种均有一定抑制活性。大鲵蜕皮发现的小分子肽可能是一种新的抑菌肽,其可能为大鲵人工养殖创造出新的产业价值。     

紫茎泽兰提取物抑制食源性致病菌的研究

用黄芪,苦参,狼毒提取物为阳性对照对紫茎泽兰提取物进行抑菌活性比较.并利用液液萃取、色谱法对紫荆泽兰醇提物进行分离精制.结果表明,紫茎泽兰醇提物具有明显抑菌效果,且效果优于狼毒提取物和黄芪提取物;对紫茎泽兰醇提物进行分离精制及抑菌试验,结果显示其乙酸乙酯萃取物柱层析组分SF4-2抑菌活性最强,能显著抑制沙门氏菌, 蜡样芽孢杆菌, 金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌生长, 可用于食源性抗菌制剂的开发利用.     

肉桂精油的GC-MS成分分析及对霉菌的抑菌活性研究

采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)检测分析,肉桂精油的主要活性成分为肉桂醛(81.1%),乙酸肉桂酯(5.954%),香豆素(5.689%),苯甲醛(1.246%).通过琼脂平板抑菌圈实验比较肉桂精油和肉桂醛对博物馆空气来源的三种霉菌的抑菌效果,实验结果表明,肉桂精油及肉桂醛对霉菌有明显的抑菌效果,相同剂量(10μL)肉桂醛抗菌活性比肉桂精油的抗菌活性大.肉桂精油及其活性物质肉桂醛在博物馆空气中抑菌防霉具有良好的发展前景.     

不同物质对黄芪根腐病致病菌的抑制作用

采用生物测定的方法,选择苦参碱、槐啶碱、槐果碱、对羟基苯甲酸和阿魏酸5种物质,研究各物质水和丙酮溶液以及不同物质丙酮混合溶液对黄芪根腐病2种主要致病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制活性和最低抑菌质量浓度.结果表明:不同物质对2种致病菌菌丝生长和孢子萌发的影响不同,同种物质丙酮溶液的抑菌效果明显好于水溶液的抑菌效果.3种生物碱对2种致病菌菌丝生长的抑制作用比较显著,其中槐啶碱丙酮溶液的抑菌活性最强,在质量浓度为1.00 g/L时的相对抑制率分别为43.63%,27.10%,最低抑菌质量浓度均为0.062 5 g/L.2种酚酸类物质对2种致病菌孢子萌发的抑制作用明显强于对菌丝生长的抑制作用.不同物质丙酮混合溶液对2种致病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制活性与单个物质丙酮溶液无明显差异,抑制效果最好的槐啶碱和苦参碱混合液对2种致病菌抑制的EC50为31.62,10.00 g/L,最低抑菌质量浓度均为0.062 5 g/L.不同物质的水和丙酮溶液对2种致病菌活性的抑制作用存在明显的浓度效应,抑制作用随溶液浓度降低而减弱.     

抗菌肽Protegrin基因的定点诱变改良研究

通过对抗菌肽Protegrin成熟肽的氨基酸组成和作用机理分析,并根据已报道的Protegrin基因序列设计引物,PCR扩增获得定点诱变的突变体基因pg-g,其编码蛋白的末端相对于野生型增加1个非极性氨基酸Gly.利用表达载体pET-28a将突变体基因pg-g转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE检测表明目的蛋白得到成功表达.通过对表达产物进行抑菌实验发现,定点突变基因pg-g表达产物对大肠杆菌的抑菌效果有明显提高.     

抗黄瓜灰霉病的枯草芽孢杆菌筛选及其抑菌活性的初步研究

结合涂布平板法和温室盆栽植株法,测定了41株枯草芽孢杆菌发酵液对灰霉病病原菌及黄瓜灰霉病的抑制效果,以此筛选出针对灰霉病的生防菌株.结果表明,抑菌效果最好的枯草芽孢杆菌为BS01和BS03.采用涂布平板法研究了菌株BS01和BS03抑菌活性,结果表明,抑菌效果均为50%时,BS03比BS01的菌体浓度低,得到抑菌效果最好的菌株BS03.采用温室盆栽植株法测试了菌株BS03的抑菌活性,结果表明,菌悬液比发酵滤液的抑菌效果好,并且在菌悬液处理黄瓜苗后的第3天抑菌活性最高.     

基于白色念珠菌体外抑菌效果的复方苦参洗剂抑菌作用评价

观察复方苦参洗剂中君、臣、佐各药组联合抑菌性质以及协同增效作用。采用加热回流水提法提取各药组获得相应提取液,采用二倍稀释法测得相应各药组单用及联合对白色念珠菌的最低抑菌浓度(ρMIC)，采用联合抑菌指数（IFIC）判定两药组联合抑菌作用性质。结果显示，8味中药水提液的ρMIC范围为7.50 ~30.00 mg/mL,君、臣、佐各药组的 ρMIC范围为4.01 ~21.00 mg/mL，复方组ρMIC为2.22 mg/mL，黄柏+苦参、黄柏+白矾、花椒+白矾的IFIC≤0.5，黄柏+花椒、苦参+花椒、苦参+白矾3组0.5＜IFIC≤1；君药组+臣药组IFIC=0.375 0，君药组+佐药组IFIC=0.750 0，臣药组+佐药组IFIC=1.000 0。复方组及君药组的联合抑菌效果明显强于单味中药的抑菌效果，黄柏、苦参、花椒、白矾4味君药对白色念珠菌抑菌活性较强，复方苦参洗剂抑菌效果的增强与各药组抑菌作用的协同和相加有关。     

MTT法在抗真菌药敏实验中的应用

目的：研究MTT法在抗真菌药敏实验中的应用。方法：采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐方案测定两性霉素B和伊曲康唑对5种常见真菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、申克孢子丝菌和石膏样小孢子癣菌)的最低抑菌浓度(MIC)，终点判定分别采用NCCLS推荐的直接观察法和MTT法，对两法进行比较。结果：MTT法与常规直接观察法进行MIC终点判定所得结果具有很好的一致性。MTT法测得的A值与接种菌量具有正相关性。两性霉素B与伊曲康唑对丝状真菌和念珠菌都具有很好的抑制作用，MTT法测得的A值随药物浓度的增加而显降低。结论：MTT法较之常规直接观察法结果更为客观、准确，且可量化，因而可以很好的替代肉眼观察法来判定真菌药敏试验的终点。     

抗真菌药硝酸芬替康唑合成工艺改进

通过一个新方法合成了抗真菌药硝酸芬替康唑,克服了文献报道方法的缺点与不足,操作简便,条件温和,收率稳定,适于工业化推广.结果表明:反应溶剂为四氢呋喃,反应温度25℃,反应时间10 h,为较佳反应条件,总收率可达21.3%.目标物的结构经元素分析IR、1H-NMR及MS等方法确证.     

(E)-3-芳亚甲基色满酮类化合物的快速合成及其抑真菌活性

在微波辐射下,通过色满酮与芳香醛的缩合反应,快速合成了12个新的(E)-3-芳亚甲基色满酮类化合物2a～2l.所有化合物结构均经IR,1 H NMR,13 C NMR及元素分析确认.初步的抑菌活性测定结果表明:目标化合物在质量浓度100mg/L下对5种供试的植物病原真菌表现出不同程度的抑菌活性.其中化合物(E)-6-氯-3-(2,4-二氯苯基)亚甲基色满酮2c对梨黑斑病菌抑制活性最强,抑制率为68.2%.     

新型抗真菌药布替萘芬类似物的合成

根据苄胺类抗真菌化合物的构效关系、作用机理，设计合成了5个布替萘芬类似物，N-(2-氯-5-吡啶甲基)-N-甲基．1-萘甲胺，N，N-二(4-叔丁基苄基)-1-萘甲胺，N-(4-叔丁基苄基)-N-(2．氯-5-吡啶甲基)-1-萘甲胺，N，N-二苄基4叔丁基苯甲胺，N．(2-氯-5-吡啶甲基)-N-苄基4叔丁基苯甲胺．扩展了该类药物的研究范围．     

一株Burkholderia细菌的抗植物病源真菌及生物学特陛的研究

目的 研究分离的一株Burkholderia细菌对病原真菌的拮抗功能及其生物学特性.方法 通过纸片法和菌块法分别对Burkholderia菌体及培养上清液作了抑菌活性测定,并对其碳、氮源利用,最适温度、pH等生长条件也进行了测定.同时,还测定了siderophores和氢氰酸等的生成.结果 发现细菌对小麦赤霉、烟草赤星、马铃薯干腐、西瓜枯萎,及棉花、番茄、酥梨病害的霉菌有明显的和不同程度的抑制作用.同时还发现该菌产生少量Sidemphores.结论 Burkholderia细菌可用于多种植物霉菌病害的生物防治.