利用AFLP-银染法筛选与抗甘蓝黑腐病性状连锁的分子标记

利用ＡＦＬＰ－银染法在一对花椰菜抗、感黑腐病的近等基因系中筛选到四个与抗黑腐病性状、一个与感黑腐病性状连锁的ＤＮＡ 分子标记．对其中一个４００ｂｐ 的抗病标记进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交检测,结果表明该标记在抗病品系中存在明显的杂交信号,而在感病品系中无杂交信号．该标记测序后,通过Ｇｅｎｂａｎｋ 进行同源性检测,发现其与拟南芥菜ＢＡＣ克隆Ｆ７Ｎ２２ 部分序列有７５％ 的同源性．该ＢＡＣ克隆位于拟南芥菜５ 号染色体的黑腐病抗性基因（ｒｘｃ２）附近．这意味着该标记可能与甘蓝黑腐病抗性基因紧密连锁．     

杀虫剂的选择作用对小菜蛾表达蛋白质的影响

运用蛋白质双向电泳分析技术，通过对成虫蛋白质的提取，分离出水溶性的蛋白质组分，对比研究了溴氰菊酯抗性品系、杀螟丹抗性品系、杀虫双抗性品系和敏感品系小菜蛾成虫的蛋白质在表达上的差异．通过对电泳图谱分析，在澳氰菊酯的抗性和敏感品系中抉得了8个特异的蛋白质斑点，pH5．0～8．1，相对分子质量为46000～23000；在抗杀螟丹品系中得到了8个特异斑点，pH4．6～81，相对分子质量为92000～18000；在杀虫双的执性品系和敏感品系中产生了6个特异斑点，pH5．5～7．1，相对分子质量为31000—28000．虽然抗性品系是敏感品系通过多年的室内逐代的药剂选掸获得的，但是在杀虫刺选择压力作用下所引起的表达蛋白质的差异是否与浪氰菊酯、系螟丹和杀虫双的抗性有关还需进一步证实．     

花椰菜(Brassica oleracea var.botrytis)黑腐病抗性基因同源序列分离及克隆的研究

通过从NBS保守序列设计简并引物PCR的方法，以花椰菜（Brassica oleracea var．botrytis）抗、感黑腐病的近等基因系为材料，分离得到NBS-LRR型抗性基因同源序列，并获得1个克隆，命名为RGA330—7．Southern杂交表明，该片段在近等基因系中存在明显的多态性，且该片段在抗黑腐病基因位点至少存在3个以上类似RGA330—7的同源拷贝．序列分析结果认为该克隆与NBS—LRR型抗性基因的部分CDSs有很高的同源性，说明该片段属于NBS—LRR型．系统进化分析该序列与甘蓝型油菜的2个抗病同源序列归为一类，很可能这3个不同来源的抗性基因同源序列同属于一种抗性基因家族．因此推测该序列与花椰菜抗黑腐病基因紧密相关，为进一步克隆花椰菜抗黑腐病基因提供了可靠的候选基因，对分子标记辅助抗性育种具有重要意义。     

小菜蛾对杀虫双和杀螟丹抗性与艾氏剂环氧化活性

利用室内选育１１９代的抗杀虫双、抗杀螟丹小菜蛾品系和敏感品系,研究了各杂交世代小菜蛾对杀虫双和杀螟丹的敏感性．通过反复回交建立小菜蛾对杀虫双和杀螟丹抗性的近等基因系．测定了各杂交世代和近等基因系的多功能氧化酶环氧化活性．结果表明,抗性品系和抗性近等基因系多功能氧化酶环氧化活性比敏感品系高,杀虫双、杀螟丹抗性品系和杀虫双、杀螟丹抗性近等基因系分别是敏感品系的１．６２、１．８３、１．５６和１．９７倍,因此,多功能氧化酶环氧化活性提高与小菜蛾对杀虫双和杀螟丹抗性有关     

转基因油菜雄性不育系15A及其恢复系菌核病抗性的鉴定与筛选

采用苗期接种法对湖南油料所构建及选育的转基因油菜雄性不育系15A、胞质三系不育系742A,常规油菜恢复系695、780的抗耐油菜菌核病进行鉴定,结果表明,4个品种均为抗性品种,其中15A为中抗,742A、695、780为低抗。四个品系的病情指数均比对照中油821低。各品系单株之间抗性存在明显差异。     

甘蓝型油菜常规育种研究

以青油14号为母本,分别与10个优良的品种(品系)杂交,从后代筛选优良单株,获得了一些产量、抗病性比青油14号好的品系,产量增幅为8.5%~28.8%,菌核病发病率降低了29.0%~70.2%,其中14号×宽托姆达到显著水平。     

花椰菜查尔酮合酶基因的克隆及功能分析

基于同源序列克隆技术,从花椰菜中克隆了查尔酮合酶(chalcone synthase;CHS)基因cDNA全长,将该基因成功转入花椰菜,经过Basta抗性筛选,PCR鉴定,得到7株花椰菜转基因过表达阳性植株.转基因花椰菜的核盘菌胁迫分析显示,与对照花椰菜相比,在病原胁迫的不同时期,转基因植株中BoCHS基因的表达量显著上升,且随着胁迫时间的增加,该基因表达量均增高,且在36 h时达到最大值,表明转基因花椰菜通过过量表达CHS来增强自身对菌核病的抗性,使植株对菌核病的抗性明显增强.与查尔酮合酶在油菜、向日葵、烟草等中的抗病作用一致,表明花椰菜BoCHS基因也是抗菌核病的重要基因.     

溴氰菊酯抗感品系小菜蛾成虫差异表达蛋白的鉴定

通过对小菜蛾Plutella xylostella(L.)抗溴氰菊酯品系和敏感品系成虫双向电泳图谱的比较,找到8个差异明显的点,并结合质谱分析技术和数据库信息检索最终鉴定出7个蛋白.其中包括2个代谢相关蛋白,2个调控蛋白,1个结构分子蛋白,其余2个蛋白质功能皆不明确.这些在抗性或敏感品系中差异表达蛋白质的发现,为进一步研究小菜蛾抗药性形成机制和抗性相关蛋白的寻找奠定了基础.     

α-三噻吩对白纹伊蚊抗溴氰菊酯品系幼虫的毒杀作用

目的：研究α-三噻吩（α-T）对白纹伊蚊抗溴氰菊酯品系幼虫的毒杀效果,与溴氰菊酯类药物是否存在交互抗性及对抗性品系幼虫生长发育的影响。方法：按WHO推荐的方法（幼虫浸渍法）测定α-T对白纹伊蚊抗性品系和敏感品系幼虫的LC50、LC95,α-T作用后抗性幼虫的化蛹率、羽化率、平均化蛹时间及平均羽化时间。结果：α-T对溴氰菊酯抗性品系幼虫的IC50为9．09μg／L,敏感品系幼虫LC50为5．34μg／L;α-T与溴氰菊酯的交互抗性倍数为1．70,α-T与拟除虫菊醋类药物溴氰菊醋之间不存在交互抗性;α-T能够显著抑制白纹伊蚊抗溴氰菊酯品系幼虫的发育和羽化：实验组的累计化蛹率（73．41％）,累计羽化率（55．17％）明显低于对照组（83．44％、85．48％）,平均化蛹时间（5．52d）、平均羽化时间（5．91d）均较对照组（3．87d、3．16d）明显延长。结论：α-T对常规农药产生抗性的蚊幼虫,是一种高效、实用的杀虫剂。     

两种优势病原菌玉米穗腐病的研究比较

玉米穗腐病是一种严重危害玉米生长的世界性农业病害,以引起中国玉米穗腐病的两种优势病原菌拟轮枝镰孢菌（Fusarium verticillioides）和禾谷镰孢菌（Furasium graminearum）为对象,对其生物学特征、症状危害及发病机制进行对比.在此基础上,对两种优势病原菌玉米穗腐病的抗性种质筛选、抗性遗传与育种进行比较阐述,以期为中国玉米穗腐病的研究与防治提供科学依据.     

新疆向日葵菌核病品种抗病性的鉴定初报

采用皮壳法、草酸法和菌土法对11个向日葵品种进行菌核病抗性鉴定，结果表明：品种间抗性存在一定差异，其中油葵KWS303表现出一定的抗性；对于其他品种，不同接种方法间存在较大差别，但基本都属于高感品种；3种方法各有其特点和不足之处，生产中应进行优化，扬长避短，并结合病圃鉴定以便得出准确的结果。     

菌核病接种方法及新疆核盘菌致病力差异的初步研究

以采自新疆6种不同作物上的核盘菌作为供试菌株,对植株苗期抗病性鉴定方法进行筛选,同时测定了不同寄主来源的菌株间在生物学特性、草酸的产生能力及致病力上的差异。结果显示:菌丝块贴接法和草酸浇灌法都能用于抗性植株的筛选,且草酸浇灌法可作为苗期鉴定抗病性的一种快速简便的方法。不同寄主来源的菌株的致病力、生物学特性及草酸的产生能力都存在明显的差异,来自马铃薯的菌株致病力最弱,但所有菌株对供试的各向日葵品种致病力均较强。     

向日葵菌核病研究进展

对向日葵菌核病的症状、病原菌及侵染特性、抗病性及防治措施做了系统概述.     

核盘菌交配型基因mat1-1敲除载体的构建及转化

利用根癌农杆菌介导真菌遗传转化方法对核盘菌的交配型基因mat1-1进行基因同源重组的敲除对比实验,获得了缺失mat1-1基因的转化菌株.先利用PCR方法获得mat1-1基因的左右两侧片段,将测序正确的两个侧翼片段分别重组到农杆菌转化载体PBI-G3C中,并将新霉素抗性标记引入农杆菌转化载体PBI-G3C中,构建成农杆菌介导转化核盘菌的打靶载体ΔPBI-G3CN-mat1-1,再将ΔPBI-G3CN-mat1-1质粒转化至根癌农杆菌EHA105中.利用核盘菌菌丝进行转化,将得到的转化菌株,利用PCR方法进行验证,证实有敲除菌株存在.通过对敲除菌株进行生理表型的测定发现,缺失mat1-1基因的敲除菌株其生长速度与野生核盘菌菌株相比无明显差异,但敲除菌株不能产生菌核与子囊盘.     

金荞麦提取物对植物病原菌的抑菌活性初探

用金荞麦不同极性溶剂提取物对10种植物病原菌进行抑菌活性筛选研究,结果表明,金荞麦提取物对松赤枯病菌(Pestalotia funereal),玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani),油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum),玉米弯胞杆菌[Curvularia Lunata(walk)Boed],小麦赤霉病菌[Gibberelle zeae(schw)],绿色木霉(Trichoderma viride)都有明显的抑制作用,但是对水稻稻瘟病菌(Pyricularia oryzae),黑曲霉(Aspergillus niger),柑橘绿霉(Penicillium digita-tum),镰刀菌(Fusariumsp.)却无抑制作用.     

链霉菌(Streptomyces sp103)发酵产物对4种病原真菌的抑菌活性

采用生长速率法测定了链霉菌Streptomyces sp103的发酵液及其菌丝体的乙醇提取物对小麦赤霉病病菌、苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌、油菜菌核病病菌4种病原真菌的抑菌活性.结果表明:发酵液对4种病原真菌的相对抑制率分别为100%,86.7%,82.9%和100%,而其菌丝体的乙醇提取物对3种病原真菌的相对抑制率均为100%.     

周口地区油菜核盘菌分离鉴定及侵染分析

从河南省周口市采集感染菌核病的油菜,对菌核进行分离和鉴定.采用单孢分离法分离得到1个单菌系,对该单菌系进行了菌落和显微形态分析,初步鉴定该菌系为Sclerotinia sclerotiorum.利用真菌通用引物ITS1和ITS4对所分离的单菌系内转录间隔区(inter transcribed spacer,ITS)进行PCR扩增,得到540bp大小的片段,经过克隆测序和在GenBank中进行BLASTn分析,发现与部分S.sclerotiorum的ITS序列同源性达到100%,进一步鉴定该分离菌株为S.sclerotiorum.进化树分析显示,该菌系与来自意大利、日本及我国武汉地区的菌系聚为一支,说明周口菌系来源广泛.对该菌系侵染油菜叶片的细胞学和组织化学分析表明,该菌系对耐病和感病油菜品种的细胞反应相似,都没有H2O2积累,差别主要表现在耐病油菜上菌丝长度较短.     

决明子提取物对植物病原菌的抑菌活性初探

用中药决明子的乙醇提取物及氯仿提取物对核盘菌(Sclerotinia)、镰刀菌(Fusarium)、柑桔绿霉(Penicillium)、棉花炭疽病菌(ColletotrichumgossypiiSouthw.)等10余种植物病原菌进行抑菌活性筛选研究。结果表明,中药决明子乙醇提取物与氯仿提取物对镰刀菌、弯孢菌、油菜菌核病菌、金黄色葡萄球菌和棉花炭疽病菌都有一定的抑菌作用,其中对油菜菌核病菌和棉花炭疽病菌的抑制效果较好,抑菌率达53%和62%。     

28种植物样品提取物离体抑菌作用测定

在植物干样的质量浓度为0．1g／ml的条件下，用生长速率法测定了28种植物样品丙酮提取物对小麦赤霉病病菌(F．graminerum Schw．)、油菜菌核病病菌(S．sclerotiorum)、水稻纹枯病病菌(R．solani Kohn．)、番茄灰霉病病菌(B．cirerea Pets．)和棉花黄萎病病菌(V．dahliae)离体抑菌活性．结果表明，酸模(Rumex acetosa L．)、冬青(Hex chinensis Sims)、菝葜(Smilax china L．)、鹅掌楸(Liriodendron chinense Sarg．)、银杏(Ginkgo biloba L．)、槐树(Sophora japonica L．)等12种植物样品对至少其中1种供试植物病原菌的抑制率在60％以上，表现出较强的抑菌作用，其中菝葜对4种供试病原菌的抑制率均大于60％，活性更为突出．