不同性别类型黄瓜品种基因组DNA的提取及RAPD标记的初步研究

采用改良的异丙醇沉淀法成功地提取了11个不同性别类型黄瓜品种的基因组DNA.以此作为PCR扩增反应模板进行RAPD分析,结果从22个10bp随机寡核苷酸引物中筛选出2个引物S23和S91在全雌性品种MT700和其他性别类型的品种之间稳定地扩增出多态性.至于该多态性标记是否与黄瓜雌性性别有关,还有待进一步分析.     

随机扩增多态性DNA技术在生命科学炽的应用

DNA分子标记是DNA水平上遗传变异的直接反映,随机扩增多态性DNA（RAPD）技术,是新发展起来的一种DNA分子标记方法。文中详细阐述了RAPD技术的原理,进一步与限制性片段长度多态性（Restriction FragmentLength Polmorphism,RFLP)技术相比,得出它具有快速,简便和对材料要求不高等特点,最后讨论了RAPD技术在生命科学研究中各个方面的广泛应用,包括种基因组的分子谱图建、系统进化发育以及基因定位研究等。     

低能碳离子注入野牛草种子的变异分析

以野牛草(Buchloě dactyloides)为材料,研究了不同注量的C 离子注入种子对种子萌发、幼苗生长和发育,以及随机扩增多态性DNA(RAPD)谱带变化的影响.结果表明:随C 注量Ф增加,种子萌发率降低,实生苗生长减弱;Ф=1×1014 cm-2处理的幼苗生长超过对照,但Ф=1×1015和1×1016 cm-2处理使幼苗生长高度显著降低(P＜0.05);不同Ф处理对幼苗叶片数和分蘖数无显著影响(P＞0.05);引物E1和E12扩增的RAPD谱带中出现DNA条带随C 的Ф增加逐渐消失的现象,首次揭示了RAPD条带变化与Ф的相关性.研究认为,利用Ф=1×1014 cm-2的C 离子注入种子,有利于培育野牛草新种质和选育新品种.     

应用RAPD技术对新疆布顿大麦遗传多样性的研究

利用RAPD分子标记，通过40条10碱基随机引流，对32份新疆布顿大麦进行了遗传多样性评价。在40个10碱基随机引物中，有22个引物（占55％）的扩增产物具有多态性，每条多态性引物能产生1－7条多态性DNA带纹。40个引物共扩增227条带，其中95条（占41．9％）具有多态性，平均每条引物能产生1．7条多态性DNA带纹。基于RAPD技术计算了32份布屯大麦间的遗传相似系数（GS）变化值为0．427－0．848，平均值为0．681，利用不完全加权算术平均数（UPGMA），采用1－GS矩阵对其进行遗传聚类，结果表明，RAPD标记将32份参试材料区分为3类（或亚类），来源于新疆北部的20份材料有17份材料（占85％）聚入Ib亚类，而第Ia亚类则主要来自于新疆中部的一些材料。研究表明，RAPD标记揭示的新疆布顿大麦间的遗传多样性与其地理来源紧密相关。     

新疆野生啤酒花DNA提取及RAPD反应体系的建立

采用2种方法提取啤酒花的基因组DNA，并分析了样品的不同状况和是否纯化对所提DNA质量及其RAPD扩增效果的影响。结果表明：采用改进的高盐低pH法优于CTAB法。以此法所提DNA为模板进行随机扩增多态DNA(RAPD)试验，分别测试了Mg2 ,dNTP、Taq酶、模板DNA浓度和退火温度对反应结果的影响，最终确定了野生啤酒花RAPD反应的最佳体系。     

珙桐休眠期种子高质量基因组DNA的提取及分析

在对传统CTAB法进行改进的基础上,提取了沙藏珙桐休眠期去中果皮种子高质量基因组DNA,琼脂糖电泳及紫外分光光度分析,表明其OD260nm／OD280nm在1．8—2．0之间,用所提取的基因组DNA作为模板,S17为引物,进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱．     

花椰菜自交不亲和性的分子标记研究

运用随机扩增多态性DNA(RAPD)和inter-简单重复序列(ISSR)等分子标记技术。分别对5组花椰菜自交不亲和系和对应的自交亲和系的基因组进行指纹差异分析．采用10个10mer随机引物和5个ISSR引物进行PCR扩增。结果表明．扩增片段分子量在0．3～5kb之间，指纹图谱的稳定性和重复性较好．经过3次以上重复发现，ISSR4引物扩增图谱中。自交亲和系比不亲和系多扩增出3800bp片段；ISSR6引物扩增图谱中。除第3组外，不亲和系比亲和系多扩增出1100bp片段．结果表明．花椰菜自交不亲和系与自交系基因组DNA之间存在差异．扩增出的差异片段与花椰菜自交不亲和性相关。并可作为自交不亲和系和自交亲和系育种筛选的分子标记．初步探讨了花椰菜自交不亲和性的遗传机制及RAPD和ISSR技术在自交不亲和系选育过程中的应用前景．     

草鱼基因组随机扩增多态性引物及多态性位点的筛选

为了建立草鱼基因组DNA多态性分析的指标体系，应用RAPD技术，从180条10碱基随机引物中筛选出了31条能扩增出多态性DNA片段的引物。用这31条多态性引物共扩增出了327条重复性好、带型清晰、分辨率高的谱带。扩增产物的片段大小范围在400—2000bp之间。单一引物扩增条带为5—14条。用这些多态性引物在草鱼基因组DNA中检测到了93个多态性位点，并对这些多态性位点上的等位基因频率进行了统计分析。这31条多态性引物和所检测到的93个多态性位点初步为草鱼基因组的多态性分析提供了可靠的分析指标体系。     

黄瓜全雌性状相关的RAPD分子标记筛选

用CTAB法提取黄瓜总基因组DNA，采用RAPD技术探寻与黄瓜全雌性相关的分子标记.共筛选39条随机引物，其中有12条引物显示多态性.进一步筛选表明：S10引物能在全雌系黄瓜中扩增出一条约2000 bp的稳定、清晰的特异条带，而在雌雄同株的单株中不存在.经回收、克隆并测序，获得全长2003 bp的序列.在NCBI上进行Blast分析，表明为新发现序列，含有编码62个氨基酸的开放阅读框.其编码短肽的功能尚不确定.     

基于RAPD分析用的佛手DNA的提取

对佛手DNA提取过程从不同方面进行了改良、优化，筛选出较理想的佛手DNA提取方法：每eppen—dorf管鲜样品取量为0．1g～0．25g，700μL提取缓冲液，加提取液前用液氮研磨，Vc(抗坏血酸)添加量为ω(Vc／鲜样)=0．1．该方法分离出DNA的A260／A280大于1．9，符合佛手RAPD(随机扩增多态DNA)分析要求，在佛手遗传多态性分析和品种分子鉴定中具有良好的应用前景。     

经大豆DNA溶液处理后选育的变异水稻基因组RAPD分析

利用花粉管通道法和浸种及苗期浇灌法,将供体大豆DNA直接导入受体水稻,获得两种水稻变异株系。采用RAPD技术对供体大豆、受体水稻和两种水稻变异株系的基因组进行了多态性分析。所用31种10碱基随机引物中有24种扩增出清晰的DNA条带。分析比较了4个样品DNA扩增条带的相似率。根据试验结果分析,外源大豆DNA导入受体水稻能引起后代基因DNA序列变化,扩大水稻的遗传组成;作者还分析了由外源大豆DNA导入引起受体水稻产生变异现象的原因。     

高压对大麦种子萌发的影响及诱变的DNA分子指纹分析

利用不同静水压力处理萌动的大麦种子, 保压2 h， 发现高压对大麦种子萌发及幼苗生长均有一定的抑制作用，大麦发芽率和成苗率明显下降，压力达到200 MPa时不再有幼苗成活. 高压处理后 幼苗中出现了表型发生变异的植株，选取不同压力处理中表型变异最明显的3棵单株： P₁,P₂,P₃,， 以ISSR(inter simple sequence repeat) 和RAPD(random amplified polymorphic DNA)手段对其进行DNA指纹图谱分析， 用选取的21个ISSR引物和19个RAPD引物分别扩增出391和229条带，多态性条带比率 (PPB)分别为4993%和5859%，在 P₂和P₃中，两种标记分别扩增出112和113多态条带，ISSR检测中原种与P₂的平均绝对距离系数为0.136　1， 与P₃的平均绝对距离系数为0.116　5. RAPD检测中原种与P₂的平均绝对距离系数为0.151 3，与P₃的平均绝对距离系数 为0.195　9. 结果显示， 原种与P₂,P₃在ISSR和RAPD的检测中DNA的多态性十分明显. 本研究进一步证实， 高压是诱导种子植物变异的一种行之有效的新方法.     

富钾植物DNA导入早稻变异后代的RAPD分析

应用花粉管通道法和浸种法将两种富钾植物空心莲子草和商陆DNA导入到不同的水稻品种中,结果在其后代产生了广泛的变异,并从中筛选出耐低钾的变异材料。应用PCR技术对其中耐低钾的4个变异材料进行了RAPD分析。结果表明,所用100个随机引物中有7个引物在受体和变异后代间扩增出了多态性产物。后代和受体的相似系数均在90%以上,而与供体的相似系数只有6%以下,其中有三个引物的扩增产物中出现了供体的特异性带。这说明空心莲子草和商陆DNA导入水稻后确实引起了水稻基因组结构的变化,同时也为变异后代所发生的生物学性状的改变提供了直接的分子证据。     

利用RAPD标记鉴定芥菜(Brasica juncea Cos.)品种(英文)

从６０种１０ｂｐ随机引物中筛选出７种引物,对８个芥菜变种的１６个品种（每个变种有２个品种）进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）鉴定,能快速、灵敏、较为简便获得了１６个芥菜品种的基因组ＤＮＡ指纹图谱．结果表明,不同引物在１６个品种上都有其特征ＤＮＡ带,一般只有１条,少数有２条．在同１个变种的２个品种之间存在着丰富的ＲＡＰＤ标记,通过比较２个品种各自独具的ＲＡＰＤ标记,就可明确地将２个品种区分．在所用的７种引物中,没有１种能同时将８对芥菜品种全部区分开,但用２种或２种以上的引物就完全可以将８对芥菜品种全部区分开．     

中药溪黄草及其药用近缘种的RAPD分析

运用１４个有效的１０ｍｅｒ寡核苷酸引物对中药溪黄草原植物线纹香茶菜Ｉｓｏｄｏｎｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓ及其药作近缘种基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,共检出１９４个位点．其中单态位点１４个,占７２％;多态位点１８０个,占９２８％;分类群特有位点１０８个,占５５７％．用ＵＰＧＭＡ法对分类群间的Ｊａｃａｒｄ相似性系数和遗传距离进行聚类分析．结果表明,狭基线纹香茶菜和细花线纹香茶菜与溪黄草的亲缘关系较近,而溪黄草与线纹香茶菜、狭基线纹香茶菜、细花线纹香茶菜之间的亲缘关系远．可用ＲＡＰＤ技术对中药的正本清源、真伪品及质量进行研究．     

剑叶龙血树叶DNA三种不同提取方法的比较分析

采用CTAB法、改良SDS法、高盐低pH法提取了剑叶龙血树叶DNA,并通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测了不同方法的提取效果.结果表明：CTAB法所提取的DNA浓度与纯度均高于其它2种方法,泳带分布集中,无拖尾现象,A260/A280=1.81,DNA浓度为735 ng/μL,能满足RAPD、SSR/ISSR扩增的要求,是提取龙血树叶片DNA的最佳方法.     

马氏珠母贝与解氏珠母贝的随机扩增多态DNA分析

用OPM组20种碱基随机引物对采自海南洋浦的马氏珠母贝（Pincada martensii）和解氏珠母贝（P.chemmitri）天然群体进行RAPD分析,其中6种引物扩增有效,这6种引物对马氏珠母贝和解氏珠母贝的总扩增带数分别为52条和58条。每一引物的扩增带数为3～16条,同一引物对两种贝类的扩增带数不同（OPM19B除外）,对两贝类的扩增带型也有较大差异。群体内的各个个体（实验个体为10个）RAPD扩增带谱全部呈多态,表明在同一群体中,各个体存在着明显的个体特征带,由于样品数量及引物数均少,2种贝类各自种群的共同特征尚未能确定。     

柳树RAPD反应体系均匀设计试验研究

从柳树幼苗的嫩叶中提取基因组DNA作为模板,运用均匀设计方法,获得;柳树RAPD扩增反应的优化体系：25μL反应体系中,DNA模板用量70 ng,引物浓度0.5mmol.L-1,Mg2＋浓度3mmol.L-1,TaqDNA聚合酶用量1.0 U,dNTP浓度0.3mmol.L-1.用16条引物进行验证,证实该体系重复性好、结果稳定.     

山羊与岩羊间特异RAPD片段分析

在两组40个随机引物中，筛选出16个重复性好的多态引物，对山羊与岩羊闻RAPD片段分析表明，16个引物扩增出67条带，其中54条带表现多态，多态率80．60％，山羊各群体共有条带为23条，山羊和岩羊共有条带为13条，岩羊有4条特异带，不同引物所扩增出的片段在各群体中分布频率不同．岩羊特异RAPD片段，OPA-10724的序列与人类全基因组比较，同源的短序列较多，最太长度为86bp，唯有30bp的长度与绵羊ZFZ基因和牛ZFY基因内含子同源。     

笼养蓝孔雀两个种群的随机扩增多态DNA分析

利用随机扩增多态DNA技术对英吉利孔雀场和广州动物园两个蓝孔雀Pavocristatus种群进行了分析。用 2 3个随机引物 ,共获得 173和 15 7个扩增片段 ,多态率分别为 47 40 %和 9 5 5 %