肝细胞癌特异抗原的筛选

应用重组克隆表达抗原的血清学鉴定技术,从广西肝细胞癌中初步筛选出９个基因克隆,与肝癌患者及其他人血清的反应证明对肝癌有特异性。ＤＮＡ测序结果与基因库核对,发现其中７个有同源结构;２个为无同源结构的新分子。     

血清灭活法对消除ELISA假阳性结果的比较研究

目的建立一种简便、易行的方法,对酶联免疫吸附试验的结果进行质量控制。方法依据国标ELISA方法对578份小鼠血清进行11种病毒抗体检测,共检测抗体3677份。对初步检测出的242份抗体阳性血清,经56℃30min水浴灭活处理后进行复检。结果可疑阳性血清经灭活处理后复检,正常抗原孔A值和特异抗原孔A值明显低于初检的正常、特异抗原孔A值,差异显著(P<0.05);初检和复检的特异抗原孔A值与正常抗原孔A值的比值有显著性差异(P<0.05);血清灭活前后阳性率有显著性差异(P<0.01),分别为6.58%和2.86%。阳性对照灭活前后A值无显著差异(P>0.05)。结论血清经灭活处理后,使检测结果的假阳性率显著降低。     

传统抗原、重组抗原检测啮齿类动物病毒的ELISA法敏感性和特异性

酶联免疫吸附试验 (ELISA)是一种常用的检测啮齿动物血清病毒抗体的方法。用于检测血清抗体的抗原可是用常规方法制备的全病毒或是在原核或真核系统中表达的重组抗原蛋白。利用杆状病毒表达系统已获得细小病毒、沙粒样病毒和冠状病毒的带有His标记的重组病毒抗原。重组抗原在昆虫细胞中表达裂解后 ,可用色谱法提纯。提纯的抗原用来包被 96孔ELISA板。用细小病毒非结构蛋白 (NS 1) ELISA法检测啮齿动物血清 ,在检测的 345 7份样本中有 88份 (2 5 % )NS 1抗体阳性 ,9份 (0 3% )为非特异性反应。虽然NS 1ELISA检测NS 1抗体具有…     

TRUST诊断试剂的配制与初步检定

人体感染梅毒螺旋体后，患者体内产生一种抗心磷脂的抗体，即反应素。根据这一原理可以在体外用心磷脂（cardiolipin）作为抗原检测梅毒患者血清中的抗心磷脂的抗体。本品系采用VDRL抗原重悬于特制的甲苯胺红溶液中制成的TRUST试剂。能与血清或血浆中反应素发生红色的絮状凝集反应。本品以科学的配方，熟练的技术，高纯度的原材料，成熟的工艺制得的TRUST试剂，经初步检定已达到有关标准。是临床实验室梅毒初筛和疗效观察的必备试剂之一。     

建立Raji细胞免疫酶抑制法对血清抗HLA—DR抗体的检测

由于Raji细胞表面具有表达HLA-DR抗原特点,利用被测血清中抗HLA-DR抗体与抗人HLA-DR单克隆抗体竞争和Raji细胞表面HLA-DR抗原结合的特征,建立了Raji细胞免疫酶抑制法检测血清中抗HLA-DR抗体的方法。进行了方法学特异性,重复性和实验条件确定研究,并用此方法检测了72例系统性红斑狼疮患者和113例健康者血清。结果显示:该方法特异性强(中性粒细胞无显色反应);重复性好(抗体阳性血清变异率C.V为4.66％,抗体阴性血清C.V为0％);抗体滴度范围1∶5-1∶40。系统性红斑狼疮患者中抗HLA-DR抗体阳性率为30％;而健康阳性率为1.8％。作者认为:用Raji细胞免疫酶抑制法检测血清中抗HLA-DR抗体是一种特异性强,重复性好,操作简便和假阳性率低的方法,这种方法值得推广应用。     

SARS冠状病毒核衣壳蛋白基因的表达及其在SARS诊断中的应用

目的为SARS感染后建立一种特异性免疫学诊断方法,为基因疫苗的研制提供备选实验材料.方法利用基因重组的方法,在大肠杆菌中表达了SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白全长基因,经包涵体的初步纯化,金属螯合层析进一步纯化N蛋白,SDS-PAGE电泳和ELISA方法进行结果检测.结果N蛋白抗原与30名SARS感染患者血清结合全部为阳性,对照组30名正常人血清为阴性,30名发热但非SARS患者血清为阴性.结论利用基因重组的方法对SARS-CoV N蛋白进行了表达和纯化,证明该重组N蛋白抗原具有良好的反应特异性,是良好的应用于病毒感染早期诊断的抗原.完全可用于组构检测核心抗体的诊断试剂.并建立了免疫学的检测方法,为抗体检测提供了安全、方便的手段,并为基因工程疫苗研究奠定了基础.     

HCV多表位抗原基因pcxz的三串联表达及其在小鼠体内免疫原性的研究

在本实验室之前合成的多表位抗原基因pcxz的基础上,将之3次串联重复构建了3pcxz,以重组表达的3PCXZ作为抗原,HCV病人血清为检测抗体,作Western blot杂交,结果表明3PCXZ抗原能被HCV阳性血清特异识别,而同正常人的血清无反应.通过对BALB/c小鼠的免疫应答进行检测,发现合成的多表位抗原3PCXZ诱导BALB/c小鼠产生的IgG抗体滴度为5.8×105;IgG亚型分析发现,这一免疫反应主要是基于TH2方式,在细胞免疫应答方面亦能激活特异的CD4+T辅助细胞CTL效应,最高溶解率达到40.54%,在1×106脾淋巴细胞中最多可以产生(698±229)个分泌INF-γ的CD4+T细胞.     

黑胸大蠊免疫兔血清的制备与应用

按常规动物免疫方法用黑胸大蠊不同发育阶段可溶性抗原对新西兰兔进行免疫,并通过SDS-PAGE和酶联免疫印迹(EL IB) 技术分析黑胸大蠊不同发育阶段抗原的免疫学特性,同时用黑胸大蠊若虫和雄虫免疫兔血清筛选美洲大蠊若虫cDNA 文库,对阳性克隆进行PCR 鉴定和序列测定,结果显示：卵抗原、若虫抗原、雄成虫抗原、雌成虫抗原分别可见13,28,26 和41 条蛋白区带,4种抗原组分相互之间有交叉抗原存在,用黑胸大蠊若虫免疫兔血清筛选出1个新基因,用黑胸大蠊雄虫免疫兔血清筛选出6个新基因.     

人工神经网络技术在胰腺癌诊断中的应用

建立6种血清肿瘤标志物人工神经网络(ANN)诊断模型,以验证其在鉴别胰腺疾病的应用价值.采用病例对照研究,用酶联免疫吸附法分别测定42例胰腺癌患者、50例胰腺炎患者及50例消化道良性疾病对照组血清的癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、癌抗原199(CA199)、癌抗原50(CA50)、癌抗原125(CA125)、癌抗原242(CA242)共6种肿瘤相关标志物指标.利用人工神经网络技术结合6种肿瘤标志物构建胰腺癌诊断模型。并将此模型应用于胰腺癌的诊断.该模型可以同时判别消化道良性疾病、胰腺炎与胰腺癌.建立基于人工神经网络的胰腺癌诊断模型,可为临床胰腺癌诊断提供有价值的参考资料,有助于提高胰腺癌的早期诊治水平.     

印迹膜测序法分析结核分枝杆菌抗原蛋白

把WesternBlot技术分析抗原抗体反应的高度特异性与用PVDF膜作载体进行蛋白质氨基酸序列分析的高度敏感性相结合对结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,TB)的特异性、保护性抗原进行筛选和分析鉴定 ,获得了分子量为 31KDa、30KDa的抗原 这两种抗原与抗结核分枝杆菌的单克隆抗体和结核病人血清均发生阳性反应 ,而与正常小鼠血清和健康人血清呈阴性反应 用印迹膜测序法测出 31KDa抗原蛋白的N 末端序列为AlaGluValAspTrpLeuValPheAlaValSerTrpProValGly ,30KDa蛋白序列为PheSerArgProGlyLeuProValGluTry 印迹膜测序为分子生物学研究提供了一种有效的新途径     

5例布病现患的检出

1998年3月在吉林市丰满区旺起镇大石村检出5例布病患者，现报告如下。1临床资料1998年3月我们对大石村411户养牛户随机抽样57人进行布病监测，结果发现丰满区10年来（1988~1998年）市病患者5例。病患均有长期与有接触史，长期不规则发热、多汗、乏力、睾丸肿大，关节疼痛、肌肉酸痛。采用平板凝集反应和试管凝集反应检测血清中抗体。抗原由吉林省地方病第二研究所提供。有4份血清在平板凝集反应中20μl小格内是“”，1份血清在10μl小格内呈“”；有4份血清在试管弟集反应1：100血清稀释度处呈现“”。2讨论2．l旺起镇大石村民未接种过布病…     

袋貘体重可能超1吨

正一项新研究发现,澳大利亚一种已灭绝的有袋类动物——袋貘,其体重可能超过1吨(1000公斤),而且前肢肘关节固定维持在100度左右的夹角,这种前肢形态在已知的哺乳动物中显得与众不同。袋貘出现在大约2500万年前的澳大利亚东部,大约1万年前灭绝。此前考古研究已知,这种有袋类动物体型庞大、     

血清滤纸斑点免疫结合试验诊断棘球蚴病

以定性滤纸吸附血清样品,保存于室温和4℃冰箱内,3和6个月后对所保存的血清滤纸进行生物素-抗生物素系统斑点免疫结合试验,以检测血清样品中抗棘球蚴抗原的抗体.结果表明2种条件下保存的干血清滤纸的检测结果与新鲜血清样品检测结果基本一致(P＞0.05).证明在生物素-抗生物素系统斑点免疫结合试验检测棘球蚴病患者免疫应答时,干血清滤纸法可作为患者血清样品的保存方法.     

乳腺肿瘤患者血清中微量元素的测定及相关因素分析

用石墨炉原子吸收光谱法测定了２１３名健康妇女，３６例乳腺良性瘤和３８例乳腺恶性瘤手术前后血清中Ｚｎ，Ｆｅ，Ｃｕ，Ｍｎ，Ｐｈ，Ｃｄ，Ｃｒ，Ｎｉ和Ｍｏ九种微量元素的含量．结果发现三组血清中有五种元素有显著性差异，其中血清Ｚｎ，Ｃｕ，Ｎｉ和Ｆｅ的含量乳癌患者明显高于对照组，血清Ｍｏ则乳癌患者低于对照组，而且血清Ｚｎ，Ｃｕ，Ｎｉ随病情发展而升高，血清Ｍｏ则相反；乳癌患者血清Ｃｕ／Ｚｎ值（１．４８）高于健康组（１．３０）．     

展示p53蛋白表位噬菌体phage-SD的制备及应用

[目的]利用噬菌体展示技术制备一种可用于检测血清p53抗体的噬菌体.[方法]利用基因工程手段将编码p53蛋白N端20～31位的多肽SD的基因克隆到丝状噬菌体载体fADL-le的pIII蛋白基因中，制备展示该外源肽的噬菌体phage-SD并进行了Western blot鉴定.在此基础上，分别以phage-SD和重组p53蛋白为检测抗原，利用ELISA方法对乳腺癌患者血清p53抗体进行检测.[结果]成功制备出能特异性识别血清p53抗体的噬菌体phage-SD.ELISA检测结果表明，60例乳腺癌患者中phage-SD检测到13例p53抗体阳性患者，检出率为21.67%,与重组p53蛋白检测效率(21.67%)一致.[结论]成功制备一种灵敏度高、特异性强的可用于血清p53抗体检测的噬菌体phage-SD,为新型血清p53抗体检测试剂的开发及临床应用奠定基础.     

利用蛋白质微阵列筛选抗胸腺瘤优势抗原表位

通过设计多个针对Titin蛋白胞外区多肽序列,用蛋白质微阵列方法筛选抗Titin抗体识别的优势抗原表位,并用ELISA法进行验证.结果显示,在84例MG血清中,51例抗多肽自身抗体阳性,阳性率60.71%.经蛋白质微阵列筛选和ELISA法验证,发现在设计的9条多肽抗原中,P5、P6和P9是优势识别抗原线性表位;进一步发现自身抗体识别的P5与P9多肽表位存在交叉性,并且均能被多肽抗原阻断.结果表明,用蛋白质微阵列方法可有效筛选针对Titin自身抗体识别的优势抗原线性表位.     

棘球蚴抗原纯化对免疫球蛋白IgG免疫应答的影响

以纯化的棘球蚴抗原和未经纯化的粗抗原用于棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原的特异性免疫球蛋白IgG水平的检测试验,结果表明,当血清稀释度为1∶200时,使用纯化抗原可以获得较高的特异性 (98.9%),并可保持在使用粗抗原及血清稀释度为1∶400时获得的较高的敏感性（93.7%）,提示在棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原特异性免疫球蛋白IgG水平的检测中,使用纯化棘球蚴抗原和粗抗原均可获得较高的敏感性(93.7%)和较高的特异性 (98.4%,98.9%),使用纯化抗原时的特异性略高,但在统计学上并无显著差异.     

血清单糖指标作为胃癌早期诊断的潜在生物标志物

提高胃癌的早期诊断有助于降低胃癌的死亡率.胃癌的发病与遗传、生活方式以及环境影响有关.由于血清中生物糖蕴含与机体状态有关的丰富信息,本研究分析了胃癌患者与健康对照组血清单糖组成差异,发现胃癌患者血清中游离与水解甘露糖浓度显著高于健康个体.与现有消化道肿瘤标志物相结合,构建了适用于胃癌筛查的联合诊断模型.诊断模型的受试者工作特征曲线下面积(AUC=0.900 8)高于糖类抗原199(CA199)和癌胚抗原(CEA),并适用于早期胃癌的诊断.使用TCGA数据库中的胃癌RNA测序数据对甘露糖代谢相关基因进行分析,发现甘露糖焦磷酸化酶A(GMPPA)在不同恶性程度的胃癌组织中表达差异显著,GMPPA低表达的患者预后较差.本研究为胃癌的早期筛查与预后判断提供了新方法和新思路.     

用合成多肽免疫制备抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的研究

介绍一种用合成的多抗原肽免疫动物来制备与天然人心肌肌钙蛋白Ⅰ特异反应的单克隆抗体新方法。从人心肌肌钙蛋白ⅠＮ端，根据多肽分子氨基酸的亲水性值选出了ＰＡＰＡＰＩＡＡＡＳＳ１１个氨基酸片段。将它用有八位点的赖氨酸核连接成多抗原肽后，以它为抗原用Ｒｉｂｉ佐剂进行免疫。将小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，获１１株抗此多肽的杂交瘤细胞株。对其中７株属于ＩｇＧ亚类的细胞进行了ＥＬＩＳＡ分析，发现这７株细胞均与天然的人心肌肌钙蛋白Ⅰ呈特异性反应，而不与人骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ发生交叉反应。利用３Ａ２细胞株所分泌的单克隆抗体对急性心肌梗塞患者、手术患者和正常人的血样进行了ＥＬＩＳＡ检测，证明它只对心肌梗塞患者血清发生阳性反应。获得了较为满意的结果。此细胞株所分泌的抗体有望用于心肌梗塞临床检测。