小麦与高冰草原生质体融合及再生能力的恢复

以普通小麦济南１７７悬浮细胞来源的原生质体与高冰草愈伤组织来源的原生质体用ＰＥＧ诱导融合，由于来源材料的长期继代，小麦原生质体的再生能力已很低；高冰草原生质体不能分裂；而融俣产物却能高频率的分化出完整植株。     

普通小麦与高冰草不对称体细胞杂种F_2代 Ⅰ表型与性状分析

普通小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）济南１７７原生质体和经紫外线照射的高冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｅｌｏｎｇａｔｕｍ）原生质体用ＰＥＧ法诱导融合，形成杂种植株，但未能正常结实．杂种植株经子房诱导产生可育Ｆ０代；将Ｆ０代产生的４粒种子播种后产生Ｆ１代植株，对由其产生的Ｆ２代４个株系进行田间观察和室内考种．分析表明，Ｆ２代植株的表现型及产量性状均明显优于亲本小麦．田间穗行、株系表型稳定，具有抗寒、茎杆硬、抗倒伏等优良性状．在分蘖数、单株粒重及千粒重等产量性状上亦有明显优势，此研究为培育体细胞杂种优良小麦品系奠定了基础．     

BYDV CP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性意伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病毒基因（ＢＹＤＶＣＹｇｅｎｅ）的质粒Ｐｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒严ＰＢｌＡｃｔＳＮ导入融合细胞中．经抗性筛选获得抗潮霉素（Ｈｍ）的阳性克隆并再生植株．对再生植株作ＰＣＲ检测表明，ＣＰ基因已整合到转化植株的基因组中并稳定表达．     

普通小麦与玉米的体细胞杂交再生完整植株

从小麦济南177制备得到两种原生质体，一种来源于具有一定分化能力的愈伤组织但其分裂能力较低；一种来源于生长迅速的悬浮细胞但不能分化，将二种原生质体混合，共同作为受体与经过紫外线（UV）照射的玉米（Zea mays L)原生质体在PEG诱导下融合，培养后获得再生克隆并进一步分化为植株，而它们单独与玉米原生质体融合均不能再生植株，通过染色体、同工酶及5SrDNA分析及生长习性分析证明再生植株均为体细胞杂种。     

小麦与高冰草体细胞杂种F_2代Ⅱ.同工酶和蛋白质分析

比较了小麦与高冰草杂种Ｆ２代不同穗行和株系的部分植株与亲本进行酯酶同工酶及可溶性蛋白质,分析高冰草遗传物质在杂种后代的遗传和表达,结果证明高冰草遗传物质在杂种中稳定存在并正常表达．粗蛋白含量的测定表明,杂种Ｆ１及Ｆ２代蛋白质含量为１７．４９％～２０．１８％,介于亲本小麦（１５．１４％）与高冰草（２５．５８％）之间．氨基酸分析发现,杂种Ｆ２代种子的几种必需氨基酸,包括缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸,显著高于普通小麦．     

青苗碱谷与高冰草的体细胞杂交及杂种性质鉴定

将高冰草（Agropyrom elongahan Host Nevski）原生质体用强度为380μW／cm^2的紫外线分别照射0s、30s、1min、2min后作为融合供体;而未经射线处理的青苗碱谷（Setaria italica Beaur）原生质体作为融合受体,利用PEG方法诱导融合．对再生克隆进行形态学和染色体观察,并用同工酶、RAPD、5SrDNA间隔序列和叶绿体微卫星DNA（SSR）进行杂种性质鉴定．结果证明融合产物具有双亲基因组,高频率地形成了体细胞杂种。     

小麦与高冰草体细胞杂种F2代：Ⅱ.同工酶和蛋白质分析

比较了小麦与高冰草杂种Ｆ２代不同穗行和株系的部分植株与亲本进行酯酶同工酶及可溶性蛋白质,分析高冰草遗传物质在杂种后代的遗传和表达,结果证明高冰草遗传物质在杂种中稳定存在并正常表达。粘粘白含量的测定表明,杂种Ｈ１及Ｆ２代蛋白质含量为１７．４９％～２０．１８％,介于亲本小麦（１５．１４％）与高冰草（２５．５８％）之间。氨基酸分析发现,杂种Ｆ２代种子的几种必需基酸,包括缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、     

BYDVCP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性愈伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病基因的质粒Ｐ＾ｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒Ｐ＾ＢｌＡｅｔＳＮ导入融合细胞中。经抗性筛选获得抗潮霉素的阳性克隆并再生植株。对再生植株作ＰＣＲ检测表明，     

单倍体小麦与簇毛麦的不对称体细胞杂交

以小麦杂２４２（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ,ｃｖ．２４２）花药来源的愈伤组织分离原生质体作受体;簇毛麦（Ｈａｙｎａｌｄｉａｖｉｌｏｓａ）幼胚来源的愈伤组织原生质体经２２０μＷ／ｃｍ２紫外线照射３０ｓ作供体,用ＰＥＧ法诱导融合,最后获得再生愈伤组织．对融合再生的４个最先长大的细胞系进行染色体,同工酶和ＲＡＰＤ分析．结果表明,这些细胞系均为体细胞杂种,ＲＡＰＤ技术可作为小麦体细胞杂种早期鉴定的有效方法     

普通小麦与高冰草不对称体细胞杂种F2代：Ⅰ表型与性状 …

普通小麦济南１７７原生质体和经紫外线照射的高冰草原生质体用ＰＥＧ法诱导融合,形成杂种植株,但未能正常结实。杂种植株经子房诱导产生可育Ｆ０代;将Ｆ０代产生的４粒种子播种后产生Ｆ１代植株,对由其产生的Ｆ２代４个株系进行田间观察和室内考种。分析表明,Ｆ２代植株的表现型及产量性状均明显优于亲本小麦。田间穗行,株系表型稳定,具有抗寒、茎杆硬、抗倒伏等优良性状。在分蘖数、单株粒重衣千粒重等产量性状上亦有明显优     

两种小麦的原生质体培养再生植株

报道两种基因型小麦昌乐5号和山农587胚性悬浮细胞系的建立和原生质体再生植株。小麦昌乐5号和山农587的胚性愈伤组织继代一年以后形成部分颗粒状和粉粒状结构,可用于悬浮培养。当分散好、生长快的胚性悬浮细胞系形成后,即可作为原生质体培养的材料。较长时间的悬浮培养容易使材料的胚性丧失,昌乐5号的胚性悬浮细胞系20天左右建成,其原生质体再生植株的频率为14/10~5(再生植株数/植板的原生质体数);而山农587的悬浮培养物需5个月以后才能用于原生质体培养,其原生质体再生植株的频率仅为4/10~6。     

黄瓜子叶原生质体的培养与分化

从黄瓜无菌苗子叶游离原生质体,培养在含NAA1mgL~(-1)+2,4-D0.5mgL~(-1)+6-BA0.5mgL~(-1)的MS(大量元素减半)和DPD液体培养基中,3d后开始第1次分裂。10d后形成细胞团,在2种培养基中均形成愈伤组织,转入含IAA3mgL~(-1)+6-AB1mgL~(-1)的MS固体培养基后分化出苗。实验对黄瓜无菌苗子叶游离原生质体的光照和温度条件进行了研究,从1500Lux至25000Lux的光照强度对原生质体的游离没有明显的影响昼夜温差是一个重要的影响因子,恒温下生长的无菌苗,原生质体游离较困难同时讨论了子叶及叶片的细胞形态与原生质体游离的关系。     

大麦黄矮病毒（BYDV）外壳蛋白基因在小麦原生质体中的稳定转化

实验采用ＰＥＧ介导法转化小麦，用ＧＵＳ基因作为标志，用荧光法测定Ａｃｔｌ－ＧＵＳ、Ｅｍｕ－ＧＵＳ、３５Ｓ－ＧＵＳ三种质粒转化小麦细胞后的瞬间表达强度，以比较Ａｃｔｌ、Ｅｍｕ、３５Ｓ三种启动子在小表中的表达强度．结果表明，Ａｃｔｌ和Ｅｍｕ的强度大致相等，均比３５Ｓ强．采用Ｅｍｕ为启动子带ＢＹＤＶＣＰ基因的质粒和经改造过的Ａｃｔ１为启动子带有抗潮霉素选择标记基因的质粒共转化小麦“济南１７７”的原生质体．转化６ｄ后，用潮霉素进行筛选，最后得到两块抗潮霉素的愈伤组织，转化后４个月，经ＰＣＲ检测，证明ＣＰ基因已整合进一块愈伤组织的细胞基因组中．     

小麦与高冰草体细胞杂种F5代麦谷蛋白及SDS沉降值分析

通过对普通小麦与高冰草体细胞杂种F5代 175个株系的麦谷蛋白及SDS沉降值分析 ,发现杂种F5代有 10种不同的麦谷蛋白组成 ,并出现了 1Ax1,1Ax2 ,1Bx13,1By16 ,1By8,1Dx5等 6种不存在于亲本小麦中的高分子量麦谷蛋白亚基及 1Bx13 1By16 ,1Bx7 1By8,1Dx5 1Dy12等 3种新亚基组合 ,部分杂种中出现了高冰草的麦谷蛋白特征谱带 ;杂种株系的SDS沉降值表现出较大的差异 ,其中一些杂种的SDS沉降值明显高于亲本普通小麦 .结果表明 ,通过体细胞杂交有可能将野生禾草的优良性状引入普通小麦 ,创造出多种不同组成及组合的新种质 ,为小麦品质育种开辟新途径     

Rice protoplasts isolated directly from mature-embryo-derived calli

Mature-embryo-derived calli of japonica rice (Oryza sativa L) Taipei 309 were used for replicated protoplast isolation experiments. Six out of nine callus lines produced protoplasts with satisfactory yield of 5.20×10⁶–8.96×10⁶ protoplasts/g FW (fresh weight). The remaining three callus lines initiated from seeds of cryopreserved-callus-derived plants had rooty calli, resulting in low yield of protoplasts and a large number of isolated banana-shape intact cells. Viability of protoplasts ranged 87.46%–94.15%. The average size of protoplasts was 207.49–379.04 μm² in different callus lines. Comparitive experiments were also carried out using both calli and suspension culture cells for protoplast isolation. The results demonstrated that protoplast isolation of calli was a substantially simplified and reliable method for preparing rice protoplasts. Jin Deming: born in Jan. 1959, Associated Professor     

芥菜原生质体培养和胚性愈伤组织的产生

以芥莱无菌苗下胚轴为材料游离获得原生质体,原生质体培养于含NAA1.5mg/l,6-BA0.6mg/l、和2.4-D0.5mg/l的DPD液体培养基中,约4—5周形成肉眼可见的小愈伤组织。转入MS固体培养基后,即可产生大量的愈伤组织,其中胚性愈伤组织约占50%以上。     

Transfer of bacterial blight resistance from <Emphasis Type="Italic">Oryza meyeriana</Emphasis> to <Emphasis Type="Italic">O. sativa</Emphasis> L. by asymmetric somatic hybridization

Asymmetric somatic hybrid plants were produced between cultivated rice (Oryza sativa L.) and wild species [O. meyeriana (Zoll. etMor, exSteud.)] with high resistance to rice bacterial blight. X-ray-irradiated protoplasts of the wild species were used as donor and chemically fused with iodoacetamide-inactivated protoplasts of rice cv. 02428 to produce hybrids. Seventy-two plants were regenerated from 623 calli based on metabolic complementation. The morphological characters of the plants closely resembled that of the rice. Simple sequence repeats were employed to identify their hybridity. Cytological analysis of root-tips revealed that their chromosome number varied in the range of 27--38. The somatic hybrids were inoculated with strains of Xanthamonas oryzae pv. oryzae at adult growth stage and demonstrated the resistance to bacterial blight introgression from the O. meyeriana.     

Hybrid plant regeneration from interfamilial somatic hybridization between grapevine (vitia vinifera L.) and Red Thorowax (Bupleurum scorzonerifolium willd)

The protoplasts of Red Thorowax ( Bupleurum scorzonerifolium) irradiated by ultraviolet light (UV) at an intensity of 260μW/cm2 for 0, 1,2 and 3 min respectively were fused with that of grapevine ( Vitia vinifera). The regenerated 19 clones, every one derived from a single fused cell, were identified as hybrids by phenotype, isozyme, chromosome and 5S rDNA spacer region analysis. The results reveal that all of them are somatic hybrids. 11 hybrid calli including asymmetric and symmetric products regenerated somatic embryos and young leaves after 5 months of culture, of which 4 hybrid cell lines derived from asymmetric fusion regenerated plants with roots after 8-10 months of culture. Inspection of chromosome showed that regeneration of whole plant was related to the decrease of chromosome number. Identification of 5S rDNA spacer region of the plants confirmed that they were interfamilial hybrid plants.