BYDVCP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性愈伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病基因的质粒Ｐ＾ｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒Ｐ＾ＢｌＡｅｔＳＮ导入融合细胞中。经抗性筛选获得抗潮霉素的阳性克隆并再生植株。对再生植株作ＰＣＲ检测表明，     

BYDV CP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性意伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病毒基因（ＢＹＤＶＣＹｇｅｎｅ）的质粒Ｐｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒严ＰＢｌＡｃｔＳＮ导入融合细胞中．经抗性筛选获得抗潮霉素（Ｈｍ）的阳性克隆并再生植株．对再生植株作ＰＣＲ检测表明，ＣＰ基因已整合到转化植株的基因组中并稳定表达．     

激素对小麦愈伤组织诱导和植株再生的影响

比较了2，4-D和Picloram对小麦愈伤组织诱导和植株再生的影响．实验结果表明，培养基中加入2，4-D的诱导效果优于Picloram，2，4-D加入量为6mg／L时，诱导的愈伤组织的分化效果最好．对不同小麦品种幼穗愈伤组织诱导和植株再生的比较结果表明，鄂恩1号、鄂麦11、鄂麦12和山农1355等有较高的植株再生率。其中前3个材料植株再生率达90％以上；从幼穗、幼胚和成熟胚的比较结果来看，幼穗的愈伤组织诱导率和植株再生频率高于幼胚的和成熟胚．     

小麦耐甘露醇变异细胞系的离体筛选及植株再生Ⅰ

目的 离体筛选小麦耐甘露醇变异细胞系并再生植株。方法 以耐盐系小麦850512r的幼穗和幼胚为外植体诱导胚性愈伤组织。以所得到的胚性愈伤组织为起始材料，采用一步和多步正筛选法离体筛选耐甘露醇变异细胞系。结果 成功获得小麦耐甘露醇变异细胞系，并再生植株。结论 小麦耐甘露醇变异细胞系的离体筛选并再生植株成功，证明在细胞水平上筛选并获得具有潜在耐水分胁迫特性的小麦新品系是完全可能的。     

丰抗8号小麦悬浮细胞系的建立及遗传转化的初步研究

以丰抗８号小麦的幼胚为起始材料,建立了胚性悬浮细胞系．幼胚的取材时期、培养基的成份和选择继代的方法有明显的影响．取开花后１２～１４ｄ的幼胚、增加无机盐离子和还原态氮的用量、挑选鲜黄致密及松脆类型的愈伤组织能显著地抑制空瘪型、长条型、弯弓形等不良细胞类型出现的频率,促进细胞向圆球型方向分裂生长．通过３个月的选择继代培养,获得了理想的松散状胚性愈伤组织;再经过ＭＳ２Ｌ和ＡＡ液体培养,约２个月后,建立起分散性好、颗粒小、增殖快的小麦悬浮细胞系．以新建立的胚性悬浮系为材料,进行基因枪转化,获得了ＧＵＳ报告基因的短暂表达,平均短暂表达频率为１７．１％．就如何筛选转基因小麦进行了讨论．     

抗松材线虫病马尾松体胚发生与植株再生条件的优化

【目的】为使抗松材线虫病马尾松(Pinus massoniana Lamb.)快速大规模繁殖,对抗性马尾松体细胞胚胎发生和植株再生条件进行优化。【方法】以抗病马尾松未成熟合子胚为材料,探讨胚性愈伤组织的诱导、增殖与维持、分化成熟以及萌发的合适培养条件,并对体细胞胚进行生根诱导,对再生植株进行壮苗培养以及驯化移栽。【结果】以LP为基本培养基,添加2.0 mg/L 2,4-D(二氯苯氧乙酸)和1.0 mg/L 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤),抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率最高达27.8%。在胚性愈伤组织增殖维持过程中,悬浮培养中的增殖系数和同步化程度都显著高于固体培养,且经过悬浮培养的细胞系分化能力更强。萌发过程中只有少量能顺利分化出根系,未能顺利分化出根的体胚于添加适量 IBA和 NAA的生根培养基中能够更好地生根。壮苗培养过程中,添加0.01 mg/L油菜素内酯有助于体胚苗的生长。体胚苗在驯化移栽时不同大小的苗移栽成活率相差较大,5 cm左右的体胚苗成活率最高达90.3%。【结论】生长素2,4-D和6-BA组合(2.0 mg/L和1.0 mg/L)对抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率较好; 悬浮培养后的细胞系更利于诱导体胚,适宜浓度的IBA和NAA(1.0 mg/L和0.2 mg/L)能够促进体胚苗根系生长。在壮苗培养基中添加适量油菜素内酯能够促进抗性马尾松再生植株的生长,待苗长至5 cm左右移栽较好。     

笋玉米原生质体培养及遗传转化的研究

以自花受粉的笋玉米幼胚为外植体建立了胚性细胞悬浮系,酶解游离原生质体通过液体浅层培养得到了再生植株;通过PEG法和电激法对原生质体进行了遗传转化,转化用外源基因是潮霉素抗性基因和BT基因,原生质体再生愈伤组织经潮霉素筛选后,PEG法和电激法获得抗性愈伤组织的频率分别为9 3%和8.9%,Southem-blotting证明外源基因已整合到玉米抗性愈伤组织细胞基因组中,转基因工程植株的分化工作在正在进行中.     

药用植物石防风与柴胡不对称体细胞杂交的初步研究

经狭叶柴胡悬浮细胞系分离的原生质体用强度为 2 60 μW /cm2 紫外线照射 0 ,1 ,2 ,3min后 ,与石防风原生质体在PEG诱导下融合 .对融合再生的 56个单细胞克隆进行杂种形态学、染色体、同功酶分析表明 ,其中的 34个为体细胞杂种细胞系 .5个杂种愈伤组织 (不对称融合产物 )在培养 1 2个月时再生出完整小植株 .     

葡萄原生质体分离和培养的研究

以葡萄花药诱导的胚性愈伤组织为材料,在附加5％纤维素酶(OnozukaR-10)和0.5％蜗牛酶的混和酶液中分离,获得大量具有活力的原生质体.分离的原生质体在附加2mg/L 6—BA和0.5mg/L 2,4—D的改良B_5培养基中进行液体浅层培养,原生质体能再生细胞壁、生长和分裂,形成了较大的细胞团。     

大蕉胚性培养物及其原生质体再生植株的染色体分析

 采用看护培养法对大蕉胚性细胞悬浮系（Embryogenic cell suspensions, ECS）来源的原生质体进行培养,并研究了不同品种的看护细胞对原生质体培养的影响,以及大蕉ECS及其原生质体再生植株的染色体数目。结果发现,采用贡蕉ECS作为看护细胞时,大蕉原生质体培养15 d后细胞分裂频率达到8.5%,培养30 d后细胞团形成率为0.35%;而以大蕉ECS作为看护细胞时,全部原生质体褐化,不能正常发育。染色体检测结果表明,大蕉ECS的染色体数目不稳定,除含有正常的三倍体染色体数目的细胞（2n=3x=33）外,还出现大量染色体数目异常的细胞。其中绝大部分细胞含有多倍和非整倍的染色体数目,仅14.5%的细胞含正常三倍体染色体数目;但通过ECS原生质体培养获得的再生植株具有正常的三倍体染色体数目（2n=3x=33）。     

小麦与高冰草原生质体融合及再生能力的恢复

以普通小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ）济南１７７悬浮细胞来源的原生质体与高冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｅｌｏｎｇａｔｕｍ）愈伤组织来源的原生质体用ＰＥＧ法诱导融合．由于来源材料的长期继代，小麦原生质体的再生能力已很低；高冰草原生质体不能分裂；而融合产物却能高频率的分化出完整植株．融合再生植株的表型类似高冰草，染色体数目和同工酶谱亦然．但它们早期发育的模式与小麦相似．     

水稻悬浮体细胞胚胎发生及其特异蛋白

以水稻优良品种吉农大８号成熟种子为实验材料,建立了悬浮体细胞胚胎发生体系,并获得再生植株,对其发生过程中特异蛋白的变化,以及诱导中胚性与非胚性愈伤组织的差异等问题进行了探讨,为将来深入研究体细胞胚胎发生机理奠定了基础,实验结果表明,不同培养偌上诱导的胚性愈伤组织的发生频率是不同的,基本培养基ＮＭＢ诱导形成的愈伤组织在适当激素浓度下,可由悬浮培养产生体细胞胚,转移到固体培养基上后,得到再生植株,对这一过程进行的组织学观察证实该形态发生途径是单细胞起源的体细胞胚胎发生,利用ＳＤＳ－聚合烯酰胺凝胶电泳比较体细胞胚胎发生中不同时期可溶性蛋白组分的差异,发现相对分子质量为５９０００的蛋白组分存在于分化初期的球形胚中,相对分子质量为５６０００的蛋白组分仅在早期成熟胚中出现;在分化出幼叶的晚期成熟胚中具有相对分子质量为３２０     

一种简单方法提高原生质体再生植株频率

发展了一种简单有效的方法,提高从灿稻品种Ｐｕｓａ Ｂａｓｍａｔｉ１建立的超过１年龄悬浮细胞系中游离的原生质体再生植株频率。两步再生法,即先将愈伤组织转入含高浓度琼脂糖（１０ｇ／Ｌ）的再生培养基中培养后再转入含低浓度琼脂糖（４ｇ／Ｌ）的再生培养基中培养,有助于植株再生,两步再生法结合使用含高浓度激动素Ｋｉｎｅｔｉｎ（１０ｍｇ／Ｌ）的再生培养基,显著提高植株再生频率,利用此法,可使来源于超过１年龄的悬     

曲阜香稻胚性愈伤组织培养及悬浮细胞系的建立

水稻 (OryzasativaL .)曲阜香系 10 3成熟胚在MS1培养基上诱导培养 ,初始愈伤组织为深黄色、瘤状 ,非松脆类型 .当在MS2 培养基上继代培养 ,经 3～ 4月初始愈伤组织转变为浅黄色、小颗粒状 ,松脆型胚性愈伤组织 .将胚性愈伤组织置于液体培养基中悬浮培养 ,经 4月多可得分散性好、生长快的胚性悬浮细胞系 .     

大花君子兰单细胞培养再生绿色植株

以大花君子兰（ｃｌｉｖｉａ ｍｉｎｉａｔａ） 瘤状结构的胚性愈伤组织为单细胞培养来源,在附加２ ｍｇ／ＬＫＴ、１ｍｇ／Ｌ２ ,４ —Ｄ 及３ ％ 蔗糖的ＭＳ基本培养基上培养,诱导出的愈伤组织经同一诱导培养基长期继代培养后形成幼苗,将较大的幼苗转入状苗生根培养基（ 附加０－５ ｍｇ／ＬＫＴ 和０－１ｍｇ／ＬＮＡＡ的１／２ ＭＳ培养基） 上继代培养形成再生绿色植株。绿苗再生频率随继代时间的延长而提高。     

Hybrid plant regeneration from interfamilial somatic hybridization between grapevine (vitia vinifera L.) and Red Thorowax (Bupleurum scorzonerifolium willd)

The protoplasts of Red Thorowax ( Bupleurum scorzonerifolium) irradiated by ultraviolet light (UV) at an intensity of 260μW/cm2 for 0, 1,2 and 3 min respectively were fused with that of grapevine ( Vitia vinifera). The regenerated 19 clones, every one derived from a single fused cell, were identified as hybrids by phenotype, isozyme, chromosome and 5S rDNA spacer region analysis. The results reveal that all of them are somatic hybrids. 11 hybrid calli including asymmetric and symmetric products regenerated somatic embryos and young leaves after 5 months of culture, of which 4 hybrid cell lines derived from asymmetric fusion regenerated plants with roots after 8-10 months of culture. Inspection of chromosome showed that regeneration of whole plant was related to the decrease of chromosome number. Identification of 5S rDNA spacer region of the plants confirmed that they were interfamilial hybrid plants.     

Rice protoplasts isolated directly from mature-embryo-derived calli

Mature-embryo-derived calli of japonica rice (Oryza sativa L) Taipei 309 were used for replicated protoplast isolation experiments. Six out of nine callus lines produced protoplasts with satisfactory yield of 5.20×10⁶–8.96×10⁶ protoplasts/g FW (fresh weight). The remaining three callus lines initiated from seeds of cryopreserved-callus-derived plants had rooty calli, resulting in low yield of protoplasts and a large number of isolated banana-shape intact cells. Viability of protoplasts ranged 87.46%–94.15%. The average size of protoplasts was 207.49–379.04 μm² in different callus lines. Comparitive experiments were also carried out using both calli and suspension culture cells for protoplast isolation. The results demonstrated that protoplast isolation of calli was a substantially simplified and reliable method for preparing rice protoplasts. Jin Deming: born in Jan. 1959, Associated Professor     

小冠花高效体细胞胚胎发生与植株再生的研究

目的建立小冠花稳定高效体细胞胚胎植株再生体系。方法采用植物离体组织培养技术,通过优化外植体,基本培养基及其激素组合,提高体细胞胚发生和植株再生频率。结果子叶外植体在附加1.0mg/L 2,4-D,1.0mg/L NAA,0.5mg/L KT和100mg/L脯氨酸的MSB培养基上35d100%形成体细胞胚,产生体细胞胚数量达625个/g,在MS KT 1.0mg/L IBA 0.1mg/L 脯氨酸300 mg/L培养基上转换成完整植株的平均数为21棵/g。再生植株移栽成活率为80%,其形态特征和生长习性未见变异。外源激素是体细胞胚胎诱导所必需的,2,4-D是其中最关键的一种。结论建立了小冠花高频稳定高效体细胞胚胎发生和植株再生体系。