脉孢菌纤溶酶的纯化和性质初步研究

应用超滤、盐析、凝胶过滤和疏水相互作用层析对脉孢菌产纤溶酶初步纯化后,活性电泳证实获得单一的纤溶活性组分。对该纤溶组分的基本酶学性质作了进一步的研究,结果表明该纤溶酶的最适作用温度和最适pH分别是46℃和7.8,在40℃以下和pH6.2~7.8时稳定,该纤溶酶具有直接和间接的纤溶活性。     

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.     

蚯蚓纤溶酶的分离及其生物学特性

经过分离纯化，从人工养殖的赤子爱胜蚓中提取出两种既有纤维蛋白溶酶原激活因子活性又能直接溶解纤维蛋白的组分。ＰＡＧＥ检测各为一条区带，证明已达电泳纯。对这两组分的生物学性质进行了研究，包括分子量、酶活力，Ｎ－末端氨基酸残基，氨基酸组成，温度的稳定性及对苯甲酸精氨酸乙酯（ＢＡＥＥ）的酶促反应动力学特性。还分析了其中一个组分（ＢⅡ）从Ｎ末端开始的 ２５个氨基酸残基序列。     

蚯蚓类纤溶酶与“龙心”的比较研究

以人工饲养的北星二号蚯蚓(Esenia foelida)为材料,分离纯化蚯蚓类纤溶酶,并与“龙心”进行了比较,该酶可分离为9个纤溶活力、水解BAEE活力等各不相同的组分,其纤溶性质与“龙心”相似,既能直接水解血纤维蛋白,又能激活血纤溶酶原。     

发酵液中纤溶酶盐析法分离纯化的研究

作者分离出一株能产纤溶酶的芽孢杆菌菌株，用液体发酵法将其发酵，对纤溶酶的纯化方法进行了初步的研究。产生的纤溶酶采用硫酸铵盐析法进行粗提纯，使用超滤脱盐的方法纯化。结果如下：硫酸铵盐在70％饱和度时提纯效果较好，工作压力为0．11MPa超滤脱盐后，粗纤溶酶纯化倍数达到12．41，活性回收率为74．35％。     

菊芋小孢根霉固态发酵纤溶酶的工艺优化

从酒曲中分离得到一株纤溶酶产生菌,经鉴定为菊芋小孢根霉.现对其固态发酵工艺的碳源、氮源、碳氮比、初始pH、含水量、无机盐、接种量、发酵时间、发酵温度和培养基厚度进行研究.结果表明,该菌株固态发酵工艺为:麸皮与豆粕比例2﹕1,初始pH,5.0,含水量(干基)1,mL/g,MgSO4,10,mmol/kg,(NH4)2,SO4200,mmol/kg,FeSO4,3,mmol/kg,接种量为6×106,g-1,培养基厚度为2,cm,29,℃恒温发酵72,h.最佳发酵条件下酶活力为684.39,U/g,是未优化时产酶量的8.2倍.通过对培养基的优化研究,使产酶量大幅提高,说明菊芋小孢根霉固态发酵纤溶酶具有工业潜力,也为工业化提供数据基础.     

产纤溶酶菌种的鉴定及纤溶酶的分离纯化

为了获得纯纤溶酶并探讨其酶学性质,从广泛收集的豆豉中筛选到一株具有高产纤溶酶能力的菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌.将该菌突变株DC-12N8的发酵液经离心除菌、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤,获得电泳纯的豆豉纤溶酶,每升发酵液可得到4.5mg活性酶蛋白,每克酶蛋白活力达1.18mol/s,纯度为发酵原液的53.6倍,回收率为11.7%.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,该酶是单链蛋白质,其分子质量约为28ku.     

地衣芽胞杆菌产纤溶酶的分离、纯化及其酶学性质研究

以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WBL-3进行固体发酵生产纤溶酶.通过生理盐水浸提、离心去除菌体、硫酸铵分级盐析、透析、离子交换层析和凝胶过滤层析对酶进行分离纯化,SDS-PAGE电泳检测酶的分子量大小,并对该纤溶酶的酶学性质进行研究.结果表明:经凝胶过滤层析后,纯化倍数为33.19,回收率12.39％;SDS-PAGE电泳检测为单一蛋白条带;酶学性质分析表明:酶的最适反应温度为55℃,稳定性随着温度的升高而降低;最适反应pH为8.5,pH7-10范围内酶活稳定性较高;Mg2+对该酶有微弱的激活作用,Cu2+、Ag+、Fe3+、Hg2+、Pb2+对酶有较强的抑制作用.本研究为开发新的溶栓药物提供了新的选择.     

蚯蚓纤溶酶与“龙心”的比较研究

以北星二号蚯蚓为材料,分离纯化蚯蚓纤溶酶。并对其理化性质、溶纤机理等与“龙心”进行了比较。蚯蚓纤溶酶和“龙心”主要组份的分子量分别为37200和43500。蚯蚓纤溶酶和“龙心”的溶纤比活力(mm~2/mg蛋白)分别为83700和24430蚯蚓纤溶酶既能直接水解血纤维蛋白,又能激活血纤溶酶原。在0—4℃时也能水解血纤维蛋白。蚯蚓纤溶酶经DEAE-Sepharose离子交换柱层析,可分离为9个纤溶活力不同的组分。     

里氏木霉木聚糖酶的分离纯化及其性质

使用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-25凝胶色谱脱盐、DEAE-Sephadex A-50和SP-SephadexC-50离子交换色谱等分离纯化技术，从里氏木霉（Trichoderma reesei）RutC-30培养液中分离出木聚糖酶组分，再经SephadexG-100凝胶过滤色谱进一步分离纯化，得到2个纯木聚糖酶组分A组和组分B。经SDS-PAGE鉴定两组分为单带，相对分子质量分别为20300和13500。组分A的最适反应条件为45℃、pH3.0-5.5很稳定，酶解产物主要是低聚木糖，只含少量木糖；组分B的最适反应条件为55℃、pH5.5，酶解产物全部是低聚木糖。     

蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株纤溶酶的酶学性质

对蜡状芽孢杆菌Bc-05茵株的发酵上清液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析所获得的纤溶酶进行性质研究.结果表明:经纤维蛋白平板法检测该酶有直接水解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用,最适作用温度37℃,最适pH=8.0,在pH=8.0条件下25℃和37℃放置24 h酶活力仍保持77.52%和78.96%,该酶体外对兔血凝块有明显的溶解作用;Ca2+,Mn2+离子对该酶具有激活作用,而Cu2+,Fe3+完全抑制其纤溶活性,PMSF,EDTA和DTT对该酶有抑制作用,说明活性中心含有二硫键、金属离子和丝氨酸;测其N端10个氨基酸序列为NH2-Val-Thr-Pro-Thr-Asn-Ala-Val-Asn-Thr-Gly,与其他生物来源的纤溶酶相比较没有同源性.     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶分离纯化研究

对产白地表茅孢杆菌(B.licheniformis)的碱性蛋白酶通过乙醇沉淀、盐析、DEAE阴离子交换层析,凝胶层析4步纯化.以酶比活力为指标,对碱性蛋白酶分离纯化条件进行了优化.结果发现:提纯酶的比活力达62098U/mg,纯化倍数为23.7,活性回收率为15.7%.     

纳豆激酶纯化及性质研究

以蒸煮后的大豆为原料通过纳豆菌发酵,生产纳豆激酶.改进纯化工艺以酸法提取和凝胶过滤纯化出比活性为160.8IU/mg的酶制品.该酶制品不仅对纤维蛋白有很好的溶纤作用,而且对大鼠血纤维（拟血栓）也有很好的溶纤活性,实验还证明该酶制品对大鼠新鲜血液有很好的抗凝性能,尤其是该酶制品在pH值为2.45和经胃蛋白酶作用后仍保持较高的活力.同时,该方法制备工艺简便,有0.6%的高回收率,故本方法提取的纳豆激酶制品有望开发成为新型口服溶栓、防栓制剂,以供医疗和保健应用.     

枯草杆菌SBS6中一种纤溶酶的纯化及部分特性

从枯草杆菌SBS6菌株发酵上清液中分离得到电泳纯的纤溶酶，经SDS—PAGE和凝胶过滤测得其分子质量为31ku，最适pH8．9，最适温度为50oC，酶在60℃下pH5～12范围内相当稳定，Ca^2 ，Mg^2 ，Zn^2 ，Mn^2 等离子对酶的溶解血纤维活性无明显影响，Fe^2 和Fe^3 分别抑制酶活性的17％和20%。     

一株来源于酒曲的纤溶酶产生菌的鉴定及其酶学性质

从酒曲中分离到一株纤溶酶产生菌,经形态及ITS序列分析鉴定为菊芋小孢根霉(Rhizopus microsporus var.tuberosus).酶学性质研究表明,该纤溶酶的最适作用温度为37,℃,最适作用pH为7.0.在37,℃保温4,h酶活力仍保存95%,57,℃下保温4,h后仍有一定酶活.该酶具有广泛的酸碱适应性,在pH<3.4时仍残留部分活性;最稳定的pH范围是6～8.Zn2+、Cu2+对酶活有抑制作用,Na+、Ca2+、Mn2+对酶活具有明显的促进作用.该酶在人工肠液中具有较好的稳定性,37℃保温4 h后残余酶活仍然保持在80%以上,有望制成注射剂应用于临床.     

一种与核黄素合酶α亚基具有结构相似性的板蓝根多肽的分离纯化与表征

利用离子交换色谱SP-5PW和疏水色谱POROS HP2从板蓝根鲜根水相抽提物中分离纯化多肽组分,并对其进行生化表征.获得一种达到电泳纯的多肽RIP2,其相对分子质量约为6.87 ku,等电点约为7.73,N端氨基酸序列依次为QIGEFATAPF.经数据库搜索比对,发现该多肽与核黄素合酶α亚基具有一定的同源性.细胞毒性实验表明该多肽具有一定抗病毒作用.     

枸杞果实铜,锌超氧物歧化酶的纯化及其性质的研究

枸杞果实粗提液中具有Mn-SOD、Fe-SOD和Cu·Zn-SOD三种类型。经氯仿-乙醇处理、丙酮分级沉淀、sepbadex G-100凝胶过滤和DEAE-纤维素柱层析纯化,获得对CN~-敏感的Cu·Zn-SOD。在凝胶电泳染色图谱上,DEAE-纤维素柱层析纯化,获得对CN~-敏感的Cu·Zn-SOD。在凝胶电泳染色图谱上,DEAE-纤堆素柱线性梯度洗脱下来的两个活性组分与酶粗提液同工酶谱上两条Cu·Zn-SOD主区带分别相对应,而且酶活性染色带与蛋白染色带位置对应,说明上述活性组分都已纯化到均一的程度。该酶分子量约为33900道尔顿,亚基分子量约为16700道尔顿。酶的两个活性组分在紫外光区的吸收曲线略有差异,但吸收峰都在255nm。该酶在55℃的温度范围内对热稳定。纯化后的酶平均为4436units/mg protein,纯化了177.6倍,活力回收为12.3%。上述酶没有过氧化氢酶活性。     

玉米源活性肽的分离纯化及清除DPPH自由基的活性

以脱脂醇溶蛋白为底物进行酶水解反应,获得了玉米源活性肽组分,经葡聚糖凝胶和离子交换等方法对产物进一步分离纯化.以α-生育酚为阳性对照,研究了活性肽及其分离纯化组分对2,2-二苯基-1-苦基苯肼(DPPH)自由基的清除活性及其浓度的关系.结果表明:活性肽及其分离纯化组分均具有清除DPPH自由基的活性;经CM-纤维素弱阳离子交换层析分离所得组分2对DPPH自由基的清除活性最强,且清除效果与其浓度及作用时间呈正相关,分子量主要集中在400～700.     

单环刺螠纤溶酶的季节积累及初步药效学

研究单环刺螠纤溶酶(UFE)的季节累积规律,并验证UFE的药效学.首先,将不同季节采收的单环刺螠体腔液通过离心、葡聚糖凝胶过滤、阴离子交换层析等工艺进行分离、提纯,获得单一组分.然后,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定UFE的相对分子质量,用Folin-酚试剂法测定其活力.最后,通过体内、外溶栓实验和大鼠脑中动脉栓塞模型来考察UFE的抗凝血和溶血栓作用.结果表明:从秋季批单环刺螠中分离纯化的UFE比活力达到194.57nkat·mg~(-1),纯化倍数为17.9倍,回收率为16.9%,与春季批、夏季批结果相比有统计学意义.药效学实验证实:UFE与尿激酶类似,能明显延长体外凝血时间,有效抑制体内血栓形成;UFE的活性与季节变化相关,具有季节累积性;UFE具有显著的抗凝血和溶栓作用,且无溶血毒性.     

多级色谱纯化牛胎盘免疫调节多肽及性质测定

使用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换色谱、Sephadex G-25 凝胶色谱和Sephasil C18反相高效液相色谱等分离纯化技术,采用体外培养淋巴细胞增殖试验,从牛胎盘提取液中分离出了具有免疫调节活性的多肽。免疫调节多肽对淋巴细胞增殖的促进作用具有剂量依赖性。纯化后的免疫调节多肽经过毛细管电泳(CE)鉴定为单一组分。毛细管等电聚焦电泳(CIEFE)测定多肽的等电点是3.82。基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定多肽的相对分子质量为2134。蛋白质测序仪测定多肽的序列为Tyr-X-Phe-Leu-Gly-Leu-Pro-Gly-X-Thr。