几种芽孢染色方法的比较与改进

对常用细菌芽孢染色法做了系统比较,并进行改进,提出了较实用的微波芽孢染色方法,实验结果表明,该法具有节约试剂,缩短染色时间,染色效果好等优点,是适合学生实验教学的较好方法,也特别适合批量生产芽孢杆菌玻片标本的制作。     

细菌芽孢染色方法比较的研究

芽孢是微生物的重要结构,对于微生物的分类有着十分重要的作用。目前,在芽孢染色上虽有不少方法,但仍存在染色效果不明显的缺点。对三种芽孢染色法进行了比较研究,结果发现：方法三着色强,观察清晰,染色效果更理想,而且该方法快速、有效、简便易行,更适于在实验教学中应用。     

细菌芽孢染色法的改良探索

文中对微生物学实验教材上介绍的Schaeffer-Fulton氏芽孢染色法进行了改进。用石碳酸复红试剂代替0.5番红水溶液作为复染剂,并对比不同石碳酸复红浓度及染色时间对染色效果的影响。结果表明,以石碳酸复红的10倍稀释液为复染剂,复染30 s~1 min时能达到最佳的染色效果。改进方法操作简单易行,染色效果对比鲜明,可使学生更易将菌体与芽孢区分开来。将改进的染色方法运用于微生物学实验教学,收到了良好的教学效果。     

动物微生态制剂鸡肠源芽孢杆菌的分离与鉴定

试验菌种由宁夏固原山区完全自然生长的土种健康产蛋母鸡的盲肠和大肠中分离获得，共分离出8株革兰氏染色阳性杆菌株，对其进行茼落形态观察和描述，及革兰氏染色、芽孢染色和生理生化鉴定，确定4株为芽孢杆菌（Bacillus），其中3株为枯草芽孢杆菌（B、subtilis），1株为蜡状芽孢杆菌（B．cereus），各项鉴定结果均符合相对应的芽孢杆菌属和种的菌落形态，及革兰氏染色、芽孢染色特征和生理生化鉴定标准；另4株初步确定为不产芽抱的革兰氏阳性杆菌．     

枯草芽孢杆菌TY7210菌株的ERIC-PCR快速鉴别

以ER IC核心序列为引物,以2株枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,采用PCR对T aq DNA聚合酶用量、PCR退火温度及模板DNA浓度进行优化,建立了快速鉴别芽孢杆菌的ER IC-PCR方法,并对5株芽孢杆菌进行了分析.结果表明枯草芽孢杆菌TY 7210菌株与其他芽孢杆菌菌株具有不同的指纹图谱,尤其不同于枯草芽孢杆菌(ATCC 1.1849),为芽孢杆菌的快速鉴别奠定了基础.     

芽孢缺失对D-核糖产量的影响

利用原生质体紫外线诱变的方法处理转酮酶缺陷型短小芽孢杆菌,选育到一株丧失芽孢形成能力的转酮酶缺陷型短小芽孢杆菌,摇瓶培养D-核糖平均产量达到66g/L,较出发菌株提高38%.研究表明,芽孢生成缺陷有利于D-核糖的产生,筛选芽孢生成能力缺陷的菌株是选育D-核糖高产菌株的有效手段.     

枯草芽孢杆菌酶的还原性能及用于靛蓝染料还原

采用酵母浸粉、蛋白胨、琼脂粉等材料在特定的条件下培养枯草芽孢杆菌,使其分泌枯草芽孢杆菌酶,包括胞外酶和胞内酶;测试酶的导电能力及还原能力,结果表明:枯草芽孢杆菌胞内酶具有还原能力;当电源外加电压调至15 V时,胞内酶还原电位为867 mV,超过靛蓝所需要的还原电位-760 mV,枯草芽孢杆菌胞内酶可用做靛蓝电化学染色体系的还原剂,将其用于靛蓝电化学还原染色,发现当酶体系温度为60℃,pH为11,还原时间为40 min时,对靛蓝染料的还原效果较佳.     

溶藻细菌MT22的形态学观察和分子鉴定

结合形态学和16S rRNA 基因测序的方法,对一株溶藻细菌 M T22进行菌种鉴定．结果显示, M T22菌体呈杆状,革兰氏染色阳性,产芽孢．在LB平板培养基上,菌落呈白色、圆形．16S rRNA 基因序列分析表明,与解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）的序列同源性达99％．     

黄瓜枯萎病菌内生拮抗细菌的筛选与鉴定

采用平板对峙法从黄瓜体内筛选对黄瓜枯萎病菌具有拮抗作用的细菌.结果表明,黄瓜体内的细菌数量为2.9-25.6×103cfu· (g·FW)-1,其中,植株不同器官的内生细菌数量不同,以叶中的细菌数量最多,其次为花,最少的为果实;从所分离的细菌菌株中筛选到20株对黄瓜枯萎病菌具有不同程度拮抗作用的菌株;选择拮抗效果较好的10株菌株,用革兰氏染色、鞭毛染色、芽孢染色和生理生化测定等进行鉴定,发现其均为芽孢杆菌属(Bacillus spp.).     

驱油枯草芽孢杆菌产芽孢条件优化

试验研究了采油微生物枯草芽孢杆菌的芽孢形成及萌发过程。结果表明,最适产芽孢培养基为(g/L):氯化钠5,牛肉膏5,酵母膏2,可溶性淀粉20。最适中间调控pH为9.0,最适中间调控温度为45℃。活菌总数达到1.6×10~9CFU/mL,芽孢数达到2.2×10~8CFU/mL,芽孢率为13.8%。对枯草芽孢杆菌进行3 L发酵罐研究,确定了芽孢形成的最佳搅拌转速为140 r/min,同时确定了芽孢在低转速下也可以萌发。     

一种新的免疫荧光-酶双重染色技术

通过对原代培养DRG细胞进行免疫荧光染色、免疫酶染色和免疫荧光-酶双重染色,研究了原代DRG细胞中P物质及NK-1R与神经元相互定位关系,对比分析了3种染色效果.结果表明:免疫荧光-酶双重染色效果较好,既能清楚辨识组织细胞结构,又可对标记物进行清晰区分.故免疫荧光-酶双重染色技术是一种结合了免疫酶法和荧光法的优势的免疫染色新方法,值得在病理药理研究中推广.     

氢过氧化物酶(HPO)阳性Phi小体形态特点、超微细胞化学观察及其临床意义

本文对41例成人白血病及4例骨髓增生异常综合征(MDS)病人的骨髓标本进行氢过氧化物酶(HPO)染色,观察HPO阳性Phi小体在光镜下的形态特点及电镜下细胞化学超微结构,并初步探讨了HPO染色技术及Phi小体检测的临床意义。作者认为:该染色法特异性强,重复性好,操作简便,对于活动性AML的诊断几无假阳性,并可用于指导治疗,值得推广应用。     

胶质芽孢杆菌荚膜染色方法的比较与改进

荚膜是细菌的重要附属物,细菌有无荚膜以及荚膜物质厚度和化学组成是其重要特征之一.染色和观察荚膜形态是微生物研究中的基本技能,但荚膜的低折光性与亲和染料能力差等特性,使其不易着色,制作一张好的荚膜染色玻片需要正确的染色方法和一定的熟练程度.胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)以其肥厚荚膜为显著特征,该菌的许多有益特性都与其产生肥厚荚膜有密切关系.本文以该菌为试验对象,尝试采用7种负染方法对荚膜进行染色.结果表明:7种染色方法中,墨汁染色法和刚果红盐酸染色法简便快速且效果较好;对刚果红盐酸染色法进行了改进,使染色效果更为理想,该方法值得推广.     

云南红豆杉小孢子发生和雄配子发育的研究方法比较

 以云南红豆杉为实验材料,比较了石蜡切片法、洋红简易染色法和整体染色透明法研究小孢子发生过程的效果,分析了用石蜡切片法及离体培养法研究雄配子体发育优缺点.在离体培养中,对比了不同的蔗糖质量浓度、培养温度及染色方法对实验结果的影响,从而为针叶树种雄性生殖系统发育过程研究提供参考.结果显示:整体透明染色法操作简单,能够反应小孢子发育过程中各个阶段的细胞结构,是用于小孢子发育过程研究的比较理想的方法;对于雄配子体发育过程的研究,需要用石蜡切片法与离体培养法相结合,在离体培养中,采用雄球花表面灭菌,自然散粉,低糖低温培养有利于防止污染,洋红染色法方便快捷,不需要特别的设备,是离体培养时比较理想的染色方法.     

棕色脂肪组织银染实验

通过改进龙桂开银染方法对休眠期刺猬褐色脂肪组织进行染色实验,结果表明适当改进的龙桂开银染方法能够使褐色脂肪组织染出良好的效果,并在银染的休眠期刺猬褐色脂肪组织观察中发现,休眠期刺猬褐色脂肪组织细胞内有核仁,并多为1～4个,这与常规描述不一致。     

对排球冲跳空间差扣球进攻技术的探讨

冲跳空间差扣球是我国在快球基础上发展起来的一种创新方法．本文从理论上系统地分析了这种扣球进攻技术的特点．阐明了它是一项进攻效果好，发展潜力大，自我掩护性很强的快攻技术．     

Simultaneous ultrastructural demonstration of multiple peptides in endocrine cells by a novel immunocytochemical method.

Current immunocytochemical techniques detect all antibodies that react with tissue. Unfortunately, some of these antibodies may react with antigens other than those intended. Such problems are minimised by using sets of antibodies detecting different regions of the desired antigen. However, as immunocytochemical methods can now detect very low antibody concentrations, the purity of antisera is critical. Furthermore, although antisers may be purified by affinity chromatography, difficulties in recovering high-avidity antibodies cause most affinity-purified antisera to be enriched in low-avidity antibodies, which may be dislodged during staining. We have therefore developed, and describe here, a new ultrastructural post-embedding staining technique, based on the divalency of IgG molecules and using antigen-coated colloidal gold granules. Previously, colloidal gold-labelled antibodies have been used for post-embedding staining. Unlike our gold-labelled antigen detection (GLAD) technique, however, these methods do not differentiate between specific and nonspecific antibodies. The GLAD method detects only specific antibodies and does not select against high-avidity antibodies, and in this it resembles the radioimmunocytochemical method. However, the GLAD method differs from the latter in that it is useful for ultrastructural studies, does not require autoradiography and allows simultaneous detection of multiple antigens. Moreover, specific activity compared with background may be quantitated.     

烟草原生质体活力检测和细胞核染色方法的研究

本试验以烟草叶片和烟草悬浮系制备的原生质体为材料,采用不同染料对原生质体活力和细胞核进行染色效果比较.结果表明,原生质体活力观察宜采用荧光素双醋酸酯（FDA）染色法,染色效果清晰易于观察,四嘧唑蓝（MTT）法则可定量反映原生质体活力;相对于其他细胞核染料,DAPI对不同来源的原生质体细胞核染色效果均较好,能够清晰地对原生质体进行观察和计数.本研究为今后原生质体的检测提供有用的参考.