2种弧菌鞭毛蛋白的分离纯化与鉴定

尝试分离提取2种弧菌的鞭毛蛋白,采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳对所提蛋白进行分离纯化,Western免疫印迹检测,电镜鉴定。结果显示：实验已经成功分离提纯了哈维氏弧菌的鞭毛蛋白,获得了溶藻弧菌鞭毛蛋白的初提液。提纯的哈维氏弧菌鞭毛蛋白经SDS-PAGE显示3条清晰蛋白带（相对分子量分别为39.7,41.9和42.7KDa）,透射电镜观察表明该蛋白呈经典的丝状,可以认为哈维氏弧菌的鞭毛丝是由相对分子量分别为39.7,41.9和42.7KDa的3种鞭毛蛋白亚基构成。溶藻弧菌鞭毛蛋白的初提液经SDS-PAGE后显示5-9条蛋白带,其中36.8KDa的蛋白带有强的免疫原性。     

绞股蓝多糖脱蛋白工艺及相对分子质量的测定

采用Sevag法、木瓜蛋白酶-Sevag法、TCA-Sevag法对绞股蓝粗多糖脱蛋白工艺进行研究.通过DEAE—52纤维素柱层析和葡聚糖凝胶G—200柱层析对粗多糖进行分离纯化,采用高效液相色谱分析法对精制多糖GPM—21的相对分子质量进行测定分析.结果表明:木瓜蛋白酶-Sevag法效果最佳,蛋白脱除率高且多糖损失量小,累计蛋白脱除率可达63.08%,多糖保留率为77.34%.液相渗透色谱法测定GPM—21的相对分子质量为200 576.     

印迹膜测序法分析结核分枝杆菌抗原蛋白

把WesternBlot技术分析抗原抗体反应的高度特异性与用PVDF膜作载体进行蛋白质氨基酸序列分析的高度敏感性相结合对结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,TB)的特异性、保护性抗原进行筛选和分析鉴定 ,获得了分子量为 31KDa、30KDa的抗原 这两种抗原与抗结核分枝杆菌的单克隆抗体和结核病人血清均发生阳性反应 ,而与正常小鼠血清和健康人血清呈阴性反应 用印迹膜测序法测出 31KDa抗原蛋白的N 末端序列为AlaGluValAspTrpLeuValPheAlaValSerTrpProValGly ,30KDa蛋白序列为PheSerArgProGlyLeuProValGluTry 印迹膜测序为分子生物学研究提供了一种有效的新途径     

大黄橐吾水溶性多糖的初步纯化及清除自由基活性研究

为合理利用大黄橐吾提供一定依据,对大黄橐吾多糖进行提取分离纯化.大黄橐吾经热水浸提,乙醇沉淀得到大黄橐吾粗多糖.粗多糖经凯氏定氮法测得蛋白质含量为14.02%,苯酚-硫酸法测得多糖中糖含量为23.41%,硫酸-咔唑法测半乳糖醛酸含量为35.16%.粗多糖经Sevage法和酶法联合脱蛋白,得初步纯化的多糖.纯化多糖经红外吸收光谱分析,初步断定其官能团的存在及其所处状态.对大黄橐吾多糖进行清除自由基活性研究,结果表明大黄橐吾多糖对超氧阴离子自由基和羟自由基具有明显的清除效果,且初步纯化后多糖的清除效果比粗多糖好.     

鹿茸水提取物及其蛋白酶解物对小鼠 脾淋巴细胞增殖的影响

研究了鹿茸水提取物中非蛋白成分、粗蛋白酶解物及分离组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.非蛋白成分和酶解物的分离分别采用HPLC法和超滤法.应用WST-8法检测各分离组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用高分辨质谱对非蛋白成分进行初步鉴定.结果显示,非蛋白成分对未经刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾细胞增殖的促进作用优于其分离组分,Fr.Ⅲ和Ⅳ对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖有抑制作用,初步鉴定其为碱基和核苷酸的混合物.分子量大于10 kDa的肽段,单独可刺激小鼠脾细胞增殖,且对ConA诱导的T淋巴细胞增殖有抑制作用.肽段分子量大小对其免疫调节活性影响较大,但并未呈现直接的相关性.肽的氨基酸组成、序列及构型等也是影响其活性的重要因素.     

黑稻种子醇溶蛋白亚基组成分析

以9个品种的黑稻种子为材料,用SDS—PAGE方法,分析了各个品种的醇溶蛋白亚基组成。结果表明:①黑稻种子有2条共有的特征带,其分子量分别为:26.1 KDa、21.5KDa;②亚基57.2 KDa、35.0 KDa和26.1 KDa,在每个品种中都存在明显的差异。其中,汉中黑糯、云黑和龙睛2号中含有此类亚基的数目最多(3个);在乌贡1号中,此类亚基数目最少。     

毛木耳多糖提取工艺的研究

本实验对毛木耳子实体粗多糖(APP)提取工艺进行了研究,实验表明:提取的最佳条件是热水浸提的料液比为1:40、pH值为6、浸提温度为70℃、浸提时间为5h,此时多糖的提取率为28.237%,Sevage法除蛋白时氯仿与正丁醇的体积比为5:1,样液与Sevage试剂的体积比为4:1时蛋白脱除率较高、多糖损失率较低,此时蛋白脱除率为74.75%,粗多糖含量为38.97%.然后经DEAE-52纤维素离子交换柱层析脱色,SephadexG-200柱层析进一步分离纯化.为毛木耳多糖的开发利用奠定了基础.     

交链孢菌中一种酸性糖蛋白的鉴定及功能分析

采用液氮研磨、离心、阴离子交换柱HitrapTMDEAE FF、分子筛柱Hitrap Superdex75/300等一系列分离纯化方法对细极链格胞(Aternaria tenuissima)水溶性酸性糖蛋白激发子进行了纯化。经SDS-PAGE、Native-PAGE检测,蛋白分子量约为66KDa;经全蛋白银染和糖蛋白染色试剂盒对其鉴定为糖蛋白。经蒽酮-硫酸法测定,糖与蛋白比例为1.75。经β-消去反应判定糖蛋白的连接类型为O-连接。生物活性测定表明,该蛋白可促进小麦种子的萌发和幼苗的生长。     

砂海星酸性粘多糖的分离纯化

利用碱提法结合酶解法从砂海星中提取酸性粘多糖.粗品经三氯乙酸和二次酶解除蛋白后,用42%和80%的乙醇分级沉淀分别得到多糖Ⅰ和多糖Ⅱ,其总糖含量分别为71.6%、80.4%,蛋白质含量分别为1.52%和1.38%.多糖Ⅱ依次用离子交换层析(DEAE-52)和葡聚糖凝胶(G-50)进行分离、纯化,结果表明分子中带有比较均一的电荷,硫酸基离子鉴定反应为阳性,并且组分比较单一;用葡聚糖凝胶(G-100)对其分子量进行测定,其平均分子量约为12kD.     

一种云斑天牛气味结合蛋白的分离纯化

为揭示云斑天牛(Batocera lineolata Chevrolat)对气味分子的识别机制,通过荧光结合试验和葡聚糖凝胶G75(Sephadex G75)层析研究了云斑天牛对气味分子的识别情况,并对云斑天牛气味结合蛋白进行了分离纯化。结果表明,云斑天牛气味结合蛋白能与荧光探针N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine, 1-NPN)产生荧光结合,云斑天牛触角部位的总蛋白提取液中存在pro. Ⅰ-Ⅻ(Protein Ⅰ-Ⅻ)12种大分子粗提蛋白,这12种大分子粗提蛋白经Sephadex G75纯化后,得到1种能与荧光探针1-NPN产生荧光结合的纯化蛋白pur-pro. I(purified protein I)。纯化蛋白pur-pro. I分子质量约为15.2 ku,对应为大分子粗提蛋白pro. Ⅻ(Protein Ⅻ)。鉴定认为,分离纯化蛋白pur-pro. I是云斑天牛的一种气味结合蛋白。     

Determination of the genus-specific antigens in outer membrane proteins from the strains of Leptospira interrogans and Leptospira biflexa with different virulence

Objective:To determine the existence of genus-specific antigens in outer membrane proteins (OMPs) of leptospira with different virulence. Methods: Microscope agglutination test (MAT) was applied to detect the agglutination between commercial rabbit antiserum against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen and 17 strains of Leptospira interrongans belonging to 15 serogroups and 2 strains of Leptospira biflexa belonging to 2 serogroups.The outer envelopes (OEs) of L.interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar lai strain lai (56601) with strong virulence and serogroup Pomona serovar pomona strain Luo (56608) with low virulence,and L.biflexa serogroup Semaranga serovar patoc strain Patoc I without virulence were prepared by using the method reported in Auran et al.(1972).OMPs in the OEs were obtained by treatment with sodium deoxycholate. SDS-PAGE and western blot were used for analyzing the features of the OMPs on electrophoretic pattern and the immunoreactivity to the antiserum against TR/Patoc I antigen, respectively. Results:All the tested strains belonging to different leptospiral serogroups agglutinated to the antiserum against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen with agglutination titers ranging from 1:256-1:512. A similar SDS-PAGE pattern of the OMPs from the three strains of leptospira with different virulence was shown and the molecular weight of a major protein fragment in the OMPs was found to be approximately 60 KDa.A positive protein fragment with approximately 32 KDa confirmed by Western blot,was able to react with the antiserum against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen, and was found in each the OMPs of the three stains of leptospira.Conclusion: There are genus-specific antigens on the surface of L.interrogans and L.biflexa. The OMP with molecular weight of 32 KDa may be one of the genus-specific protein antigens of leptospira.     

RB型硝胺发射药使用寿命实验研究

针对布鲁氏菌BCSP-31蛋白基因设计一对引物,优化反应条件,对布鲁氏菌属6个代表菌株以及与布鲁氏菌有交叉反应的对照菌株进行扩增,结果能够对布鲁氏菌属6个代表菌株进行很好扩增,扩增片段大小为223bp,而对照菌株不能扩增,使用该方法最低可以检测20个细菌.     

大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）RPS24基因cDNA克隆及序列分析

本研究运用RT—PCR技术,首次从大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）的肌肉组织总RNA中成功克隆了RPS 24（Ribosomal Protein S24）基因的表达序列,并对其进行了测序及初步分析．结果表明：大熊猫RPS24基因的表达序列全长为431bp,开放阅读框（ORF）为399bp,编码132个氨基酸的蛋白质,该蛋白的分子量为15．3251kD,pI为10．92,含有7种类型共14个功能位点：即1个N-糖基化位点、2个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、3个N-酰基化位点、1个酰胺化位点及1个RPS 24e signature．进一步分析发现,大熊猫RP524基因与已报道的人、牛、苏门答腊猩猩、褐家鼠和小家鼠5个哺乳动物物种的表达序列及其编码的氨基酸序列具有很高的相似性：编码序列同源性分别为94．1％、92．4％、94．7％、89．9％和90．4％;与人RPS24蛋白的氨基酸序列同源性为98．48％,其余均为99．24％．     

SHV-12型超广谱β-内酰胺酶的原核表达及免疫原性分析

利用PCR技术扩增了SHV-12 ESBLs目的基因,并将目的基因亚克隆到表达载体pET-28a(+)中,获得重组质粒pET-28a-SHV-12转化于表达菌株BL21(DE3)中诱导表达,表达蛋白纯化后经SDS-PAGE电泳分析.结果表明,目的蛋白SHV-12 ESBLs相对分子质量为30 KDa,经蛋白质印迹检测证...     

长角血蜱不同龄期虫体免疫原性研究

用酶联免疫吸附技术,用长角血蜱三个龄期的虫体蛋白检测其幼虫、若虫和成虫多次叮咬后的兔血清效价.结果表明不同生活阶段的虫体之间存在免疫交叉反应.用SDS-PAGE方法分析了几种蜱类的蛋白质,结果表明长角血蜱不同发育期虫体共有的主要蛋白质有5种,分子量分别为97.4、94、63、37和32kDa;越南血蜱幼虫和微小牛蜱幼虫与长角血蜱不同发育期虫体共有的蛋白质有2种,分子量为97.4、94kDa.用酶联免疫印渍技术研究发现:长角血蜱三个龄期虫体分别叮咬兔产生的抗血清与长角血蜱不同发育期虫体蛋白质印渍,显示出共同蛋白质带,分子量为94kDa.三种抗血清与越南血蜱幼虫印渍显示出的蛋白质,其分子量为97.4、94kDa;与微小牛蜱幼虫蛋白反应显示的蛋白质带,分子量为83、63kDa.实验结果表明不仅长角血蜱三个龄期虫体之间存在免疫交叉反应,而且与微小牛蜱幼虫和越南血蜱幼虫之间也存在免疫交叉反应.     

T7启动子促发下的人尿激酶原在大肠杆菌中的高效表达

将人工全化学合成的尿激酶原（ｐｒｏ－ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＥＴ３ｄ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ＬｙｓＳ，经ＩＰＴＧ诱导，获得了占菌体总蛋白１８％的高表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定，表达产物主要为单链尿激酶，并且在菌体内基本以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性，从ＩＬ培养基中可获得３０００００单位的活性尿激酶原。     

旋毛虫21 KDa排泄分泌抗原二级结构及T细胞和B细胞表位预测

应用SYFPEITHI和Propred程序和多种预测方案对旋毛虫21 KDa排泄分泌抗原的T细胞表位、二级结构、疏水性、柔韧性、表面可能性、两性区以及B细胞表位进行预测.旋毛虫21 KDa排泄分泌抗原存在2个较强的T细胞表位区,分别为第9~23位和第135~150位氨基酸位点;潜在的B细胞表位存在于从第28个氨基酸残基开始的广大区域内.预测结果为旋毛虫病诊断和新型疫苗研制提供候选抗原.     

Variability and memory of protein levels in human cells

Protein expression is a stochastic process that leads to phenotypic variation among cells. The cell-cell distribution of protein levels in microorganisms has been well characterized but little is known about such variability in human cells. Here, we studied the variability of protein levels in human cells, as well as the temporal dynamics of this variability, and addressed whether cells with higher than average protein levels eventually have lower than average levels, and if so, over what timescale does this mixing occur. We measured fluctuations over time in the levels of 20 endogenous proteins in living human cells, tagged by the gene for yellow fluorescent protein at their chromosomal loci. We found variability with a standard deviation that ranged, for different proteins, from about 15% to 30% of the mean. Mixing between high and low levels occurred for all proteins, but the mixing time was longer than two cell generations (more than 40 h) for many proteins. We also tagged pairs of proteins with two colours, and found that the levels of proteins in the same biological pathway were far more correlated than those of proteins in different pathways. The persistent memory for protein levels that we found might underlie individuality in cell behaviour and could set a timescale needed for signals to affect fully every member of a cell population.