牛酪白基因导入大豆的研究

将带有牛酷蛋白基因ｃａｓｅｉｎＢ的植物表达载体ｐＡＳ－２,在大豆自花授粉后,用注射法导入大豆受精子房中。以质粒ｐＡＳ－２的３５Ｓ－Cａｓｅｉｎ-Ｇｕｓ扯段为模板,随机引物法标记探针,对１０３株受体植株后代的ＤＮＡ进行点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,发现其中１株在点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交中均呈阳性。证明外源基因已整合到大豆基因组中。     

中国水稻无融合生殖育种的研究进展

中国水稻无融合生殖育种的研究进展ＡｄｖａｎｃｅｉｎｔｈｅＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＢｒｅｅｄｉｎｇＡｐｏｍｉｘｉｓＲｉｃｅｉｎＣｈｉｎａ￥／／黄群策（湘潭师范学院生物系，副教授湘潭４１１２０１）植物的无融合生殖是一种特殊的种子克隆。这种生殖方式受特定基因控...     

环状芽胞杆菌基因启动子的分离与鉴定

环状芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）总ＤＮＡ经Ｓａｕ３ＡＩ酶切后插入到启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ１的ＢａｍＨＩ位点，转化大肠杆菌后，在卡那霉素的平板上筛选到５０个抗性菌落。从随机挑取的２９个抗住菌落所分离到的质粒ＤＮＡ经限制酶切和琼脂糖凝胶电泳后表明，各质粒均有ＤＮＡ插入片段，对２９个样品进行卡那霉素抗性试验显示，抗性最高的可超过１０００μｇ／ｍＬ这表明来自环状芽胞杆菌的某些基因启动子能在大肠杆菌中十分有效地启动基因表达，选取两个最大的克隆ＤＮＡ片段ＢＣ３和ＢＣ６作为探针与Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓｃ－２．总ＤＮＡ作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，均获得杂交带。斑点杂交结果表明，这两个ＤＮＡ片段来自不同的基因启动子。对ＢＣ６和ＢＣ３分别进行了限制酶谱分析，并绘制了限制酶图。     

基因枪转化籼稻的影响因素

将含有ｇｕｓＡ基因的质粒ｐＡｃｔ１－Ｄ包裹在钨粉上轰击籼稻初生愈伤组织,通过检测ｇｕｓＡ基因在籼稻细胞中的瞬间表达情况,对影响基因枪法转化效率的因素进行了研究．这些因素包括微粒加速装置参数、微粒参数、生物参数及其它参数．实验表明,在合适的转化条件下,籼稻品种青风占１２、穗优占的最高转化效率分别为４３９,９１５蓝点／皿     

犬c-yes原癌基因

利用Ｓｏｕｔｈｅｎ ｂｌｏｔ和ＤＮＡ碱基序列分析技术，对正常犬ｃ－ｙｅｓ原癌基因的颁布规律及ｃ－ｙｅｓ ｃＤＮＡ的结构进行了分析。结果表明。犬体细胞染色质中ｃ－ｙｅｓ基因均一分布，ｃ－ｙｅｓ ｃＤＮＡ开放阅读框架有５３９个氨基酸组成，分子量为６０，３６８Ｄａ，与人和鸡ｐ６１＾ｃ－ｙｅｓ同源性分别为９５．９％和９０．４％。该产物具有ｓｒｃ（ＳＨ）３，ＳＨ２同源区和酷氨酸激酶序列，该序列与人和鸡的同源     

多能硫杆菌RubisCO基因（rbcL－rbcS）的克隆及限制性内切酶图谱分析

以光合细菌圆球状红杆菌Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒｓｐｈａｅｒｏｉｏｄｅｓ的ｒｂｃＬ－ｒｂｃＳ基因为探针，与多能硫杆菌（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓｖｅｒｓｕｔｕｓ）染色体ＤＮＡ酶切谱带进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，检测到了ｒｂｃＬ－ｒｂｃＳ基因的同源序列，又以ｐＵＣ９为载体，克隆了Ｔ．ｖｅｒｓｕｔｕｓ染色体ＤＮＡＰｓｔＩ酶切片段，构建成Ｔ．ｖｅｒｓｕｔｕｓ基因文库，并从这个基因文库中筛选到了含有ＲｕｂｉｓＣＯ基因的重组质粒，将其命名为ｐＳＤＬＳ－１０，进一步对ｐＳＤＬＳ－１０进行了限制性酶切分析，作出了ｐＳＤＬＳ－１０限制性内切酶图谱     

中国人群DMD基因含外显子片段的限制性带型和RFLPs研究（Ⅰ）：Bgl…

采用ＤＭＤ基因的全长ｃＤＮＡ（１４ｋｂ）为杂交探针，分析了中国人群ＤＭＤ基因含外显子片（ｅｘｏｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｆｒａｇｍｅｎｔ）的ＢｇｌⅡ限制性片段和ＲＦＬＰｓ。新揭示出四个ＢｇｌⅡ片段，ＤＭＤ基因全长范围内含外显子的ＢｇｌⅡ限制性片段总数至少为５９个，这为制作ＤＭＤ基因的ＢｇｌⅡ部分限制图奠定了重要基础；另分析了四个ＢｇｌⅡＲＦＬＰｓ在中国人群中的等位频率，在ｃＤＮＡ２ｂ－３，ｃＤＮＡ     

人锰超氧化物歧化酶cDNA基因的克隆

利用人胚胎肝组织提取总ＲＮＡ,从总ＲＮＡ 中分离纯化出ｍ ＲＮＡ,经逆转录得到ｃＤＮＡ 第一条链,并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物,进行ＰＣＲ 合成人锰超氧化物歧化酶ｃＤＮＡ 基因,将所得ｃＤＮＡ 克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ 上,转化大肠杆菌ＤＨ５α细胞,进行诱导表达筛选,将筛选的克隆进行ｃＤＮＡ 全序列测定     

家兔基因文库的建立

根据鸟枪法克隆基因的原则，建立了家兔总ＤＮＡ文库。为适应同位素标记探针法克隆筛选方法，建立了以人噬菌体为载体的文库。每个重组子携家兔基因组ＤＮＡ平均２０ｋｂ，共获重组噬菌体达１０＾６。以人生长激素ｃＤＮＡ为探针，采用噬菌斑原位杂交、斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交等操作，对以噬菌体为载体的文库进行了筛选和有效性验证。结果表明：（１）人生长激素与兔生长激素的ＤＮＡ存在相当的同源性，以人生长激素ｃＤＮＡ     

MDVRispens株B抗的基因的酶切及序列分析

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株接种原代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,待出现８０％以上细胞病变后收获,提取细胞和病毒的总ＤＮＡ,以此为模板,根据Ｂ抗原基因核苷酸序列设计一对引物,通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出一条约２．８５ｋ的特异性条带,双酶消化后克隆至质粒ｐＵＣ１９,酶切分析表明该病毒的Ｂ抗原基因上ＨｉｎｄⅡ、ＥｃｏＲⅤ、ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ的酶切位点分布与ＲＢ１Ｂ株、ＧＡ株的     

寄主植物对黄曲条跳甲毒死蜱敏感性及相关酶活性的影响

利用上海青、菜心、山西白、甘蓝、萝卜等5种不同寄主植物饲养黄曲条跳甲后,测定寄主植物对黄曲条跳甲毒死蜱敏感性及相关酶活性的影响。结果表明,黄曲条跳甲取食不同寄主植物后对毒死蜱的药剂敏感性产生了不同程度的变化。不同的寄主植物种类对黄曲条跳甲成虫的总酯酶、羧酸酯酯活性存较大的影响,取食不同寄主植物的时间长短变化亦会造成影响。不同寄主对黄曲条跳甲成虫的乙酰胆碱酯酶活性也存在一定的影响,但是影响效应不受取食时间长短的影响。     

鲁白15对土壤中重金属铅的吸收及其生理生化指标SOD、POD变化的研究

通过盆栽实验研究了在不同浓度的Pb2 处理下,加入土壤后对鲁白15吸收Pb2 的影响。结果表明: 随着土壤中Pb2 浓度的增高,鲁白15地上部分和根系含铅量也增高。当Pb2 浓度达1 000 mg/kg时其含铅量达最大值,而且对其外观毒性效应影响不很显著。因此鲁白15对铅有较好的耐性,能较好地适应在受铅污染的土壤中生长。同时研究了在不同Pb2 浓度作用下,其POD、SOD的活性和受害生成物丙二醛的含量变化。     

入侵植物牛膝菊对白菜、萝卜、生菜、油菜种子和幼苗的化感作用

测定了牛膝菊茎叶浸提液对白菜、萝卜、生菜和油菜等4种蔬菜种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,牛膝菊浸提液对萝卜和油菜种子萌发与幼苗生长具有比较明显的抑制作用,其中质量浓度为80g／L的牛膝菊浸提液抑制效应最强;对生菜种子的萌发和幼苗的生长总体上是10g／L和20g／L两个低质量浓度浸提液有促进作用,40g／L和80g/L两个高质量浓度浸提液具有抑制作用;对白菜种子的萌发和幼苗的生长总体上是呈不规律的促进作用,其中对苗高的促进作用4个浸提液浓度处理都达到了极显著水平。     

南美蟛蜞菊和蟛蜞菊化感作用的比较研究

采用培养皿滤纸法比较了南美蟛蜞菊（Wedelia trilobata (L.) Hitchc.）和蟛蜞菊（W. chinensis (Osbeck.) Merr.）水浸提液对萝卜（Daucus carota L.）和菜心（Brassica parachinensis Bailey）种子萌发和幼苗生长的化感作用. 结果表明:随着南美蟛蜞菊和蟛蜞菊水浸提液浓度的升高,萝卜和菜心的种子最大发芽率逐渐降低;相同浓度下,南美蟛蜞菊水浸提液对植物种子发芽势、发芽率和发芽指数的抑制作用小于蟛蜞菊;南美蟛蜞菊和蟛蜞菊对植物幼苗的生长影响表现为低促高抑的趋势,其中蟛蜞菊对受试植物的化感抑制作用较南美蟛蜞菊更强.     

PK菌肥的菌种筛选及应用研究

从本地土壤中筛选出二株具有解磷，解钾能力强的菌种，均为芽孢杆菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）。它们可将壤中及化肥中不溶解的磷，钾养分，且对碱性环境和本地土壤有较高的适应性。用此菌种制备成ＰＫ菌肥，对早春结球甘兰（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｐｅｋｉｎｅｎｓｉｓ）生长效应进行了研究，结果表明，施用此菌肥与二铵和空白对照相比，其产量分别增加８．６６％和１５．５４％，产值提高３５．４８％和４６．６７％。     

油菜单株总DNA的快速制备

通过改进匀浆过程确定了适合同时提取多个１００ｍｇ左右植物材料总ＤＮＡ的实验程序,制备的总ＤＮＡ经测定紫外吸收曲线,限制酶作用和ＲＡＰＤ扩增,证明完全符合分子生物学实验的基本要求。     

Cytogenetics of intergeneric hybrids between Brassica species and Orychophragmus violaceus

In the sexual intergeneric hybrids between the cultivated Brassica species and Orychophragmus violaceus, both complete separation and partial separation of the parental genomes were found to occur during mitosis and meiosis under genetic control. The cytogenetics of these hybrids was species-specific for Brassica parents. The different chromosome behavior of hybrids with three Brassica diploids ( B. campestris , B. nigra and B. oleracea ) might contribute to the different cytogenetics of hybrids with three tetraploids ( B. napus, B. juncea and B. carinata). Owing to the parental genome separation, Brassica homozygous plants and aneuploids with various chromosome constitutions were identifiable in the progenies of these hybrids, which were valuable for the study of the structure and evolution of Brassica genome and for the breeding of Brassica crops.     

不结球白菜SSR引物的高效开发及其通用性研究

利用改进的ISSR-PCR分离不结球白菜基因组微卫星,进行两步PCR,分别设计出SSR两端引物IP2和IP3（即SSR引物对）,SSR引物产率为12%,明显高于传统方法.不结球白菜SSR序列以（GA）n为主,占70%.将69对SSR引物用于芸苔属其它8种作物的扩增,97%引物有显著扩增,扩增率最高的为四倍体白菜和甘蓝（85.5%）,最低的为青花菜（49.3%）.10对为通用引物,在所检测的8种作物中片段大小一致,其余的扩增片段和数目差异较大,表现出较为丰富的多态性.尤其是在C基因组的甘蓝和花椰菜上,最多可检测到5个位点,表明运用lSSR-PCR开发出的引物多态性较高.     

甘蓝-白芥单体异附加系自交后代的GISH分析

将甘蓝-白芥单体异附加系自交,获得了其自交后代.利用基因组原位杂交(genomicin situhy-bridization,GISH),结合双色荧光原位杂交(dual-colour fluorescencein situhybridization,dcFISH)技术,从这些自交后代中鉴定出了纯合的甘蓝-白芥二体异附加系植株.GISH分析结果表明,甘蓝-白芥二体异附加系有丝分裂中期具有18条甘蓝染色体及2条白芥染色体,减数分裂中期I表现为9个C染色体二价体及1个S染色体二价体,减数分裂后期I会出现落后的1对S染色体,有时落后的1对S染色体形成染色体桥.     

土荆皮水提液对4种蔬菜种子化感作用研究

为研究土荆皮系松科植物金钱松水提液对小白菜、生菜、五月青和绿豆4种植物种子的化感作用,通过生物测定方法,分析不同浓度的土荆皮水提液对4种受体种子的萌发、胚根生长及幼苗生长的化感作用.实验结果表明：不同浓度的土荆皮水提液对4种受体植物种子的萌发、胚根生长和幼苗生长均表现出明显的抑制作用;而且随着土荆皮水提液浓度的升高,其...