甘薯糖蛋白的分离、纯化和结构分析

采用二乙基氨基乙基52和葡聚糖凝胶G100柱层析法,从甘薯中分离纯化甘薯糖蛋白,并对其进行结构分析．用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验纯度和分子质量;根据β-消除反应判断糖肽键的连接方式;利用气相色谱法分析单糖组成;通过红外光谱推断糖苷键类型．研究结果表明,甘薯糖蛋白是以共价键连接而成的结合蛋白,呈白色粉末状,易溶于水,分子质量约为62ku,属O-连接方式,含有β-糖苷键和典型酰胺羰基结构,蛋白质含量为12．01％,糖链部分含有岩藻糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖．     

长白山林蛙输卵管糖蛋白的分离鉴定

以长白山林蛙为研究对象, 对其输卵管糖蛋白进行提取分离及鉴定. 长白山林蛙输卵管冲洗液经饱和硫酸铵沉淀, DEAE-Cellulose 52离子交换柱, Sephadex G-100凝胶柱层析纯化, 得到蛋白质和糖的重合峰, 经透析、 冷冻干燥得长白山林蛙输卵管糖蛋白纯品OGP-Ⅰ. SDS PAGE电泳实验结果表明, OGP-Ⅰ是分子量为116 000的均一带. 对其分别进行蛋白和糖染色, 同一位置都出现单一条带; 紫外全扫描OGP-Ⅰ有多糖特征峰和蛋白吸收峰, 表明OGP-Ⅰ是糖蛋白纯品.     

大鼠Fcε3-4基因克隆及原核表达

为了获得重组Fcε3-4蛋白,从变态反应性哮喘大鼠脾组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法克隆大鼠Fcε3-4基因,构建成原核表达载体pET17b-Fcε3-4,并转化大肠杆菌进行诱导表达,Fcε3-4蛋白主要以包涵体形式存在.经Ni-NAT亲和层析柱对尿素溶解的Fcε3-4蛋白进行了纯化,并利用降低尿素梯度的方法柱上对纯化蛋白进行了复性.经Western Blotting和ELISA鉴定,Fcε3-4蛋白具有Fcε的免疫特异性,能被抗大鼠Fcε抗体特异性识别,为下一步研究该蛋白奠定了基础.     

粉尘螨过敏原脂肪酶的表达、纯化及生物信息学分析

为克隆原核表达并纯化出粉尘螨过敏原脂肪酶蛋白,鉴定其免疫学活性,并分析其分子特征.通过重组合成粉尘螨新过敏原脂肪酶基因,与p ET-28a载体连接后转化大肠埃希菌E.coli Top10,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组新过敏原脂肪酶蛋白;经镍柱亲和层析纯化出粉尘螨重组脂肪酶蛋白,用Western Blot、ELISA方法检测其免疫原性.用生物信息学软件预测其理化性质、二级结构,并构建分子进化树.成功表达纯化出高纯度的粉尘螨重组脂肪酶蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示表达重组产物分子质量约为40 k Da,与理论值一致,纯化后的表达产物经Western blot印迹检测有明显条带显示.信息学分析显示蛋白二级结构由α螺旋(16.38%)、延伸主链(18.93%)、无规则卷曲(64.69%)组成.成功原核表达出粉尘螨过敏原脂肪酶蛋白,并纯化获得较高纯度及较强免疫学活性的重组脂肪酶蛋白,为尘螨过敏性疾病的特异性诊断和免疫治疗奠定理论基础.     

抗肺炎链球菌工程多肽的制备研究

目的:制备和纯化抗肺炎链球茵工程多肽(Ph-SP).方法:将重组质粒转化入工程茵TGl表达工程多肽,经透析、离子交换柱纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白,微平板法测定蛋白浓度.结果:经透析、离子交换柱纯化后可获得较为单一的目的蛋白,蛋白浓度为0.18mg/ml.结论:本文的操作流程可以获得相对单一的目的蛋白.     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的基本性质研究

经硫酸铵分级沉淀、SP-Sepharose FF离子交换层析、Blue Sepharose CL-6B亲和层析和Superdex 75分子筛层析从苦瓜籽中纯化出苦瓜核糖体失活蛋白.纯化的蛋白经IEF、梯度PAGE、SDS-PAGE和Periodate-Schiff分析均为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带.根据SDS-PAGE计算其相对分子量为3.0×104 Da,IEF显示其pI为9.0.N端测序结果为Asp-Val-Ser-Phe-Arg.采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)和圆二色谱(CD谱)对纯化RI     

基于青藤碱的抗风湿性关节炎分子构建的研究进展

利用PCR技术扩增出BmDNV-1结构蛋白vp4基因,并将该基因与原核表达载体pMALc2X进行连接,转化大肠杆菌DH10B.获得重组质粒经IPTG诱导表达得到大小为96 000的融合蛋白,融合蛋白经Amylose柱纯化,使用其免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体.从而为进一步研究该病毒结构蛋白基因的转录和翻译机制提供可靠的工具.     

天门冬糖蛋白的分离纯化及其糖肽腱的研究

冷水浸提中西药天门冬，提取物经丙酮分级，得到ＡＧ－ａ，ＡＧ′－ｂ和ＡＧ′－Ｃ三个级份，ＡＧ－ｃ用ＤＥＡＥ－纤维素柱纯化，得到水洗脱级份ＡＧ－Ｗ和０．５ＮＮａＣｌ洗脱级份ＡＧ－ｃ。凝胶柱层和醋酸纤维薄膜电泳，均表明ＡＧ－ｃ为均一性糖蛋白。红外光谱显示，所有的天门科冬糖蛋白级份均含有乙酰基因，β－消去反应检测，ＡＧ－ｃ中糖和蛋白质间的连接键为Ｏ－型糖肽腱。     

重组TRAIL_((114-281))片段的表达纯化及抗肿瘤活性分析

本文主要探讨人TRIAL_((114-281))对肠癌和肺癌细胞增殖的影响.利用大肠杆菌原核分泌表达TRAIL_((114-281))片段,Ni-NTA亲和层析柱对表达蛋白进行纯化,纯化的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,通过CCK-8实验检测TRAIL片段对SW480、DLD1、A549肿瘤细胞增殖的影响.实验结果显示经SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化的蛋白为目的蛋白His-TRAIL_((114-281)),且纯度在90%以上.CCK-8结果显示,在一定浓度下,TRAIL_((114-281))片段能明显抑制SW480、DLD1、A549肿瘤细胞的增殖,抑制率呈浓度依赖性,且对各细胞的抑制作用效果不同.本研究证实TRIAL_((114-281))片段在抗肠癌及非小细胞肺癌细胞方面具有一定的应用前景.     

牛舌菌(Fistulina hepatica)水溶性多糖FHP-2P的分离与理化特征

牛舌菌(Fistulinahepatica)子实体经热水抽提,乙醇沉淀,蛋白酶法和Sevag法去蛋白后得粗多糖FHP.FHP经DEAE-纤维素和SephadexG-200柱进一步纯化得到牛舌菌多糖纯品FHP-2P.经测定该多糖为均一组分,相对分子质量为7.6×104.红外扫描呈现出典型的多糖吸收峰,并含有β-型糖苷连接键;紫外扫描无核酸和蛋白质的特征吸收峰.纸层析和气相色谱分析结果表明FHP-2P的单糖组成为D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-木糖,其摩尔比为13.9∶2.85∶3.25∶0.48.