中华剑角蝗肠道共生真菌的分离鉴定及抑菌活性筛选

为了解中华剑角蝗肠道共生真菌的种类,并通过共生真菌次生代谢产物抑菌活性筛选,为蝗虫共生真菌的次生代谢产物开发利用提供参考.将采自湖北神农架的中华剑角蝗通过表面消毒后对其肠道共生菌分离纯化,运用rDNA-ITS序列分析进行鉴定,NJ法构建系统发育树分析其亲缘关系.以魔芋软腐菌、水稻白叶枯菌和猕猴桃溃疡菌为测试菌株,用滤纸片法对共生真菌的发酵液进行了抗菌活性筛选.结果显示,从中华剑角蝗的肠道中分离得到18株共生真菌,分属6科8属,其中青霉菌属和镰刀菌属是优势菌群,分别占总分离株的33.33%和27.78%;系统发育分析显示,18株共生真菌具有较丰富的种类多样性;抗菌实验结果表明,18株共生真菌有4株菌的代谢产物至少对1种测试病原菌有抑菌活性,占分离株的22.22%,其中有2株菌的次生代谢产物对魔芋软腐菌有较强的抑制作用.     

内生真菌Penicillium sp.生物碱类次级代谢产物研究

在寻找神农架植物内生真菌活性次级代谢产物的过程中,从七叶一枝花叶片内生真菌Penicillium sp.(NO.64)的马铃薯葡萄糖液体培养(PDB)中分离得到三个生物碱类化合物.通过NMR,MS等波谱学方法鉴定为嘧菌酯(azoxystrobin)1和2及一个线性二肽类衍生物3,3个化合物均为第一次从自然界中分离得到,同时也是第一次从植物内生真菌中获得.     

湖北产蜘蛛抱蛋质量标准研究

对湖北产蜘蛛抱蛋药材(阴干根茎)的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、薄层色谱、性状、形态、生境、显微结构、化学成分进行定性定量的研究,为湖北产蜘蛛抱蛋质量标准的制定提供一定的依据.常规检查项目按2010年版《中华人民共和国药典》(一部)ⅨH水分测定法中的烘干法、附录ⅨK灰分测定法、附录ⅩA浸出物测定法以及附录ⅥB薄层色谱法进行检查,植物形态、显微结构和药材性状通过常规的显微镜技术和直接观察进行鉴别,其生境通过文献调研和实地考察进行归纳总结,利用化学显色反应对其主要化学成分进行鉴别.结果表明,10批蜘蛛抱蛋样品测定的平均值为:水分12.64%、总灰分6.4%、酸不溶性灰分0.7%、醇溶性浸出物4.8%、薄层色谱显色良好,斑点清晰;性状特点鲜明,容易区分,显微结构给出了在各个生长周期普遍存在的特征性结构,给出了本属植物主要的形态特点;通过鉴别,本品主要化学成分为甾体皂苷,同时对个别检查的限度项提出了建议.研究结果为湖北产蜘蛛抱蛋质量标准的制定提供了一定的依据.     

菊三七根中化合物seneciphyllicacid和senecinicacid的含量测定

目的：采用HPLC法测定菊三七根部seneciphyllicacid和senecinicacid的含量．方法：建立HPLC法测定菊三七根部seneciphyllicacid和senecinicacid的含量．色谱柱为AcclaimC18色谱柱（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为甲醇-0．1％甲酸水（40：60,v·v-1）,流速为1．0mL·min-1,柱温为30℃,紫外检测波长为220nm．线性范围：Seneciphyllicacid为0．1～0．8mg·mL-1（相关系数r=0．9997）;senecinicacid为0．1～1．5mg·mL。（相关系数r=0．9998）．结果：测得菊三七根部seneciphyllicacid和senecinicacid的含量分别为2．9613mg·g-1、0．9542mg·g-1;RSD分别为1．34％、1．28％;平均回收率为98．84％、99．16％,RSD为1．94％、1．51％．结论：该方法快速、简便、准确度高,可为开发利用菊三七提供研究基础．     

菊三七根部主要化学成分研究

目的：研究菊三七根部主要化学成分,为菊三七质量标准的制定提供理论依据与参考．方法;运用正相层析柱色谱和制备高效液相色谱对其化学成分进行分离,通过MS和NMR技术进行结构鉴定。结果：从菊三七的根部分离得到4个主要化合物,分别为千里光菲灵碱（Seneciphylline,1）、千里光宁碱（Senecionine,2）、Seneciphyllicacid（3）、Senecinicacid（4）．结论：化合物4首次从菊三七中分离得到．     

共培养杜英叶片内生菌次级代谢产物研究

采用共培养方法在室温下以固体方式培养杜英内生菌,培养40d,以乙酸乙酯萃取3次,其浸提物经过正相硅胶柱层析,Sephadex LH-20,半制备液相等方法纯化获得7个次级代谢产物,其结构运用NMR,MS等光谱学方法鉴定,分别为daldinone A(1),alternariol(2),4-methylalternariol(3),alternuene(4),(E)-3-benzylidene-2-methylhexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione(5),(Z)-3-benzylidene-2-methylhexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione(6),甘油三醋酸酯(7).化合物1-7是首次从杜英的内生菌中获得,化合物1具有抗菌活性,化合物6首次从自然界中分离得到.     

改良的高效液相色谱法测定酵母细胞中谷胱甘肽含量

针对以往高效液相色谱法测定谷胱甘肽保留时间过短、易干扰的问题,探索了缓冲盐pH值对还原型和氧化型谷胱甘肽保留时间的影响,建立了一种改良的酵母细胞中谷胱甘肽高效液相色谱分析方法.采用HPLC对酵母粗提物分析,色谱柱为Venusil XBP C18(5μm×10×250mm),甲醇/水为洗脱体系(其中水相中添加庚烷磺酸钠、磷酸-二氢钾,并用磷酸调节pH值),流速1mL/min,柱温25℃,检测波长为203nm.结果表明,还原型谷胱甘肽在0.25~4.00mg/mL质量浓度范围内线性关系良好(R=0.999 7),平均回收率100.49%,RSD为0.52%;氧化型谷胱甘肽在0.25~4.00mg/mL质量浓度范围内线性关系良好(R=0.999 5),平均回收率97.49%,RSD为1.2%.本方法快速简便、灵敏度高,特别是还原型谷胱甘肽保留时间延长、实现与杂峰有效分离.     

杜英内生真菌Aspergillus versicolor倍半萜类次级代谢产物及(8S)-hydroxysydonic acid的含量测定研究

从植物杜英的叶片中分离得到一株内生真菌,经分子生物学方法鉴定为Aspergillus versicolor,在实验室中以大米麸皮培养基固体培养,40 d后经乙酸乙酯萃取,浓缩得浸膏,经正相硅胶柱,Sephadex LH-20及半制备高效液相色谱分离得到8个次级代谢产物,经核磁共振,质谱等光谱学方法鉴定其结构,分别为(-)-hydroxysydonic acid(1),12-acetoxysydonic acid (2),10-hydroxysydowic acid (3), sydowic acid(4),sydonic acid(5),(S)-(+)-11-dehydrosydonic acid (6),sydonol 1b (7),(R)-hydroxyboivinianic acid (8).化合物1-8中,化合物1的量最大,通过HPLC测定了(-)-hydroxysydonic acid(1)的含量,在固体培养条件下其含量达11.4%.为进一步的开发没药烷类倍半萜类化合物的应用提供了物质保障.     

山蛩虫(Spirobolus bungii Brandt)共生菌SQ12的次生代谢产物研究

动植物内生菌的次级代谢产物往往种类繁多、骨架新颖、生物活性多样,已成为发现新的生物活性物质的重要来源.本文以山蛩虫(Spirobolus bungii Brandt)共生菌SQ12为研究对象,通过液体发酵培养获得次生代谢产物,利用高效薄层色谱和高效液相色谱技术分离出5个化合物,借助ESIMS和NMR等技术鉴定为:S-dehydrocurvularin(1)、11-α-methoxycurvularin(2)、11-β-methoxycurvularin(3)、11-α-hydroxycurvularin(4)、11-β-hydroxycurvularin(5).     

高产PUFAs多形单毛孢菌株的获取及碳源选择

从土壤中筛选出一株产多不饱和脂肪酸的真菌,经鉴定为多形单毛孢,该菌株能产多种不饱和脂肪酸.碳源优化选择表明葡萄糖和蔗糖复合碳源为最佳碳源,当葡萄糖和蔗糖以质量比9∶1复合,添加总糖量为100 g/L时,培养10 d后,生物量达到15.45 g/L,产油率达到77.1%,总多不饱和脂肪酸产量达到8450.1mg/L.其中,十八碳三烯酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸产量分别能达到640.9,1947.3,333.4和292.3 mg/L.