玉米自交系P9-10遗传转化体系的建立

在Ｎ６培养基中添加１０＾－４ｍｏｌ．Ｌ＾－１ＡｇＮＯ３可促进玉米Ｐ９－１０自交系幼胚诱导产生Ｉ型胚性愈伤组织,把这些胚性愈伤组织经高渗处理后作为受体,用基因枪转化含Ｂｔ基因的ｐＭＧ６质粒,通过选择压递增式筛选,得到了１４个抗性克隆。抗性克隆３种不同的培养基中共诱导出１０个胚状体,经分化得到１０个再生植株累ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析证实有８个再生植株的基因组中整合有Ｂｔ基因。ＥＬＩＳＡ分析结果     

小麦黄花叶病毒72ku蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备

采用逆转录－ＰＣＲ方法，扩增获得小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）ＲＮＡ２上的７２ｋｕ蛋白基因，将其克隆到ｐＥＴ３０ａ（＋）上，构建了该基因的原核表达载体ｐＥＴＰ７２。ＳＤＳ－ＲＡＧＥ分析结果显示，经ＩＰＴＧ诱导，７２ｋｕ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶作为抗原，免疫家兔，首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２７２ｋｕ蛋白特异性抗血清。     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的抑制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子对人类白细胞抗原Ⅱ类分子表达的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到ＣⅡＴＡ基因ｃＤＮＡ５’端片段，构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体ｐｃＤＮＡ－Ⅱ，基因转移ＨＬＡⅡ类分子诱导型表达的ＨｅＬａ细胞，ＩＦＮ－γ诱导，发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降，而ＨＬＡ Ｉ类分子的表达不受影响。实验     

兔防御素NP-1基因在转基因烟草中的表达及其对烟草青枯病的抗性研究

从兔子肝脏细胞中扩增到防御素ＮＰ－１成熟的编码序列,长约２００ｂｐ。将此片段插入到切除了ＧＵＳ编码序列的ｐＢＩ１２１质粒载体中,构建成植物表达载体ＰＢＩＣ－３５ＳＮＰ１。     

稻瘟病病原物诱导启动子的构建及表达

利用ＰＣＲ技术从小麦和马铃薯中分别扩增并克隆了病原诱导性谷胱甘肽－Ｓ－转移酶基因ＧｓｔＡｌ和Ｇｓｔｌ启动子片段，将它们分别与水稻肌动蛋白基因（Ａｃｔｌ）核心启动子序列、５’端非翻译前导序列以及ＧＵＳ基因融合构建出植物载体ｐＷＭＩＧ－５０和ｐＰＭＩＧ－５０，然后转化水稻，并对嵌合启动子的诱导活性进行了分析。结果表明：（１）在转基因水稻细胞中嵌合启动子可受稻瘟病病原物的诱导；（２）水稻Ａｃｔｌ第一内含     

人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．     

Pfu酶基因的克隆、表达、纯化及长距离PCR的研究

用ＰＣＲ方法从Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ的总ＮＤＡ扩增出了含有Ｐｆｕ ＤＮＡ ｐｏｌＡ基因的２．３ｋｂ片段,并将该基因克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体。用ＮｃｏＩ和ＸｈｏＩ对重组质粒ｐＴ－ｐｆｕ进行了酶切。并将ｐｆｕ ｐｏｌＡ基因捶 入表达载体ｐＥＴ－３ｄ－Ｘ。     

用dhfr非缺陷型细胞高效表达EPO基因的研究

用我们所克隆的促红细胞生成素基因组基因，构建了表达载体ｐＲＳＶ／ＥＰＯ。用脂质体法转染ＣＨＯ－Ｋ１２细胞，在４００μｇ／ｍＬ的Ｇ４１８浓度下筛选到了稳定表达ＥＰＯ的细胞株，表达量约为每天每１０＾６细胞１６０ＩＵ，在此基础上又构建了带有潮霉素Ｂ抗性的二氢叶酸还原酶基因表达载体ｐＨＹ／ｄｈｆｒ，再次这一表达载体用脂质体方法导入Ｃ１０细胞中，经２００μｇ／ｍＬ的潮霉素Ｂ筛选，获得了部分潮霉素Ｂ抗性的细胞     

转导GST-pi基因表达抑制甲基丙烯酸环氧丙酯的致癌作用

环境中的化学致癌物是引发癌症的主要原因，谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）ｐｉ在防止各种内、外源的对细胞的损害方面起关键性作用，ＧＳＴ－ｐｉ基因与反转录病毒载体（ｐＸＴ１）重组后转染３Ｔ３细胞，使该基因在３Ｔ３细胞中整合和表达，研究发现：ＧＳＴ－ｐｉ的表达可以防止化学致癌物甲基丙烯酸环氧丙酯（ＧＭＡ）诱导的细胞恶性转化，此结果为进一步探讨ＧＳＴ－ｐｉ在癌症预防领域的作用提供了科学依据。     

一个猪免疫球蛋白 IgG H 链基因的克隆、序列分析及表达

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从猪脾脏中分离到于段１４２５ｂｐ的ＤＮＡ片段，该片段编码免疫球蛋白基因。经全序列分析证明此片段与前人报道的序列有较高同源性，其Ｃ区属于猪Ｉｇγ链基因亚类３。用ＥｃｏＲＩ和ＮｓｉＩ切点将该片段切焉插入ｐＥＴ－３ｂ（ＮＳＥＢ）（－＿中，表达出约５２ｋｕ的蛋白质，表达量约为２１％。     

P15INK4b/MTS2对人肝癌细胞增殖的影响及其机理的初步分析

利用自行构建的稳定高表达Ｐ１５ＩＮＫ４Ｂ的人肝癌细胞，研究了抑癌基因Ｐ１５在细胞增殖中的作用．首先将抑癌基因 Ｐ１５的 ｃＤＮＡ构建到高效真核表达的质粒载体 ｐＸＪ４１－ｎｅｏ中的 ＥｃｏＲＩ／ＸｈｏＩ位点，构建成 Ｐ１５真核表达质粒 ｐＸＪＰ１５．通过脂质体法将 ｐＸＪＰ１５质粒转染人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１，进一步用 Ｇ－４１８筛选，获得了稳定高表达Ｐ１５的人肝癌细胞模型ＳＨＴ及相应的表达空载体的对照细胞模型ＳＶＸＪ．通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ，Ｗｅｓｔｅｒｎ分子杂交分析，表明ＳＨＴ细胞中Ｐ１５基因表达和蛋白水平都明显高于对照组细胞，证实成功地建立了Ｐ１５高表达的人肝癌细胞模型，与对照组相比，Ｐ１５高表达的ＳＨＴ１细胞的增殖受到抑制，流式细胞光度术和ＭＩ值测定表明Ｐ１５阻抑细胞由Ｇ１期向Ｓ期和由Ｇ２期向Ｍ期的转换．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析结果表明，癌基因ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ的蛋白水平表达下降可能是Ｐ１５抑制细胞增殖的分子机理之一。     

转基因马铃薯中病原诱导GO基因的表达及其对晚疫病的抗性

利用ＰＣＲ技术从黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）中扩增并克隆了葡萄糖氧化酶（ｇｌｕｃｏｓｅ ｏｘｉｄａｓｅ，简称ＧＯ）基因，并将马铃薯病原诱导型启动子（Ｐｒｐ１－１基因启动子）与其融合构建了植物表达载体ｐＣＡＭＧＯ。经农杆菌介导转化获得了转基因植株，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示葡萄糖氧化酶基因整合进马铃薯基因组。该基因的表达及所引起的Ｈ２Ｏ２的生成由淀粉－ＫＩ的显色反应得到证实。用马铃薯晚     

修正RNA的错误剪接提高转基因表达水平

建立了ＷＡＰ基因调控序列指导的人Ｇ－ＣＳＦ乳腺表达的转基因小鼠,在检测出转基因低表达的基础上,采用ＲＴ－ＰＣＲ从转基因小鼠乳腺ＲＮＡ中获得人Ｇ－ＣＳＦ基因,序列分析表明基因缺失第４外显子,与人Ｇ－ＣＳＦ基因组基因比较,缺失部分含有内含子剪接的供体和受体位点,推断Ｇ－ＣＳＦ的第３和第４内含子亦缺水。重新构建了转基因注射构件,其中删除了Ｇ－ＳＦ第３和第４内含子,用其所建立的转基因小鼠,其乳腺表达的Ｇ－     

二价稀土配合物/酚钠体系催化的丙烯腈高效聚合

合成了（ＡｒＯ）２Ｓｍ·４ＴＨＦ，（ＡｒＯ）２Ｙｂ·３ＴＨＦ，（ＡｒＯ）２Ｅｕ·３ＴＨＦ（ＡｒＯ＝２，６－二叔丁基对甲酚基）和（ＢｕｔＣｐ）２Ｓｍ·２ＴＨＦ ４种二价稀土配合物，研究了它们催化丙烯腈聚合的活性，结果表明中心金属对催化剂的活性有明显影响．发现添加一定量的２，６－二叔丁基对甲基酸钠、对叔丁基酸钠或甲萘酚钠可大大提高二价稀土配合物催化丙烯腈聚合的活性，这些添加剂的用量对催化活性有很大的影响，但添加剂的加入对所得聚丙烯脆的立构规整性没有明显影响．     

细胞外钙调素对转基因烟草悬浮细胞rbcS- GUS基因表达的促进作用

以转ｒｂｃＳ－ＧＵＳ报告基因的烟草悬浮培养细胞为材料，研究了细胞外钙调素对ｒｂｃＳ基因表达的影响，实验证实培养介质中钙调素浓度与ｒｂｃＳ－ＧＵＳ基因表达呈现一个在细胞培养初期较低、随后增高、然后再降低的动态变化；而且培养介质中钙调素浓度变化在前，ｒｂｃＳ－ＧＵＳ基因表达变化在后，介质中加入外源纯化钙调素可以促进ｒｂｃＳ－ＧＵＳ基因表达，而且这种促进作用具有浓度剂化在后，介质中加入外源纯化钙调素可以     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的仰制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子（ＣⅡＴＡ）对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ⅱ类分子表达的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到Ｃ Ⅱ ＴＡ基因ｃＤＮＡ ５＇端片段，构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体 ｐｃＤＮＡ－Ⅱ，基因转移 ＨＬＡ Ⅱ类分子诱导型表达的 ＨｅＬａ细胞．经 ＩＦＮ－γ诱导，发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降，而 ＨＬＡⅠ类分子的表达不受影响．实验证明 ＣⅡ ＴＡ反义 ＲＮＡ对 ＨＬＡ Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用，为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据．     

转甜菜碱醛脱氢酶基因烟草叶片中抗氧化酶活性增高

转甜菜碱醛脱氢酶（ＢＡＤＨ）基因烟草叶片超氧物歧化酶（ＳＯＤ）的活性比对照增加约３６％，过氧化氢酶（Ｃａｔ）和过氧化物酶（ＰＯＤ）活性分别提高约的６２％和８８％，定位于叶绿体中的抗坏血酸－谷胱甘肽途径的抗坏血酸过氧化物酶（ＡｓＡＰＯＤ），脱氢抗坏血酸还原酶（ＤＡｓＡＲ）和谷胱甘肽还原酶（ＧＲ）活性分别提高６７．７％，４７．９％和３８．８％，表明由ＳＯＤ催化阴离子自由基Ｏ２所产生的活性氧Ｈ２Ｏ２能被     

PKC对HeLa细胞G1/S期进程调控及其机理的研究

研究了ＰＫＣ活性变化对ＨｅＬａ细胞Ｇ１／Ｓ期进程的影响及其作用机理，结果表明：（１）ＨｅＬａ细胞Ｇ１期ＰＫＣ活性的变化影响其Ｇ１／Ｓ期进程，其中Ｇ１期ＰＫＣ活性升高促进Ｇ１／Ｓ期进程，而ＰＫＣ活性降低显著抑制Ｇ１／Ｓ期进程；（２）ＰＫＣ的刺激剂ＴＰＡ促进早期应答基因ｃ－ｍｙｃ与ｃ－ｊｕｎ的表达，ＰＫＣ的抑制剂ＧＦ－１０９２０３Ｘ抑制其表达；（３）ＨｅＬａ细胞Ｇ１／Ｓ期进程中，ＴＰＡ作用促进Ｇ１期Ｃ     

人HCUTA全长cDNA的克隆与原核表达

人ＨＣＵＴＡ是最近克隆的一个新的全长cＤＮＡ，编码蛋白可能参与人铜离子容受系统。 ＪＣＩＴＡ的全区用〗ＣＲ拉示后。克隆到ｐＥＴ２８ａ＋表达载体中，在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得了高效表达，表达的ＨＣＵＴＡ重组蛋白细菌总蛋白的２８．３％。ＨＣＵＴＡｃＤＮＡ的ＧｅｎＢａｎｋ接收号为ＡＦ１０６９４３。     

Ca α-Sialon成核的透射电子显微镜观察

对烧结到中间温度（１４５０℃）的高ｘ值Ｃａ α－Ｓｉａｌｏｎ组分（Ｃａ１．８Ｓｉ６．６Ａｌ５．４Ｏ１．８Ｎ１４．２）进行了透射电子显微镜观察。结果表明，绝大多数情况下，α－Ｓｉａｌｏｎ晶粒和邻近的α－Ｓｉ３Ｎ４起始原料之间无外延关系，仅发现少数α－Ｓｉａｌｏｎ晶粒在α－Ｓｉ３Ｎ４上的外延成核，进一步的能量色散谱（ＥＤＳ）分析表明，非外延成核的α－Ｓｉａｌｏｎ中Ｃａ的固溶量远高于外延成核的α－Ｓｉａ