HCO3 - 高亲和转运蛋白操纵子基因在聚球藻7942 CO2浓缩机制中功能的研究

蓝藻 Synechococcus sp.PCC7942 HCO3 - 高亲和转运蛋白操纵子基因 cmpABCD 是其CO2浓缩机制中的调控基因之一.本研究用携带潮霉素B磷酸转移酶基因(hygromycin B pho transferase, hpt) 筛选标记的同源双臂整合载体pUC-HATH转化蓝藻Synechococcus sp.PCC7942,以潮霉素B作为筛选试剂筛选出具潮霉素B抗性的转化藻,运用引物PCR方法证实潮霉素B磷酸转移酶基因表达盒通过质粒pUC-HATH的介导已定点插入蓝藻 Synechococcus sp.PCC7942 基因组中,成功地构建了具有潮霉素B抗性的cmpBCD 基因插入失活突变藻株.并最终通过比较野生藻Synechococcus sp.PCC7942 和突变藻Synechococcus sp.PCC7942 在不同 Na2CO3浓度的改良BG-11培养基中生长特性,探讨了HCO3 -高亲和转运蛋白操纵子 cmpABCD 基因失活对藻体生长的影响.     

蓝藻基因表达载体系统的构建和应用

蓝藻是一类具植物型放氧光合作物特性的原核生物。多数蓝藻富含营养物质,无毒,是表达外源目的基因的独特受体系统。因此,构建适用于蓝藻表达外源目的基因的载体系统,并用于表达药物活性肽基因,已成为当前蓝藻基因工程研究的热点之一。本课题组10多年来率先在国内开展蓝藻基因工程研究,从蓝藻Plectonema botyanum中分离得到了约1.5kb的小质粒,以此为出发质粒,构建了蓝藻穿梭质粒pPRS-1和穿梭质粒表达载体pPKE2;同时根据DNA片段同源重组的性质,构建了蓝藻Calothrix sp.PCC7601、Synechococcus sp.PCC7942的基因整合平台系统。在国家863项目经费资助下,利用构建的蓝藻质粒载体和基因整合平台系统,把人源胸腺素基因转入蓝藻Calothrix sp.PCC7601和Synechoccus sp.PCC7942,并能高效表达,首次获得了可直接口服的含人源胸腺素的转基因蓝藻,这对研究和开发基因工程口服药物具有重大的科学意义和经济、社会效益。     

增强草鱼免疫功能的复方中草药免疫增强剂筛选

选取920尾草鱼,平均体质量为(62.15±9.78)g,随机分成4个组,每组230尾鱼,其中1个对照组(投喂基础饲料),3个试验组(投喂含中草药免疫增强剂的饲料:基础饲料中分别添加20g/kg中草药免疫增强剂1(T1),2(T2)和3(T3)).每组分别在第0,7,14,21和28d采样测定免疫指标,饲养30d后进行人工感染试验.结果表明各试验组较对照组在吞噬细胞吞噬活力、血清溶菌活力、血清抗菌活力、血清超氧化物岐化酶(SOD)活力和血清过氧化物酶(POD)活力方面均显著升高(p<0.05).T1组、T2组和T3组抗多子小瓜虫感染的免疫保护率分别为0,100%±0.00%和42.50%±6.61%.T1组、T2组和T3组对注射嗜水气单胞菌的免疫保护率分别为15.37%±8.36%,78.43%±8.77%和63.06%±3.37%.研究表明在基础饲料中添加2%复方2可显著提高草鱼的免疫功能和抗病力(p<0.05),在3种试验复方中效果最佳,在生产中有应用价值.     

蓝藻Synechococcus elongatus PCC7 942荧光实时定量RT-PCR实验体系的优化

蓝藻(Synechococcu elongatus PCC 7942)是最简单的原核生物钟模式生物,研究其生物钟基因表达模式具有重要的科学意义.然而由于该蓝藻高质量RNA提取困难,目前应用荧光实时定量RT-PCR(qPCR)实验方案对其特定基因表达模式进行研究的报道较少.研究尝试通过对影响RNA提取质量的溶菌酶作用时间、起始细胞数量等因素,以及对影响qPCR反应特异性和重现性的c DNA模板浓度、引物浓度、引物退火温度等条件进行优化,初步建立了一套适用于S.elongatus PCC 7942的qPCR实验体系.结果表明震荡培养至OD750≈0.4时,取10 m L蓝藻细胞起始提取实验,使用3 mg/m L溶菌酶处理10 min后,再经试剂盒法提取总RNA的策略,RNA得率最高且质量最好.蓝藻的qPCR优化结果显示c DNA终质量浓度0.1μg/μL,引物终浓度4 pmol/L,并根据引物对Tm值调整退火温度是最佳反应条件.     

壳寡糖对三疣梭子蟹免疫力的影响

为研究壳寡糖对三疣梭子蟹免疫功能的影响,设置了含壳寡糖0.0、0.5、1.0、1.5和2.0g/kg(分别为T0、T1、T2、T3和T4组)的5组试验饲料饲喂三疣梭子蟹,分别在第10 d、20 d和30 d取血清进行酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、溶菌酶(LSZ)和过氧化物酶(POD)活性的测定,试验结束时测定血细胞的密度.结果显示,在基础饲料中添加适量的壳寡糖可以显著性提高ACP、T-SOD、LSZ、POD活力(P＜0.05),对PO和AKP活力促进效果不显著(P＞0.05).壳寡糖可以显著提高三疣梭子蟹血细胞密度(P＜0.05),对3种血细胞所占比例有一定的影响(P＞0.05).综合考虑,T2、T3组对三疣梭子蟹免疫促进效果较好,建议基础饲料中壳寡糖添加量为1.0～1.5g/kg.     

复方中草药对中华绒螯蟹免疫因子的影响

在基础饲料中添加6种中草药制剂煎液制成试验饲料,同时以基础饲料为对照,连续饲喂中华绒螯蟹30d,采集中华绒螯蟹血淋巴上清液测定其免疫指标活性.T检验结果表明,中草药添加饲料组蟹的噬菌活性与对照组存在显著差异(P<0.05);溶菌酶活性、酚氧化酶活性(PO)与对照组则差异极显著(P<0.01);抗菌酶活性、过氧化物酶活性(POD)差异不显著(P>0.05),但均值比对照饲料组高.说明该中草药制剂的添加能明显提高中华绒螯蟹的免疫水平.用中华绒螯蟹致病菌嗜水气单胞菌CL99920对实验蟹进行攻毒试验,嗜水气单胞菌的最佳攻毒剂量为5×106cfu/mL,对照组的死亡率为80%,明显高于中草药免疫组的死亡率30%,该中草药添加剂的免疫保护率为62 5%.     

小麦-杂粕饲料中添加纤维素复合酶制剂对樱桃谷肉鸭生产性能的影响

选用120羽健康的1日龄樱桃谷肉鸭苗,随机分为4组,每组3个重复,每个重复10羽.Ⅰ组饲喂小麦-杂粕基础日粮作为对照,Ⅱ—Ⅳ组分别饲喂添加了0.01%、0.015%和0.02%的纤维素复合酶的基础日粮.试验分为前期(1～14d)和后期(15～42d)2个阶段.结果表明:在试验全期,与对照组相比,添加纤维素复合酶的Ⅱ～Ⅳ试验组都能显著地提高樱桃谷肉鸭的末重、日增重、饲料效率,试验肉鸭末重分别提高了3.04%、4.91%、4.96%(P<0.01),日增重分别提高了3.1%、5.0%、5.1%(P<0.0 1),饲料效率分别提高了5.15%、11.03%、12.87%;提高肉鸭的成活率,1～42日龄肉鸭的成活率均提高了3.47%;能获得较好的经济效益,Ⅱ—Ⅳ组分别提高毛利润24.59%、46.22%、52.70%;Ⅱ组分别与Ⅲ组、Ⅳ组间差异显著(P<0.0 5),Ⅲ组与Ⅳ组间差异不显著(P>0.05).结果提示:小麦-杂粕型饲粮中添加纤维素复合酶可有效提高肉鸭的生产性能和经济效益,纤维素复合酶的适宜添加水平为0.015～0.02%.     

一种复方中草药免疫增强剂对牙鲆免疫力及抗病力的影响

为研究中草药复方制剂对牙鲆Paralichthys olivaceus免疫力及抗病力的影响,实验基于中草药药物功效与配伍原则,研制出一种复方中草药免疫增强剂(YLK),配方包含黄芪、茯苓、党参、蒲公英、鱼腥草、白花蛇舌草、金银花、玉竹、甘草、五味子等;将复方中草药分别以1%(W∶W)和3%(W∶W)的添加量拌入基础配合饲料中,连续投喂牙鲆30d,然后用迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda攻毒,分别于攻毒后24h和72h取鱼血清进行免疫相关酶活性测定,同时在攻毒后6,12,24,48,72h取鱼脾脏进行免疫相关基因表达水平的检测,并观察记录鱼体的累计死亡情况。结果表明,在迟钝爱德华氏菌感染后24h和72h,3%中草药添加组的牙鲆血清中碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)、酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)以及溶菌酶(Lysozyme,LSZ)活性水平均显著高于仅投喂基础饲料的对照组;1%中草药添加组除ALP活性以外,其他3种酶活水平也显著高于对照组(P0.05),2组不同中草药添加组鱼体血清酶活整体上差异不显著性;荧光定量PCR检测结果显示,各投喂组牙鲆脾脏组织中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、TCRα受体及C型溶菌酶基因表达量均出现不同程度的上调,而2个中草药投喂组牙鲆在感染后多个时间点的基因表达水平均高于单独投喂饲料组的牙鲆(P0.05);添加3%中草药和1%中草药对牙鲆抗迟钝爱德华氏菌感染的相对保护率分别为34.2%和26.3%。研制的复方中草药制剂具有明显的免疫增强效果,能显著提高牙鲆抗迟钝爱德华氏菌感染能力,研究结果将为水产养殖中草药防病技术研究提供重要参考。     

人参提取物对小鼠耐力影响的初步研究

以添加人参提取物的饲料饲喂小鼠,然后进行密闭缺氧实验和游泳抗疲劳实验,结果显示人参提取物可明显延长小鼠存活时间和持续、力竭游泳时间,从而表明人参可有效提高小鼠的耐缺氧能力和抗疲劳能力.     

过量添加氨基酸对生产性能有害

在许多玉米-豆饼猪,禽饲料中,由于蛋氨酸和赖氨酸是最主要的限制性氨基酸,因而其应用最为广泛.向饲料中添加结晶蛋氨酸和赖氨酸可促进动物生长、改善饲料利用率。 然而,无论是故意过量添加还是添加设备发生故障,氨基酸过量会提高饲料加工成本。如今看来,过量添加似乎还对生产性能有害. 为研究给鸡饲喂过量赖氨酸和蛋氨酸的后果,美国伊利诺斯大学Y.Hah和D.H.Baker做了3个试验,在这些试验中,研究人员均应用一种能满足NRC各类营养成分指标的玉米-豆饼基础饲料,其中包括蛋氨酸和赖氨酸.