桔梗皂苷对慢性支气管炎小鼠气道重塑的干预作用研究

探讨桔梗皂苷(kikyosaponin,简称KS)对慢支小鼠气道重塑的干预作用机制.将50只健康小鼠分成正常对照组,模型组和桔梗皂苷低、中、高剂量组,除正常组外,其余4组动物均采用烟熏加浓氨水吸入法建立慢支模型,然后分别用药物进行治疗.实验结束后,取各组小鼠肺组织进行石蜡制片,苏木精-伊红(HE)染色分析气管管壁厚度变化,Masson染色分析肺组织胶原沉积,采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件测量总管壁厚度(WAt/Pbm)、内壁厚度(WAi/Pbm)、平滑肌厚度(WAm/Pbm)以代表气道重塑指标;生化法检测肺组织中羟脯氨酸(Hyp)含量;免疫组织化学染色法观察MMP-9在肺组织中的表达;蛋白印迹术分析MMP-9和TIMP-1在肺组织中的表达水平.HE染色显示,模型组肺组织中支气管明显狭窄,管腔及肺泡中含有大量炎性分泌物,且气道重塑的三项指标均异常增高;免疫组化和三色法显示,模型组小鼠支气管和肺泡细胞中有大量的MMP-9表达,且有胶原蛋白增加明显,生化检测发现模型组小鼠肺组织中Hyp含量亦异常升高,且MMP-9和TIMP-1表达水平升高显著,与正常对照组相比,差异十分显著(P<0.01).在连续用药30 d后,与模型组相比,桔梗皂苷各剂量组能明显抑制慢支小鼠支气管胶原纤维增生,改善气道重塑各项指标;减少MMP-9和TIMP-1表达水平,使气管重塑得到显著的减轻(P<0.05,P<0.01,P<0.01).结果显示,桔梗皂苷可明显减轻慢支小鼠气道重塑的病理改变,其干预机制可能是通过清除慢支小鼠肺组织中的炎性因子和自由基的含量,同时又能抑制MMP-9和TIMP-1的表达,从而达到减少胶原蛋白的沉积以减轻气管狭窄而达到逆转气道重塑之目的.     

MMP-2、TIMP-2在小鼠原发性肝泡球蚴病中的表达及意义

为初步研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制剂(TIMP-2)在小鼠原发性肝泡球蚴病血清中的表达及意义。将60只12周龄健康雌性昆明小鼠分为空白组(20只)和肝泡状棘球蚴组(40只)。建模100d后分别提取2组小鼠血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2组小鼠血清中MMP-2和TIMP-2的浓度。结果显示:肝泡状棘球蚴组小鼠血清MMP-2、TIMP-2浓度均高于空白组(P<0.05),且MMP-2与TIMP的比例明显高于空白组。由此可知,小鼠血清MMP-2浓度的升高及MMP-2与TIMP-2比例的失衡可能和肝脏泡球蚴组织的侵润生长存在相关性。     

香烟烟雾联合脂多糖对气道炎症及衰老的影响

目的:观察熏烟联合脂多糖(LPS)对气道炎症及肺组织、上皮衰老的影响.方法:将C57雄性小鼠随机分为假熏烟联合假手术组,熏烟联合假手术组,假熏烟联合LPS组,熏烟联合LPS组,每天熏烟2次,3支/次,第28、42天小鼠气管内滴注LPS,实验7周后取材.结果:与假熏烟小鼠比较,熏烟小鼠体重下降明显(P0.05);与假熏烟联合假手术组小鼠对比,熏烟联合LPS组小鼠支气管灌洗液细胞总数和巨噬细胞计数明显增加(P0.05),气道灌洗液细胞过氧化物产出率明显增加(P0.05),肺组织中MMP12 mRNA和P21蛋白表达明显增加(P0.05).与假熏烟联合LPS组小鼠比较,熏烟联合LPS组小鼠肺组织IL-6 mRNA表达降低(P0.05),MMP12 mRNA表达升高(P0.05).香烟提取物(CSE)联合LPS处理的A549细胞β-gal阳性染色细胞数量高于空白组,CSE组和LPS组(P0.05).结论:香烟烟雾联合LPS气道滴注增加正常小鼠气道炎症和氧化应激,但增加水平低于单纯LPS滴注小鼠.香烟烟雾联合LPS增加气道细胞衰老和MMP12表达,且作用强于单纯LPS滴注.     

失血性贫血小鼠恢复过程中骨髓基质金属蛋白酶变化

目的:观察失血性贫血小鼠恢复过程中骨髓基质金属蛋白酶-2和-9(MMP-2,MMP-9)的变化,并探讨其在造血调控中的作用.方法:采用全自动血细胞分析仪、免疫组化和酶谱电泳法分别检测失血性贫血小鼠恢复过程中外周血RBC和Hb数量、骨髓细胞MMP-2和MMP-9表达以及骨髓造血微环境MMP-2和MMP-9的活性变化.结果:(1)与正常对照组相比外周血RBC和Hb数量失血后第1d急剧下降.随着恢复时间的延长,二者数目逐渐上升,到第9d已接近正常对照组水平.(2)在正常对照组检测到了较弱的MMP-2和MMP-9的表达.与正常对照组相比,失血后1d组、3d、5d和7d组小鼠骨髓细胞中MMP-2和MMP-9表达明显增加,MMP-2和MMP-9表达分别于失血后5d和3d达到峰值.与1d组相比,3d组小鼠骨髓细胞中MMP-2和MMP-9表达以及5d组小鼠骨髓细胞中MMP-2表达明显增加.(3)正常对照组中检测到proMMP-2,proMMP-9和MMP-9 3条酶带,MMP-9的活性最强.失血后1d,proMMP-2,proMMP-9和MMP-9的活性均急剧升高.随着恢复时间的延长,3者的活性逐渐降低,到第9d时恢复到接近正常对照组水平.结论:失血性贫血小鼠可能通过骨髓细胞中MMPs表达增加以及骨髓造血微环境中MMPs活性升高来促进骨髓造血功能增强,使外周血RBC和Hb的数量恢复到正常水平.     

mPEG5000修饰的VLA-4拮抗肽KILDVA对致敏性哮喘小鼠肺组织Eotaxin表达的影响

观察mPEG5000修饰的VLA-4拮抗肽KILDVA对小鼠哮喘性气道炎和肺组织CC型趋化因子Eotaxin表达的影响,探讨mPEG5000-KILDVA抗支气管哮喘的作用机制.采用卵清白蛋白(OVA)建立小鼠哮喘模型.观察小鼠的行为变化,制备小鼠血清,收集肺泡灌洗液进行白细胞总数和嗜酸性粒细胞计数;采用酶联免疫吸附法测定血清、支气管肺泡灌洗液中Eotaxin水平;免疫组化方法检测肺组织Eotaxin的表达.结果显示:模型组小鼠血清和支气管肺泡灌洗液中Eotaxin水平较正常组明显升高(p0.01);mPEG5000-KILDVA组比模型组明显减少(p0.05);mPEG5000-KILDVA组支气管与地塞米松组无显著差异(p0.05).模型组小鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞总数及嗜酸性粒细胞计数较正常组明显增加(p0.01);mPEG5000-KILDVA组较模型组明显下降(p0.05);mPEG5000-KILDVA组支气管与地塞米松组无显著差异(p0.05).模型组肺组织Eotaxin蛋白表达量较正常组明显升高(p0.01),mPEG5000-KILDVA组小鼠较模型组明显下降(p0.05);mPEG5000-KILDVA组支气管与地塞米松组无显著差异(p0.05).研究提示mPEG5000-KILDVA减轻哮喘小鼠的气道炎症与抑制哮喘小鼠肺组织Eotaxin的过度表达有关.     

红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌NF-κB p65与MMP-9表达的影响

目的:观察红芪多糖(HPS)对db/db小鼠心肌组织核转录因子(NF-κB p65)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白与mRNA表达的影响,探讨其防治心肌间质纤维化可能的作用机制.方法 :将60只雄性db/db小鼠随机分为5组:HPS高、中、低剂量组,罗格列酮组与模型组;12只雄性db/m小鼠为正常组.干预组小鼠连续灌胃8周,于干预前后每2周测空腹血糖、体质量各1次.第8周末心脏取血后,取心脏左室心肌组织,分别用于Masson染色、电镜观察心脏超微结构以及Western blotting、逆转录-免疫酶联反应(RT-PCR)法检测其NF-κB p65、MMP-9的蛋白与mRNA表达情况.结果:HPS干预8周后,与模型组比较:HPS高、中剂量组与罗格列酮组小鼠血糖下降明显(P0.05),干预组小鼠体质量变化无明显差异(P0.05);Masson染色可见亮绿色胶原纤维在心肌细胞间及血管周围明显增多且呈堆积状分布;电镜观察可见HPS高剂量组与罗格列酮组小鼠心肌组织内线粒体数量与破坏程度、糖原颗粒及脂滴沉积现象均有明显改善;Western blotting、RT-PCR检测结果显示,HPS高剂量组、罗格列酮组小鼠心肌组织中NF-κB p65、MMP-9的蛋白与mRNA表达量均明显降低(P0.05).结论:HPS可降低db/db小鼠心肌组织中NF-κB p65、MMP-9蛋白与mRNA的表达水平,减轻其炎症反应状态,对心肌的间质纤维化病变具有一定的防治作用.     

淫羊藿对早期兔膝骨性关节炎软骨的影响

目的:研究淫羊藿对早期兔膝骨性关节炎模型软骨的影响.方法:将18只新西兰大白兔随机取6只为正常组,12只制作兔膝骨性关节炎模型;2周后待兔膝骨性关节炎模型建立,均行MRI检查,再将12只造模兔随机分为模型组6只、药物组6只.第15日起每天开始予药物组淫羊藿按质量分数为1 g/kg灌胃,模型组及正常组则给予等量蒸馏水,所有实验兔灌胃4周后,再行MRI检查,测量信噪比(SNR)、T1ρ值,取胫骨平台用实时PCR测定软骨中MMP-3mRNA表达水平,股骨远端行HE和番红-固绿染色.结果:造模2周后,造模组SNR值低于正常组(P0.05),T1ρ值高于正常组(P0.01);经治疗后,药物组SNR值高于模型组(P0.01),T1ρ值低于模型组(P0.05).模型组较正常组MMP-3mRNA表达水平增加(P0.05),关节软骨组织结构破坏严重,软骨细胞外基质中蛋白多糖减少;药物组较模型组MMP-3mRNA表达水平下降(P0.05),软骨结构破坏减轻,蛋白多糖丢失明显减少.结论:淫羊藿可减缓膝骨性关节炎的软骨退变,可能与减少蛋白多糖的丢失、下调软骨中MMP-3的表达有关.     

MMP-2在胃癌组织中表达及意义

目的探讨MMPs在胃癌组织中的表达及意义.方法 SP免疫组化法检测胃癌组织、区域淋巴结、正常胃黏膜中MMPs的表达,同时分析其与胃癌患者人口学特征、疾病特征、病理学特征的关系.结果与正常胃黏膜比较,胃癌组织中MMP-2的阳性表达率明显升高,差异具有统计学意义(P0.05).胃癌区域淋巴结组织中,有转移淋巴结组MMP-2的阳性表达率明显高于无转移淋巴结组,差异具有统计学意义(P0.05);胃癌区域淋巴结组织中,MMP-2表达阳性组淋巴结转移率明显高于表达阴性组,差异具有统计学意义(P0.05).胃癌组织中MMP-2的表达随着分化程度降低、浸润深度加深、淋巴结转移、临床分期增加而明显增强,差异具有统计学意义(P0.05).胃癌组织中MMP-2表达阳性组患者5 a生存率明显低于表达阴性组,差异具有统计学意义(P0.01);胃癌区域淋巴结组织中MMP-2表达阳性组患者5 a生存率明显低于表达阴性组,差异具有统计学意义(P0.01).结论 MMP-2异常表达在胃癌的侵袭、转移中发挥关键作用;区域淋巴结组织中MMP-2表达异常与淋巴结转移及患者预后有关.     

晚孕期阴道壁结缔组织Ⅰ型胶原和TIMP-1表达分析

目的:探讨妊娠晚期妇女阴道壁结缔组织中Ⅰ型胶原蛋白和基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)mRNA表达改变及二者间的相关性。方法:选取20例无妊娠合并症的足月顺产产妇为晚期妊娠组。另选取未绝经、无盆底功能障碍,因患子宫肌瘤或子宫腺肌症行全子宫切术患者15例为对照组,应用免疫组化和荧光定量PCR法检测标本中Ⅰ型胶原和TIMP-1 mRNA表达水平。结果:晚期妊娠组Ⅰ型胶原蛋白和TIMP-1 mRNA表达水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论:妊娠、分娩下调TIMP-1基因转录水平表达,促进胶原蛋白分解增加,盆底支持功能减弱,可能是妊娠晚期盆底松弛及产后盆底功能障碍的重要发病机制之一,也是妊娠、分娩作为PFD的独立危险因素的重要原因。     

天灸对哮喘模型大鼠气道重构的影响

目的:观察天灸防治支气管哮喘中对气道重构的影响.方法:采用卵蛋白等致敏建立大鼠哮喘模型,肺组织行HE染色,镜下观察支气管平滑肌、胶原的病理改变,气道腔直径和面积.结果:天灸组胶原含量、气道平滑肌厚度明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),气道内腔直径、面积明显大于模型组.结论:天灸可防止气道增厚,具有抑制气道重建的作用.     

MMP-2、MMP-9及其抑制剂在肺癌中的表达与临床意义

目的探讨肺癌组织中MMP2、MMP9及其抑制剂的表达与肺癌的生长、转移等临床特征及预后的关系.方法采用免疫组织化学法SP法检测45例肺癌组织中MMP2、MMP9及其抑制剂的表达,观察它们与肺癌的生长、TMN分期的关系.结果MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP2在45例肺癌组织中的阳性表达率分别为57.78%(26/45)、37.78%(17/45)、35.56%(16/45)及51.11%(23/45);它们的表达与肺癌的原发灶范围、淋巴结转移、远处转移、TNM分期及平均生存时间有统计学意义(P<0.05).结论MMP2、MMP9及其抑制剂的表达与肺癌的TNM分期及平均生存时间关系密切,它们在组织中的高表达是判断肺癌预后的独立因素.     

北五味子多糖对异丙肾上腺素致大鼠心室重构的保护作用

目的观察北五味子多糖(Schisandra chinensis polysaccride,SCP)抗异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导的心室重构作用并探讨其作用机制.方法异丙肾上腺素皮下注射致心室重构模型,经SCP低、中、高(25,50,100 mg/kg)3个剂量组和阳性对照卡托普利(50 mg/kg)治疗后,观察其对心肌病理学改变、心室重量(HW/BW)和心室重量指数(LVI)、羟脯氨酸(Hyp)含量、Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量及Western blot技术检测心肌组织中TGF-β1表达的影响.结果 SCP不同剂量组均能降低HW/BW和LVI(P0.05或P0.01),降低羟脯氨酸含量(P0.05或P0.01)),降低心肌组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量(P0.05或P0.01或P0.001),减轻TGF-β1在心肌组织中的表达(P0.05或P0.01或P0.001),抑制心室重构.结论 SCP能够通过抑制TGF-β1的表达来对抗ISO诱导的大鼠心室重构.     

糖皮质激素对高氧诱导的新生小鼠肺功能损伤、炎症反应和JAK2/STAT5通路的影响

目的探究糖皮质激素(Glucocorticoid,Gluc)对高氧诱导的新生小鼠肺功能损伤、炎症反应和JAK2/STAT5通路的影响,为治疗肺功能损伤提供理论依据。方法构建肺损伤小鼠模型,将小鼠随机分为:对照组、Hyperoxia组、低剂量Gluc组、中剂量Gluc组、高剂量Gluc组。通过动物肺功能分析系统检测静息通气量、气道阻力、气道压力、肺容积、最大吸气流量。HE染色和TUNEL染色观察小鼠肺脏组织形态和细胞凋亡情况; RT-PCR、Western Blot检测α-SMA、TGF-β表达量; Elisa检测IL-6、MCP-1、iNOS含量; Western Blot检测JAK2、STAT5的磷酸化情况。结果与对照组相比,Hyperoxia组小鼠静息通气量、气道阻力、气道压力、肺容积、最大吸气流量显著降低(P <0. 05),细胞凋亡数、α-SMA与TGF-β表达量、EOS比值、IL-6、MCP-1、iNOS含量均显著增加(P <0. 05),且JAK2、STAT5磷酸化水平显著升高(P <0. 05)。而中、高剂量Gluc可显著逆转高氧对小鼠以上指标的影响。此外,Hyperoxia组小鼠出现肺实质结构紊乱、肺泡间隔增宽等组织形态的改变,在低、中、高剂量Gluc组中组织形态改变程度逐渐降低。结论糖皮质激素可缓解肺组织损伤并下调模型小鼠肺脏组织中炎症因子含量,同时抑制JAK2/STAT5通路活性,对高氧诱导的肺组织损伤具有较好的治疗作用。     

肺结核及病变转归患者血清MMP-2及TIMP-2检测的临床意义

[目的]探讨肺结核（PTB）及病变转归患者血清中基质金属蛋白酶2（MMP-2）及基质蛋白酶组织抑制剂2（TIMP-2）含量关系,以期为监测PTB患者病情变化及判断结核病治疗效果提供理论依据.[方法]酶联免疫（ELISA）法检测60 例肺结核患者及 20 例无肺部疾病患者（对照组）的血清MMP-2 及 TIMP-2含量,同时进行肺功能检查.[结果]浸润型肺结核（MMP-2:157.52±21.04;TIMP-2:185.15±14.08）及慢性纤维空洞型肺结核（MMP-2:169.48±18.13;TIMP-2:208.60±17.06）显著高于肺功能正常及其他类型的结核病患者（差异显著,均有统计学意义（p<0.01））.当PTB疾病逐渐转归并且痊愈,MMP-2 与TIMP-2的含量比例逐渐接近肺功能正常组.[结论]MMP-2、TIMP-2的含量关系在监测及治疗该两类结核病上具有一定的临床价值.     

甘草苷对感染后咳嗽(肺阴虚证)小鼠的止咳作用机制及抗氧化作用的研究

为探讨甘草苷对感染后咳嗽(肺阴虚证)小鼠的止咳疗效及抗氧化的作用机制.采用烟熏＋内毒素(LPS)滴鼻＋甲状腺素灌胃＋辣椒素雾化诱咳来构建感染后咳嗽(肺阴虚证)小鼠模型；造模成功后随机分为空白组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性组(孟鲁司特钠)和甘草苷低、中、高剂量组；观察造模前后各组小鼠的行为学及体质量变化，采用辣椒素雾化诱咳来测定各组小鼠的咳嗽敏感性及咳嗽次数，通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清中炎症与肺组织中抗氧化损伤相关蛋白水平变化并经由苏木精-伊红(HE)染色法来观察各组小鼠的肺组织病变.结果表明，甘草苷止咳的作用机制可能为有效减少小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-13、TLR2、TGF-β1、IgE等细胞因子及炎性介质的释放，进而减轻气道感染性及变态性炎性反应环境来降低咳嗽高敏感性，减少对咳嗽中枢的刺激来达到止咳的目的；抗氧化的作用机制可能为有效提高小鼠肺组织中SOD的含量，减少小鼠肺组织中MDA的含量，来改善体内抗氧化平衡系统的紊乱，有效清除机体中的过量自由基，提高机体内抗氧化酶的含量，以减轻氧化损伤来达到抗氧化的目的.     

Expression and regulation of metalloproteinases-2, -9 and tissue inhibitors of metalloproteinases in rat corpus luteum

The expression and regulation of metalloproteinases-2, -9 (MMP-2, -9) and their tissue inhibitors TIMP-1, -2, -3 mRNA were studied in this experiment. In the PMSG- hCG primed pseudopregnant rat, MMP-2, -9 mRNA levels were the highest at Day 1, decreased from Day 4, and reached the minimal level at Day 8, then increased at Day 14; no significant changes were observed in TIMP-2 mRNA expression from Day 1 to Day 14; TIMP-3 mRNA expression was the lowest at Day 1, increased from Day 4, reached the maximal level at Day 8, and persisted to Day 14. TNF-αcould significantly increase the expression of MMP-2, -9 and TIMP-1 mRNA in the in vitro perfused pseudopregnant CL, and decrease the expression of TIMP-3 mRNA, but had no effect on TIMP-2 mRNA expression. The results indicate that MMP-2, -9 and TIMP-1, -2, -3 might be involved in the regulation of CL function and maintenance of CL structure via their coordinated gene expression. TNF-α could inhibit luteal regression via increasing MMP-2, -9 and TIMP-1 mRNA in the in vitro perfused pseudopregnant ovary.     

Correlation of matrix metalloproteinase－2, －9, tissue inhibitor－1 of matrix metalloproteinase and CD44 variant 6 in head and neck cancer metastasis

This study aimed to explore the molecular mechanism in tumor invasion and metastasis. The expression of matrix metalloproteinase-2, -9 (MMP-2, MMP-9), tissue inhibitor-1 of matrix metalloproteinase (TIMP-1), cell adhesion molecule 44 variant 6 (CD44v6), HER2/neu and p53 was investigated in 154 patients with head and neck squamous cell carcinoma (SCC) by ABC and ImmunoMax immunohistochemical method. Their clinical relevance and correlation were analysed. The expression of MMP-2, MMP-9, TIMP-1, CD44v6, HER2/neu and p53 was found in cancer cells in 87.01%, 85.71%, 68.18%, 98.05%, 55.19% and 50.65% cases respectively. Linear regression and correlation analysis revealed that there was close positive relationship (P<0.05) between the expression of MMP-2 and MMP-9, TIMP-1 and CD44v6, HER2/neu and MMP-9, MMP-2 and p53. Up-regulation of MMP-2 was accompanied by advanced T stage (P<0.01). There was also a trend of MMP-2 expression being related with tumor metastasis. Increased expression of HER2/neu was found in patients with tumor recurrence(P<0.05). The expression of TIMP-1 was higher in laryngeal cancer than that in pharyngeal cancer, and higher in keratinizing and non-keratinizing SCC than that in basaloid SCC(P<0.05). These findings suggested that MMP-2 and MMP-9, HER2/neu and MMP-9, MMP-2 and p53 had a coordinate function in aggression of tumor; that MMP-2 had a more important function than MMP-9 in tumor invasion and metastasis; and that HER2/neu might serve as a biomarker for poor prognosis in HNSCC.     

博来霉素和内毒素诱导两种品系小鼠肺纤维化模型的比较研究

目的 通过比较博来霉素和内毒素诱导ICR、C57BL/6两个品系小鼠的肺纤维化程度,从而建立合适的小鼠肺纤维化模型。方法 分别将ICR、C57BL/6两个品系小鼠随机分为对照组、博来霉素组、内毒素组。博来霉素组向气管注射博来霉素(5 mg/kg体质量),内毒素组尾静脉注射内毒素(40 EU/kg体质量),对照组气管注射等量生理盐水。两个品系的对照组、博来霉素组、内毒素组分别于造模后第7、14、28天各处死8只,观察小鼠一般情况,测量小鼠肺系数;采用HE染色观察肺组织病理学变化; ELISA法检测肺组织中羟脯氨酸的含量。结果 与对照组相比,两个品系的博来霉素组和内毒素组的肺系数、肺组织羟脯氨酸含量均不同程度增加,有显著性差异(P0. 05)。结论 C57BL/6小鼠对博来霉素和内毒素更敏感。博来霉素、内毒素均能够制备小鼠急性肺损伤肺纤维化模型。